3-环己胺丙磺酸在WB印迹中的应用_第1页
3-环己胺丙磺酸在WB印迹中的应用_第2页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、湖北新德晟材料科技有限公司CAPS环己胺丙磺酸CAS1135-40-6在WB实验中的应用环己胺丙磺酸CAPS是一种常用的生化原料，可以用作助焊剂、干燥剂、涂料中水性异氰酸酯的固化剂，在生化行业，通常作为生物缓冲剂。根据其纯度和杂质含量的不同，应用的行业也不相同。从分子结构上看，CAPS是一种环己烷N-取代的氨基磺酸，分子量221.32，具有两性，是一种非常好的生物缓冲剂，pH缓冲范围9.7-11.1，通常被用作WB实验蛋白质PVDF转膜或硝酸纤维素NC转膜的缓冲液。WB即western blot 蛋白质免疫印记实验，原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物样品进行着色，通过分析着色的位

2、置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。实验注意事项如下：CAPS试剂1. SDS-PAGE电泳：与核酸杂交方法类似，只不过被检测的是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。一般来说低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine缓冲体系，高分子量蛋白则用CAPS缓冲系统更好。缓冲液中的甘氨酸会影响测序，所以现在测序用的转膜缓冲液是10mM/1CAPS10%甲醇。CAPS电印记缓冲液中的甲醇浓度范围是020%，一般甲醇浓度高的缓冲液对低分子量蛋白质的转移效果好，而甲醇浓度低甚至不含甲醇的缓冲液则有利于高分子量蛋白的转移。2. PVDF膜处理时先放入甲醇浸泡几秒钟，再放入CAPS电印记缓冲液，后续操作须防止膜干涸，如果PVDF膜变干，需要重复前面步骤。电泳凝胶也需要在CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟，有些强碱性蛋白可不用此步骤。3. 转印条件通常是50V恒压、100-170mA电流强度，室温下进行电印记转移，凝胶和PVDF膜之间的气泡务必除尽，分子量较高的蛋白注意延长转移时间。4. PVDF膜染色前需取出用去离子水稍微漂洗，用甲醇浸泡，然后用0.1%考马斯亮蓝染色30-50秒，50%甲醇脱色，去离子水洗涤并晾干即可。以上介绍了蛋白质印记实验需要注意的

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 石油石化

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论