版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
1、微生物的生理生化反应,一、目的要求,1.了解细菌的一般生化反应; 2.了解细菌的生化鉴定方法其原理,二、实验材料,菌种:大肠杆菌;枯草杆菌;变形杆菌;自己分离的大肠杆菌。 培养基:糖发酵培养基(葡萄糖)(紫色液体内带指管); H2S试验用培养基(黄色固体); 蛋白胨水培养基(黄色液体,吲哚试验用); 淀粉培养基(黄色固体需融化倒平板); 葡萄糖蛋白胨水培养基(黄色液体,甲基红,VP试验用)*。 试剂:吲哚试剂;碘液;甲基红试剂;VP试剂,三、实验原理及方法,由于各种微生物的新陈代谢类型不同,因此,对各种物质 利用后所产生的代谢产物也不同,我们可以用化学反应来测定 微生物的代谢产物,这种反应称为
2、生化反应。 生化反应常用来鉴别在形态或其它方面不易区别的微生 物,例如:肠道细菌中,大肠杆菌和伤寒杆菌,二者在形态上 不易区分,但前者能发酵乳糖,后者不能。因此可以从它们能 否发酵乳糖来区别它们,所以微生物的生化反应是微生物分类 鉴定的重要依据之一,1.糖发酵试验,糖发酵试验是常用的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤 为重要,绝大多数细菌都能利用糖类作为能源及碳源,但是细 菌的分解糖类的能力上有相当大的差异,某些菌能使某些单糖 或双糖分解,并产酸(乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(甲烷、 氢、二氧化碳),或者只产酸而不产生气体。酸和气体的产生 与否,可以由培养后试管指示剂的颜色变化和小套管内气泡的 有无
3、来判定。当发酵产酸时,指示剂溴甲酚紫由紫色(pH6.8) 变为黄色(pH5.2)。 其步骤如下,1)取盛有葡萄糖发酵培养基的试管四支(内装有 小套管),一支接种大肠杆菌,第二支接自己分离的 大肠杆菌,第三支接枯草杆菌,第四支不接种,作空 白对照。在各试管上标明菌名和组别,置37培养 24小时观察。 大肠杆菌、自己分离的大肠杆菌、枯草杆菌、对照,2)观察结果:经培养后,指示剂呈黄色者表示为 阳性,同时观察小套管中有无气泡产生。 “+”表示产酸;“”表示产酸产气;“-”表示阴性,2吲哚试验,某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲 哚。吲哚与对二甲基氨苯甲醛结合,形成玫瑰吲 哚,此为红色化合物,其反
4、应变化如下,1)取蛋白胨水培养基试管四支,分别接种大肠杆菌,自己分 离的大肠杆菌,枯草杆菌,留一支作空白对照,并在试管上注 明菌名和组别,置37培养24小时。 (2)培养后取出,在培养液中先加入乙醚约1毫升(使呈明显 的乙醚层),充分振荡,使吲哚溶于乙醚中,静置片刻,使乙 醚层浮于培养基的上面,这时再沿管壁慢慢加入吲哚试剂510 滴,观察有无红色出现。有红色环出现者为阳性,黄色者为阴 性。 (注意:加入试剂后不可再摇动,否则被混合,红色不明显。) 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照,3产硫化氢试验,某些菌能分解含硫的有机物或无机物产生硫化氢(H2S),H2S 遇金属盐类,如铅盐、
5、铁盐等,则形成黑色的硫化铅或硫化铁 的沉淀物。从而可断定H2S的产生与否。 其测定方法有两种: 一种是用含有柠檬酸铁铵的培养基穿刺培养,看是否有黑 色沉淀(本实验采用); 另一种是在盛有液体培养基的试管中接种菌以后,在试管 的棉塞下吊一片醋酸铅试纸,经培养后看醋酸铅试纸是否变黑。 其步骤如下,1)取H2S试验用培养基四支(内含有柠檬酸铁铵),分别用 穿刺法接种大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌和变形杆菌,留一 支空白,试管上注明菌名和组别,置37培养24小时。 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,变形杆菌,空白对照。 (2)培养后取出观察,看有无黑色沉淀产生,4伏一普(Voges-proskauer)试验
6、, 即VP反应,某些菌生长于葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡 萄糖产生丙酮酸,而丙酮酸又可缩合、脱羧而转化 成乙酰甲基甲醇,如加入强碱液,即与空气中的氧 起作用产生二乙酰,二乙酰与蛋白胨中的含胍基成 分作用生成红色化合物,称阳性反应,没有红色化 合物产生则称阴性反应,实验步骤,1)取葡萄糖蛋白胨水培养基四支,分别接种大肠杆菌,自己 分离的大肠杆菌,枯草杆菌,留一支作空白对照,并在试管上 注明菌名和组别。置37培养24小时。 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照。 (2)培养后取出,加入5-10滴40%KOH及等量的VP试剂液,用 力振荡,放置37温室15-30分钟,呈红色者为阳性,不
7、呈 红色者为阴性,5甲基红试验(MR试验,某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能产生大量的 酸,使pH降低至45,它先产生丙酮酸,丙酮酸再被 分解成甲酸、乙酸、乳酸等。酸的产生可由加入甲基 红指示剂的变色而指示(有效pH范围为4.26.3)。 细菌分解葡萄糖产酸,则培养液由原来的桔黄色, 变为红色,即为甲基红反应,实验步骤,1)取葡萄糖蛋白胨水培养基四支,一支接种大肠杆菌,第二 支接自己分离的大肠杆菌,第三支接枯草杆菌,第四支不接 种,作空白对照。在各试管上标明菌名和组别,置37培养 24小时。 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照。 (2)培养后取出,沿管壁加入甲基红指示剂34滴上层
8、呈红色 者为阳性,6淀粉水解试验,某些细菌可以产生能水解培养基中淀粉的淀粉酶 (胞外酶),使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖,再被细 菌吸收利用。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色,实验步骤,1)淀粉培养基在水浴中融化后,冷至50,以无菌操作 制成平板。用接种环取少量枯草杆菌在平板的一边划“+”字 形接种(或点种),另取少量大肠杆菌菌在平板的另一边 接种,在各培养皿底部标明菌名和组别。置37温箱中培 养1620小时。 大肠杆菌,枯草杆菌,2)观察结果:打开皿盖,滴加少量碘液于培养基 上,轻轻旋转培养皿,使碘液均匀铺满整个平板。如 果在菌周围出现无色透明圈,说明淀粉被水解。透明 圈大小说明该菌水解淀粉能力的大小
9、,五、结果与思考题,1将实验结果填于书P120表中 试验结果:“+”表示阳性反应;“-”表示阴性反应。 2细菌的生化反应试验意义何在,糖发酵试验:糖发酵培养基, 大肠杆菌、自己分离的大肠杆菌、枯草杆菌、空白对照。 2、H2S试验:半固体培养基, 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,变形杆菌,空白对照。 3、吲哚试验:蛋白胨水培养基; 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照。 4、淀粉水解试验:淀粉培养基到平板; 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照。 5、VP反应:葡萄糖蛋白胨水培养基*。 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照。 6、甲基红试验(MR试验):葡萄糖蛋白胨水培养基*。 大肠杆菌,自己分离的大肠杆菌,枯草杆菌,空白对照,糖发酵试验:经培养后,指示剂呈黄色者表示为阳性,同时观察小套管中 有无气泡产生。“+”表示产酸;“”表示产酸产气;“-”表示阴性。 2.H2S试验:培养后取出观察,看有无黑色沉淀产生.有“+” 3.吲哚试验:在培养液中先加入乙醚约1毫升(使呈明显的乙醚层),充分振 荡,使吲哚溶于乙醚中,静置片刻,使乙醚层浮于培养基的上面,这时再沿 管壁慢慢加入吲哚试剂510滴,观察有无
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 2024年家具安装项目规划申请报告模板
- 2024年地板胶项目提案报告模板
- 2024年卧式离子风机项目提案报告模板
- 长江大生产测井原理教案第3章 流体密度及持水率测量
- 西南石油大天然气工程讲义第5章 气井管流及节流动态
- 房建EPC项目工程造价控制的方法与措施
- 石油工程双语版课件05钻井技术及钻井问题
- 10.4 三元一次方程组-苏科版数学七年级下册同步课件
- 2024-2034年中国B2B电子商务行业发展潜力分析及投资方向研究报告
- 2024届吉林省长春汽车经济技术开发区六中高考压轴卷化学试卷含解析
- The Three Goats(课件)译林黑布林分级绘本
- 脊柱转移瘤评分
- it项目管理4.14最终项目用户移交报告模板
- 垃圾焚烧锅炉水压试验方案
- 弹塑性力学.ppt
- 矿山生态修复
- 1苏铁科银杏科.ppt
- 筑业广东省建筑工程资料表格填写范例与指南.doc
- 香港公司条例.docx
- PMC经理岗位职责说明书.doc
- 医院人事科讲规矩守纪律发言稿
评论
0/150
提交评论