临床免疫学检查

1、临床免疫学检查临床免疫学检查 免疫：机体对刺激的反应 n外界刺激：通常而言的免疫反应，如 SARS，禽流感，甲型流感等 n内在刺激：自身免疫反应，如自身免疫 病（类风湿关节炎等） n免疫反应：抗原刺激，产生抗体，形成 免疫复合物，激活补体，免疫效应。 n检测对象：抗原，抗体，免疫细胞，补 体 免疫学检查免疫学检查 n免疫学检查已成为医学检验中的重要组免疫学检查已成为医学检验中的重要组 成部分成部分 n特点：特点：特异性强、敏感性高、稳定简便、特异性强、敏感性高、稳定简便、 快捷，应用日广快捷，应用日广 n应用：应用：检测具有免疫活性的物质检测具有免疫活性的物质 如抗原、如抗原、 抗体、补体等；

2、检测体液中其他微量物抗体、补体等；检测体液中其他微量物 质，如激素、酶、血浆微量蛋白等质，如激素、酶、血浆微量蛋白等 临床免疫学检查的应用意义 n诊断和鉴别诊断 n疗效观察 n预后判断 n值得注意：任何临床免疫学的检查结果 都必须结合临床症状的特点综合判断， 它只能提供支持诊断的信息，而不是确 定诊断的确凿证据。 临床常用免疫检测 n体液免疫检测 n细胞免疫检测 n感染免疫检测 n肿瘤标志物检测 n自身抗体检测 n移植免疫检测 体液免疫检测 n免疫球蛋白检测 n补体检测 免疫球蛋白检测 n免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是指具 有抗体活性和(或)抗体样结构的球蛋白. nB淋巴细

3、胞被激活，转化成浆细胞，产生 抗体，即免疫球蛋白 n存在于血液、体液、外分泌液和某些细 胞的胞膜上 n血液、体液、外分泌液中免疫球蛋白结 合抗原；而细胞膜上的免疫球蛋白能特 异性识别抗原，并激活细胞 免疫球蛋白G n免疫球蛋白G (immunoglobulin G,IgG)含 量多，占70%-80%. n对病毒、细菌和寄生虫均有抗体活性 n能够通过胎盘 免疫球蛋白A n免疫球蛋白A (immunoglobulin A,IgA)分 为血清型和分泌型. n血清型占 10%-15% n呼吸道、消化道和泌尿生殖道的淋巴组 织能合成大量的分泌型IgA 免疫球蛋白M n免疫球蛋白M (immunoglob

4、ulin M,IgM) 分子量最大，约占5%-10%. n能凝集和溶解细胞 n天然同族凝集素、伤寒沙门菌的抗体属 于此类 检测方法 n单向免疫扩散：抗Ig的血清（抗-抗体） 混合于琼脂糖凝胶板内，打孔，加样。 待测标本中的相应抗原（Ig）则产生扩 散，与抗血清形成沉淀环，沉淀环的面 积与相应抗原含量相关 n免疫比浊法：原理基本同上，即浊度与 相应抗原含量相关 n正常值 依检测方法而异 临床意义 nIgG、IgA、IgM均升高 见于慢性感染、慢性肝病、肝硬化、淋巴 瘤和某些自身免疫病 n单一免疫球蛋白增高 见于免疫增殖性疾病 如多发性骨髓瘤、 原发性巨球蛋白血症 n免疫球蛋白降低 见于先天性和获

5、得性免疫缺陷病、免疫抑 制剂治疗后及某些代谢性疾病、某些重 链病和轻链病 M蛋白检测 nM蛋白(M protein)或称单克隆免疫球蛋 白(monoclonal immunoglobulins). n具有相同的结构和电泳迁移率 n不具备抗体活性 n检测方法: 蛋白电泳法、免疫比浊法或免 疫电泳法 n参考值: 阴性 n临床意义 出现见于:多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、 重链病、轻链病、半分子病、恶性淋巴 瘤、良性M蛋白血症 血清补体检测 补体系统功能： n广泛参与机体的抗感染防御反应 n介导细胞溶解 n调理吞噬 n免疫黏附 n参与炎症反应引起机体免疫损伤等 血清总补体活性测定 n检测方法：补体最主

6、要的活性是溶细胞 作用，这种活性很容易通过溶血反应进 行检测。溶血程度与血清中补体量呈正 相关，临床一般以50%溶血率作为判别 点（CH50）。 n参考值：试管法50000-100000U/L nCH50反映的是经典途径的补体综合水平 n临床意义： CH50活性升高：急性炎症、急性组织损伤、恶 性肿瘤、及妊娠等。 CH50活性降低：急性肾小球肾炎、自身免疫性 疾病、亚急性感染性心内膜炎、慢性肝病、肝 硬化、Graves病、艾滋病等。 血清补体C3、C4检测 n检测方法：单向免疫扩散法或免疫比浊法 n参考值：根据检测方法 n临床意义： 增高：急性炎症、传染病早期、急性组织损伤、恶 性肿瘤、移植排

7、斥反应、某些自身免疫病等。 降低： 合成减少：慢性肝病；原料不足：营养不良； 消耗或丢失过多：SLE等自身免疫病；先天性补 体缺乏 细胞免疫检查 n淋巴细胞包括T 、 B 、 NK（natural killer cell）等细胞群，他们又分别有不同 亚群 n细胞因子由免疫细胞及相关细胞产生， 通过调节免疫功能参与机体抵抗疾病或 参与疾病发生 T淋巴细胞表面标志物测定 nT细胞功能细胞功能：识别抗原、传递信息、促进细胞活化、 增殖和分化。 n检测方法检测方法：主要有免疫荧光法 (FACS)或流式细胞术 检测白细胞分化抗原（cluster differentiation，CD） nT细胞分类细胞分

8、类：依其表面标志物的不同, T细胞分为不 同的亚群，CD3+ 代表总T细胞，CD4+代表T辅助 细胞（TH），CD8+ 代表T抑制细胞（Ts） n参考值参考值: 流式细胞仪检测： CD3+ 61%-85% CD4+ 28%-58% CD8+ 19%-48% 临床意义 nCD3+增高: 见于甲亢、甲状腺炎、重症 肌无力、排斥反应等 nCD3+降低: 见于自身免疫性疾病如SLE nCD4+降低:不易激活T细胞，见于恶性肿 瘤、某些病毒感染、应用免疫抑制剂、 严重创伤、遗传性或获得性免疫缺陷病等 nCD8+降低:免疫过强，见于自身免疫性疾 病或变态反应性疾病 临床意义 nCD4+/ CD8+比值升高

9、:自身免疫病、病 毒感染及变态反应等 nCD4+/ CD8+比值降低:见于AIDS，恶性 肿瘤活动或复发期 n器官移植后检测CD4+/ CD8+比值增高提 示可能出现排斥反应 B细胞分化抗原检测 n检测方法同T淋巴细胞 n早期及成熟B细胞均表达CD19，前者还 表达CD10，而后者还表达CD20、CD21 、CD22、CD23 nB细胞升高见于淋巴细胞白血病及某些自 身免疫病等，降低见于无丙种球蛋白血 症及化疗和免疫抑制剂治疗后 细胞因子(cytokine,CK)检测 n由免疫细胞和相关细胞产生，属于分泌 性蛋白质，参与机体抵抗疾病的反应， 也参与某些疾病的发病过程 n常见种类有IL、TNF、

10、IFN、集落刺激因 子、红细胞生成素等 n在各种感染、肿瘤及自身免疫性疾病中 常常出现多种细胞因子的升高或降低 细胞因子(cytokine,CK)检测 细胞因子是细胞与细胞间相互沟通的信 号之一，细胞因子之间彼此诱生，相互 协同或拮抗作用，参与免疫细胞的成熟 及分化为效应细胞的全过程； Th1型细胞因子主要包括： IL 2、 IFN ，TNF-，主要生物学作用： 促进T细胞分化，成熟和增殖，包括增强 CTL细胞毒活性和介导迟发型超敏反应； 细胞因子(cytokine,CK)检测 Th2型细胞因子主要包括：IL 4、IL 6、IL 10，主要作用：促进B细胞 成熟，分化和增殖，刺激B细胞生成抗体

11、 和介导变态反应; Th17作为一种近年来被发现的在炎症性 疾病和自身免疫疾病中起主导作用的效 应T细胞，其产生的特征性细胞因子白介 素17 (IL-17)越来越广泛地受到关注 感染免疫检测 n细菌感染免疫 n病毒感染免疫 n寄生虫感染免疫 n性传播疾病免疫 一 细菌感染免疫检测 抗链球菌溶血素“O”测定 n链球菌溶血素O是A族溶血性链球菌 的重要代谢产物 n具有溶血活性，杀伤白细胞和血小板 n具有抗原性，刺激机体产生抗体，称为 抗链球菌溶血素O(anti-streptolysin O,ASO) n检测方法: 乳胶凝集法或免疫比浊法 n参考值:免疫比浊法 200 U/L 临床意义 nASO升高

12、: 见于A族溶血性链球菌感染引 起的疾病，如感染性心内膜炎、扁桃体 炎、风湿热以及链球菌感染后肾小球肾 炎等 n感染后一周ASO开始升高，4-6周达高峰. 可持续几个月或几年. n确有感染依据，但ASO持续阴性,可能是 早期用过大量抗生素或免疫抑制剂等 肥达(Widal)反应 n伤寒沙门菌属于沙门菌的D群,副伤寒甲, 乙,丙沙门菌属于沙门菌属中的A,B和C群 n为革兰氏阴性短杆菌 n伤寒沙门氏菌含有菌体O抗原和鞭毛 H抗原 n副伤寒甲、乙、丙分别有不同的菌体和 鞭毛抗原分别称为A、B、C n感染后一周，机体产生抗体（10%），第 二周（60%-70%），第四周达高峰（90% 以上） 检测方法

13、n将伤寒、副伤寒沙门菌的菌液（作为 抗原）分别与患者的血清（抗体）在 生理盐水介质中进行凝集反应 n参考值: 伤寒 O凝集价1:80 伤寒 H凝集价1: 160 副伤寒A、B、C凝集价4倍，诊断 价值较大 n早期使用抗生素、激素以及免疫功能低 下的伤寒患者，肥达反应可出现假阴性 （发生率约10%左右） C反应蛋白测定 nC反应蛋白( C-reactive protein,CRP )是 一种能与肺炎链球菌C多糖发生反应的急 性时相反应蛋白，具有激活补体、促进 吞噬和免疫调理作用 n主要由肝脏产生 n检测方法: 免疫比浊法 n参考值: 成人8.2 mg/L CRP增高的临床意义 n组织损伤：如心梗

14、，烧伤及大手术后 n各种细菌感染 n风湿热活动期 n恶性肿瘤 n某些结缔组织病 n有利于鉴别器质性和功能性疾病 二 病毒感染免疫检测 n自然界病毒种类繁多，目前人类知晓者仅数十 种，能检测者不过十数种 n风疹病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒（CMV ）临床常用，可检测抗体，IgG型抗体阳性提 示既往感染，IgM型抗体阳性则提示近期感染 nEB病毒也较常见，可以嗜异性凝集试验及吸收 试验检测，也可以检测抗体，评价方法同上 n还有多种病毒如H1N1流感病毒、轮状病毒 、 柯萨奇病毒及呼吸道合胞病毒可检测病毒RNA 三 寄生虫感染免疫检测 n目前寄生虫感染者不是很多见，临床可 用ELISA法检测血吸虫

15、、囊虫、旋毛虫等 抗体 n疟原虫检测常用涂片法找疟原虫 四 性传播疾病免疫检测 n支原体和衣原体：肺炎支原体和肺炎衣 原体为常见呼吸道感染病原体，IgG型抗 体阳性提示既往感染，IgM型抗体阳性则 提示近期感染。沙眼衣原体和解脲支原 体为常见的性传播疾病。 性传播疾病免疫检测 n梅毒螺旋体：目前检测梅毒常用的方法有：化 学发光法、快速血浆反应素试验（RPR）和梅 毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）。 nRPR对梅毒检测的特异性差，假阳性率较高， 但RPR是现症感染的指标，目前RPR被用于人 群筛查、疗效观察、判断复发和再感染。 nTPPA为确诊试验，检测的是特异性抗体，梅毒 患者体内长期存在。

16、nTRUST（甲苯胺红不加热试验）：意义同RPR ，但特异性较RPR强。 性传播疾病免疫检测 n人获得性免疫缺陷病毒（HIV）：筛查可 使用化学发光法，但诊断依赖确诊试验 如Western-blot法或PCR法。某些自身免 疫病患者可能出现初筛试验假阳性。 肿瘤标志物检测 n肿瘤标志物由肿瘤细胞或机体所产生 n存在于血液、细胞、组织或体液中 n反映肿瘤的存在和生长的一类物质，有助于肿瘤的诊 断，对肿瘤的疗效、复发和预后的判断也有重要价值 n包括蛋白质类（AFP 、 CEA 、 PSA 、 SCC）、糖脂 类（CA125 、 CA199等）、酶类如神经原特异性 烯醇化酶（NSE） n含量低，需用

17、非常敏感的化学发光免疫分析法(CLIA) 、 放射免疫法(RIA)和酶联免疫吸附(ELISA)等方法进行测 定 一 甲胎蛋白测定 n甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)是胎儿 发育早期由肝脏和卵黄囊合成的一种血 清糖蛋白 n电泳时位于白蛋白和1球蛋白之间 n胎儿出生后不久逐渐消失 n参考值:血清300ug/L。但也 可不升高 n病毒性肝炎、肝硬化可有不同程度的升高，但 常300ug/L n生殖腺胚胎肿瘤可升高，如睾丸癌、畸胎瘤、 卵巢癌等 n胃癌、胰腺癌者也可升高 n妊娠3个月后开始升高，7-8个月达高峰，一般 400ug/L，分娩后3周恢复正常 二 癌胚抗原测定 n癌胚抗原

18、(carcinoembryonicantigen, CEA)是一种可溶性糖蛋白. n胚胎期主要存在于胎儿的胃肠管、胰腺 和肝脏,出生后组织内含量很低 n是一种广谱的肿瘤标志物,在胃肠道肿瘤、 乳腺癌、肺癌等均可升高 n参考值:血清5 ug/L 临床意义 n升高见于结肠癌（74%） 、直肠癌（76%）、 乳腺癌（60%） 、胃癌、肺癌（70%） 、胰 腺癌（90%）等，常超过60ug/L n连续检测可用于恶性肿瘤手术后疗效观察和预 后判断 n某些非肿瘤情况下也可有不同程度的升高,，如 肠道憩室炎、直肠息肉、结肠炎、肝硬化、 肝炎和肺部疾病等，吸烟者也可轻度升高 三 癌抗原125测定 n癌抗原12

19、5(cancer antigen 125, CA125) 是卵巢癌相关抗原。 n是一种大分子多聚糖蛋白 n存在于上皮性卵巢癌组织和病人血清中 n参考值: 血清35 000 U/L 临床意义 n卵巢癌 CA125 明显升高，阳性率达 97%，对早期诊断、复发诊断及疗效观察 意义重大 n其他非卵巢恶性肿瘤如宫颈癌、乳腺癌 、 胰腺癌 、肝癌 、胃癌 、肺癌等也可升高 n非恶性肿瘤如子宫肌瘤、肝硬化失代偿期 及某些自身免疫性疾病也可升高 n良性和恶性的胸腹水中CA125也可升高 n妊娠的头三个月也可升高 四 前列腺特异性抗原测定 n前列腺特异性抗原(prostate specific antigen

20、, PSA)是一种由前列腺上皮细胞 分泌的糖蛋白 n总PSA(t-PSA)中80%以结合形式存在， 20%以游离(f-PSA)形式存在 n参考值：见书 临床意义 n前列腺癌血清t-PSA升高（60%-90%）， 手术后明显下降；若术后无明显下降或 下降后再次升高提示肿瘤转移或复发 n前列腺肥大、前列腺炎、肾脏和泌尿生 殖系统疾病也可升高（14%） nf-PSA/ t-PSA比值意义更大，小于0.1往 往提示前列腺癌 五 神经元特异性烯醇化酶（ NSE） n用于小细胞肺癌诊断、鉴别诊断及疗效 检测 nNSE也是神经母细胞瘤的标志物，敏感度 90%以上 n正常红细胞中存在NSE，标本溶血可能影 响

21、结果 肿瘤标志物检测 不同的标志物联合检测意义更大，如： 男性全套： AFP、CA199 、CA724 、CEA 、NSE 、SCC 、TPSA ; 女性全套：AFP 、CA125 、CA153 、CA199 、 CA724 、CEA 、SCC; 胃肠道肿瘤：CA199 、CA724 、CEA; 肺癌：CEA 、 NSE、SCC； 卵巢癌：CEA 、CA125 、CA724 、HCG 、AFP 自身抗体检查 n自身免疫病：机体免疫耐受性减低或破坏， 产生自身抗体或致敏淋巴细胞，导致组织 器官损伤 n自身抗原：细胞的任何成分。根据抗原分 布范围自身免疫病分器官特异性和非器官 特异性 n自身抗体：

22、机体细胞成分或与机体细胞成 分相似的外来病原微生物成分，刺激机体 产生自身抗体。自身抗体检测是自身免疫 病诊断的重要手段 n免疫损伤：自身抗体，免疫复合物 一抗核抗体谱检测 抗核抗体谱（ANAs）包括ANA 、 ENA 抗体、DNA抗体、组蛋白抗体等 。 抗核抗体(anti-nuclear antibody, ANA)是 针对细胞成分的自身抗体。 检测方法：间接免疫荧光法 ANA阳性见于（%） SLE 95-99 SLE亲属 15-25 RA 50-75 MCTD 95-100 PSS 95 PM 80 SS 75-90 肝硬化 15 自免肝 60-90 正常人 3-5 正常老人 20-40

23、肿瘤 15-25 DNA抗体 n抗ds-DNA抗体对系统性红斑狼疮(SLE) 特异性达95%,敏感性约70%。与SLE病情 活动和肾损害相关。 n抗ss-DNAss-DNA抗体缺乏疾病特异性，临床意 义不大 抗ds-DNA抗体 ENA抗体和组蛋白抗体 n抗Sm抗体：即抗Smith抗体，是SLE的标记抗体 n抗核糖核蛋白抗体又称抗nRNP抗体，是混合结缔组织 病的标记抗体，也可见于SLE,并与抗Sm抗体相伴出现 nSSA/SSB抗体 常见于干燥综合征 n其他ENA抗体：Jo-1抗体与炎症性肌病相关，Scl-70抗 体与硬皮病相关，rRNP抗体与狼疮脑病相关 n抗组蛋白抗体：见于50%-70%的SLE，某些药物也可引 起阳性 抗心磷脂抗体（ACA） 目前标准化的检测是用酶联免疫吸附(ELISA)法 持续中高滴度的IgG/IgM型ACL与血栓密切相关，前者与 血小板减少相关，后者与自发性流产相关 ACA对诊断APS敏感性较高，特异性相对低，常用作筛 选试验 ；除APS外，ACA也见于其他疾病如SLE，RA， ITP，感染（病毒）等，某些药物也可能致阳性 n低滴度ACA可能为非特异性，须重复检测 nACA阴性不能排除抗磷脂综合征，应结合临床 ANCA临床意义 n主要用于系统性血管炎（Wegener肉芽肿、显 微镜下多血管炎、变应性肉芽肿性血管炎）、 炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断