蛋白质化学6下

1、复复 习习 1、含有杂环的亚氨基酸是_。 脯氨酸 2、组成蛋白质的氨基酸除_外均含有不对称碳原子，所以具有_。 甘氨酸，旋光性 3、异亮氨酸属于哪一类氨基酸（ ） A 支链 B 芳香族 C 杂环 D 碱性 A 4、下列属于必需氨基酸的是（ ） A 天冬酰胺 B谷氨酰胺 C酪氨酸 D赖氨酸 D 牛牛文库文档分享 第三章第三章 蛋白质化学（下）蛋白质化学（下） 牛牛文库文档分享 第六节第六节 蛋白质的结构（重点）蛋白质的结构（重点） 牛牛文库文档分享 蛋白质结构的研究内容蛋白质结构的研究内容 由哪些氨基酸组成？ 各种氨基酸的含量？ 氨基酸之间如何连接？ 不同氨基酸的排列顺序如何？ 氨基酸长链的空间

2、形状如何？ 牛牛文库文档分享 蛋白质的结构层次蛋白质的结构层次 一级结构 二级结构 超二级结构 结构域 三级结构 四级结构 牛牛文库文档分享 一、一级结构（序列）一、一级结构（序列） 多肽链中氨基酸残基的排列顺序，也称为蛋白质的序列或蛋白质的化学结构。 左N右C 牛牛文库文档分享 什么是序列分析？什么是序列分析？ 根据完全水解所获得的氨基酸组成知识，按照预先设计好的策略，对多肽进 行部分水解、末端测定、短序列分离和完全水解等，从而得出蛋白质多肽链 的完整的氨基酸序列。 牛牛文库文档分享 蛋白质序列分析的意义蛋白质序列分析的意义 研究蛋白质结构和功能的关系 人类血红蛋白变种有300多种,有些变种

3、严重影响分子的携氧的能力，进 行序列分析有助于说明血红蛋白的结构与功能差异 寻找基因 根据蛋白质序列可以反推DNA序列，有助于确定基因和克隆基因 牛牛文库文档分享 蛋白质序列分析原则蛋白质序列分析原则 1、确定多肽链的数目，肽链拆分-获得单一多肽链 牛牛文库文档分享 多肽链的拆分多肽链的拆分 非共价交联 酸、碱、高浓度的盐、变性剂酸、碱、高浓度的盐、变性剂 处理处理 8mol/L尿素或尿素或6mol/L盐酸胍盐酸胍 通过链间二硫键交联或者存在链内二 硫键 氧化或者还原二硫键使其断开氧化或者还原二硫键使其断开 牛牛文库文档分享 1）巯基乙醇法）巯基乙醇法 用过量巯基乙醇还原二硫键使其断开 加入碘

4、乙酸保护生成的巯基 牛牛文库文档分享 2）过甲酸法）过甲酸法 加入发烟甲酸将二硫键氧化成磺酸基从而断开二硫键 牛牛文库文档分享 3）二硫苏糖醇法）二硫苏糖醇法 加入二硫苏糖醇或者二硫赤蘚糖醇还原二硫键 牛牛文库文档分享 2、蛋白质多肽链的组成分析-确定每条肽链的氨基酸的种类和数量（需要蛋 白质完全水解） 蛋白质序列分析原则蛋白质序列分析原则 牛牛文库文档分享 3、蛋白质多肽链的末端分析-确定末端氨基酸 N末端测定末端测定 C末端测定末端测定 蛋白质序列分析原则蛋白质序列分析原则 牛牛文库文档分享 1）N-末端测定末端测定 DNFB法 PITC法 DNS法 氨肽酶法 牛牛文库文档分享 DNS法法

5、 丹磺酰氯（二甲基氨基萘磺酰氯） 6mol/L HCl 105水解18hr 牛牛文库文档分享 氨肽酶法氨肽酶法 外切酶，从多肽链的N-端逐个的向里水解 根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间 和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序 牛牛文库文档分享 2）C-末端测定末端测定 肼解法 多肽与肼在无水条件下加热，多肽与肼在无水条件下加热，C-端氨基酸即从肽链端氨基酸即从肽链 上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物 肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质而与C- 端氨基酸

6、分离端氨基酸分离 H2NCHC RO HNCH C ROORn CCHHNOH n-1 N-端氨基酸 C-端氨基酸 ORn CCHH2NOHH2NCHC RO NHNH2+ H+ NH2NH2 氨基酸酰肼 C-端氨基酸 牛牛文库文档分享 羧肽酶法羧肽酶法 羧肽酶羧肽酶A作用于促肾上腺皮质激作用于促肾上腺皮质激 素氨基酸的释放曲线素氨基酸的释放曲线 牛牛文库文档分享 4、对多肽链进行部分水解(酶解)，获得一套短肽混合物；用不同的酶分别 进行,得到几套短肽混合物 蛋白质序列分析原则蛋白质序列分析原则 牛牛文库文档分享 肽链部分水解的方法肽链部分水解的方法 化学法 溴化氰法溴化氰法 羟胺法羟胺法 酸

7、酸 酶解法（切点多，肽段大小不一） 胰蛋白酶胰蛋白酶 牛牛文库文档分享 1）溴化氰法）溴化氰法 断开甲硫氨酸羧基参与的肽键 由于蛋白质中含有很少的甲硫氨酸，因此可以得到较大的片断 CH3S： CH2 CH2 CHN HCN HCHC OOR +B rC + N B r- CH3S + CH2 CH2 CHN HCN HCHC OOR CN CH3SCN CH 2 CHN HCN HCHC OOR CH2 + H2O + CH2 CHN HC O CH2 OH3N + CHC OR 高丝氨酸内酯 牛牛文库文档分享 2）羟胺法）羟胺法 羟胺能专一地裂解Asn-Gly的肽键 牛牛文库文档分享 5、分

8、离短肽混合物-获得单一的短肽 6、测定所有短肽的的氨基酸序列 v7、将所获得的所有序列进行拼凑、将所获得的所有序列进行拼凑,确定蛋白质确定蛋白质 序列序列 v8.测定二硫键位置，测出全部一级结构测定二硫键位置，测出全部一级结构 蛋白质序列分析原则蛋白质序列分析原则 牛牛文库文档分享 牛牛文库文档分享 二、二级结构二、二级结构 蛋白质多肽链自身的折叠和盘绕方式 肽链骨架原子的相对空间位置，不涉及侧链 维持二级结构的力：氢键 牛牛文库文档分享 肽平面肽平面 肽平面各个原子所构成的键长、键角在蛋白质构象中恒定不变 牛牛文库文档分享 二级结构的种类二级结构的种类 -螺旋 折叠 转角 自由回转 牛牛文库

9、文档分享 牛牛文库文档分享 1、-螺旋螺旋 绝大多数为右手螺旋 -角蛋白：全部由-螺旋构成 结构要点 每每3.6个氨基酸残基螺旋上升个氨基酸残基螺旋上升 一圈一圈 每圈向上移动每圈向上移动0.54nm 氨基酸残基侧链伸向外侧，相氨基酸残基侧链伸向外侧，相 邻螺圈间形成氢键，氢键基本邻螺圈间形成氢键，氢键基本 与中心轴平行与中心轴平行 SN：3.613 牛牛文库文档分享 -螺旋螺旋 完成一个螺旋需完成一个螺旋需 3.6个氨基酸残基，个氨基酸残基， 螺旋每上升一圈，螺螺旋每上升一圈，螺 距为距为0.54nm，相邻，相邻 两个氨基酸残基之间两个氨基酸残基之间 的轴心距为的轴心距为0.15nm 牛牛文

10、库文档分享 l l维持螺旋的作用力是维持螺旋的作用力是氢键氢键，相邻螺圈之间，相邻螺圈之间 形成链内形成链内H键，键，H键的取向几乎与轴平行。键的取向几乎与轴平行。 H键位置：由每个残基的键位置：由每个残基的CO基与其相基与其相 邻的第四个残基的邻的第四个残基的 NH的形成的形成H键，键， 所有肽键的所有肽键的NH和和CO都参与氢键的形成，都参与氢键的形成， 故故-螺旋很稳定。螺旋很稳定。 -螺旋螺旋 牛牛文库文档分享 2、折叠折叠 由两条或两条以上几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链由两条或两条以上几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链 间氢键交联而成。肽链的主链成锯齿状折叠构象。间氢键交联而成。

11、肽链的主链成锯齿状折叠构象。 牛牛文库文档分享 要点：要点： l l肽链几乎是完全伸展的，整个肽链成折叠形式。肽链几乎是完全伸展的，整个肽链成折叠形式。 l l两条或多条链相互平行，按层排列，相邻的肽链之两条或多条链相互平行，按层排列，相邻的肽链之 间形成肽间形成肽 间的氢键，氢键由主链的间的氢键，氢键由主链的-C=O与与-NH之间形之间形 成氢键，所有的肽键都参与氢键的形成，氢键取向与成氢键，所有的肽键都参与氢键的形成，氢键取向与 肽链的长轴接近垂直。肽链的长轴接近垂直。 l l-折叠两种类型：折叠两种类型： 平行式：所有肽链的平行式：所有肽链的N端都在同一端。端都在同一端。 反平行式：相邻

12、的两条肽链方向相反。反平行式：相邻的两条肽链方向相反。 折叠折叠 牛牛文库文档分享 折叠（平行）折叠（平行） 氢键倾斜 牛牛文库文档分享 折叠（反平行）折叠（反平行） 氢键垂直，更稳定 牛牛文库文档分享 球状蛋白质中广泛存在的一种结构球状蛋白质中广泛存在的一种结构 肽链发生肽链发生180度回折，回折角度就是度回折，回折角度就是-转角结构。转角结构。 维持力维持力：由一个由一个AA残基的残基的C=O与第四个与第四个AA的残基的的残基的 NH之间形成氢键。甘氨酸和脯氨酸易于形成之间形成氢键。甘氨酸和脯氨酸易于形成-转角。转角。 3、 -转角转角 牛牛文库文档分享 4 、无规卷曲、无规卷曲 无规卷曲

13、是指多肽链主链部分形无规卷曲是指多肽链主链部分形 成的无规律的卷曲构象。成的无规律的卷曲构象。 牛牛文库文档分享 -螺旋螺旋 -折叠折叠 -转角转角 无规卷曲无规卷曲 牛牛文库文档分享 三、超二级结构三、超二级结构 二级结构和三级结构的过渡态 若干相邻的二级结构彼此相互作用，形成有规则的二级结构组合体； 不具有功能； 组合方式：、 牛牛文库文档分享 超二级结构（超二级结构（ 转角转角 ） 牛牛文库文档分享 超二级结构（超二级结构（ ） 牛牛文库文档分享 超二级结构（超二级结构（ 曲折曲折 ） 牛牛文库文档分享 四、结构域四、结构域 多肽链在超二级结构基础上进一步缠绕折叠形成紧密的近似球状的结构

14、 多结构域的酶分子的活性部位通常分布在结构域之间的“铰链区”上，有利于结构 域发生相对运动，与底物结合 牛牛文库文档分享 五、三级结构五、三级结构 由于侧链基团相互作用，多肽链进一步折叠或者卷曲构成复杂的空间结构，整 个分子成为球状或者颗粒状 多肽链上所有原子（包括主链和残基侧链）在三维空间的分布 维持三级结构的主要作用力为疏水作用，其次为氢键、离子键、范德华力 牛牛文库文档分享 疏水疏水 相互作用相互作用 静电相互作用静电相互作用 金属离子金属离子 配位作用配位作用 折叠折叠 结构结构 链间链间 氢键氢键 螺旋螺旋 结构结构 链内链内 氢键氢键 二硫键二硫键 侧链侧链 之间之间 氢键氢键 稳

15、定蛋白质三级结构的主要作用力稳定蛋白质三级结构的主要作用力 牛牛文库文档分享 鲸鲸肌红蛋白肌红蛋白 英国剑桥大学的John Kendrew等人 153个残基分成8段长度为724个氨基酸残基组成的螺旋区，各区之间通 过18个松散的残基相连 内部疏水，外部亲水 牛牛文库文档分享 六、四级结构六、四级结构 分子量大的蛋白质由几条多肽链组成，肽链间没有共价键连接，这种肽链称 为亚基 四级结构指亚基的相互关系、空间排布和特定构象。 维持四级结构的作用力主要为疏水作用，其次为氢键、离子键、范德华力； 牛牛文库文档分享 马血红蛋白马血红蛋白 英国剑桥大学Max Perutz经23年研究于1959年提出 牛牛

16、文库文档分享 七、蛋白质分子中的化学键七、蛋白质分子中的化学键 v肽键肽键 v二硫键二硫键 v酯键酯键 v离子键离子键 v配位键配位键 v氢键氢键 v范德华力范德华力 v疏水作用疏水作用 牛牛文库文档分享 1、肽键、肽键 肽键C-N具有双键的性质，不能自由转动，因此四个原子处于同一平面，H 和O呈反式排列 C=O双键具有单键性质 牛牛文库文档分享 2、二硫键、二硫键 半胱氨酸 稳定肽链空间结构 二硫键越多，蛋白质稳定性越强 例如角蛋白不溶于稀碱溶液 牛牛文库文档分享 3、酯键、酯键 苏氨酸、丝氨酸的羟基 与磷酸形成磷酸酯与磷酸形成磷酸酯 与氨基酸的羧基成酯与氨基酸的羧基成酯 牛牛文库文档分享

17、4、离子键（盐键）、离子键（盐键） 具有相反电荷的两个基团之间的库仑作用 谷氨酸、天冬氨酸的羧基 精氨酸、赖氨酸的氨基 高浓度的盐、过高或者过低的pH均可破坏离子键，从而使蛋白质变性 牛牛文库文档分享 5、配位键、配位键 两个原子之间形成共价键，共用电子 对由其中一个原子提供 金属离子和蛋白质的连接 螯合剂可除去金属离子导致金属蛋白 变性失活 牛牛文库文档分享 6、疏水作用、疏水作用 非极性侧链（疏水基团）在极性溶剂（水）中为了避开水而彼此靠近所产生的一种作用力 本质为范德华力 主要存在于蛋白质分子内部 牛牛文库文档分享 维系一级结构主要作用力：肽键、二硫键维系一级结构主要作用力：肽键、二硫键

18、 维系二级结构主要作用力：氢键维系二级结构主要作用力：氢键 维系三级结构主要作用力：疏水作用力维系三级结构主要作用力：疏水作用力 维系四级结构主要作用力：疏水作用力维系四级结构主要作用力：疏水作用力 氢键、范德华力、疏水作用力、盐键，均为次级键氢键、范德华力、疏水作用力、盐键，均为次级键 氢键、范德华力虽然键能小，但数量大氢键、范德华力虽然键能小，但数量大 二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋二硫键对稳定蛋白质构象很重要，二硫键越多，蛋 白质分子构象越稳定白质分子构象越稳定 小结小结 牛牛文库文档分享 第八节第八节 典型蛋白质的结构典型蛋白质的结构 牛牛文库文档分享 一、角蛋白一、角蛋

19、白 -角蛋白 毛、发、羽毛、指甲毛、发、羽毛、指甲 湿热和外力拉直湿热和外力拉直 含丰富的胱氨酸，二硫键含丰富的胱氨酸，二硫键 -角蛋白 蜘蛛丝、蚕丝蜘蛛丝、蚕丝 牛牛文库文档分享 二、胶原蛋白二、胶原蛋白 皮肤、软骨的主要成分 各肽链为左手螺旋 三条肽链缠绕为右手大螺 旋 含有其它蛋白质中少见的 羟脯氨酸（9）、羟赖氨 酸 牛牛文库文档分享 三、血红蛋白三、血红蛋白 珠蛋白和血红素 血红素的第六个配位键在无氧时与 水分子结合生成去氧血红蛋白Hb， 在有氧时则与氧结合生成氧合血红 蛋白HbO2 牛牛文库文档分享 第九节第九节 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系 牛牛文库文档分享 蛋白

20、质一级结构对高级结构的影响蛋白质一级结构对高级结构的影响 一级结构（氨基酸的种类及排列顺序）的改变必然一级结构（氨基酸的种类及排列顺序）的改变必然 影响高级结构。影响高级结构。 1、氨基酸的组成和顺序决定了、氨基酸的组成和顺序决定了 -螺旋是否存在以及形螺旋是否存在以及形 成螺旋后的稳定程度成螺旋后的稳定程度 例如：多聚赖氨酸；多聚谷氨酸例如：多聚赖氨酸；多聚谷氨酸 2、R基的大小对多肽链能否形成螺旋有影响基的大小对多肽链能否形成螺旋有影响 例如：多聚异丙氨酸；脯氨酸例如：多聚异丙氨酸；脯氨酸 牛牛文库文档分享 蛋白质分子结构与功能的关系（难点）蛋白质分子结构与功能的关系（难点） 1 1、蛋白

21、质一级结构与功能的关系、蛋白质一级结构与功能的关系 （ 1 1）一级结构与生物进化）一级结构与生物进化 （2 2）一级结构与分子病）一级结构与分子病 2 2、蛋白质高级结构与功能的关系、蛋白质高级结构与功能的关系 （ 1 1）蛋白质变构与功能的关系）蛋白质变构与功能的关系 （2 2）蛋白质变性与功能的关系）蛋白质变性与功能的关系 3 3、蛋白质的激活、蛋白质的激活 牛牛文库文档分享 （1）一级结构与生物进化）一级结构与生物进化 同源蛋白质的研究：也叫同功能蛋白质，有助于研究生物进化。同源蛋白质的研究：也叫同功能蛋白质，有助于研究生物进化。 A A、同源蛋白质的概念：、同源蛋白质的概念： 是指在

22、不同生物体中实现同一功能的蛋白质。它的一级结构是指在不同生物体中实现同一功能的蛋白质。它的一级结构 中有许多位置的中有许多位置的aaaa对所有种属来说都是相同的，称为不变残基。对所有种属来说都是相同的，称为不变残基。 其他位置的其他位置的aaaa差异较大，称为可变残基。这种差异较大，称为可变残基。这种aaaa顺序中的相似顺序中的相似 性称为顺序同源现象。性称为顺序同源现象。 蛋白质一级结构与功能的关系蛋白质一级结构与功能的关系 牛、猪、羊、人等在中属上差异很大，但它们的胰岛素在一级结构上几乎牛、猪、羊、人等在中属上差异很大，但它们的胰岛素在一级结构上几乎 一致，仅在一致，仅在A链的第链的第8，

23、9，10位上的位上的3个氨基酸有差异。个氨基酸有差异。 牛牛文库文档分享 细胞色素细胞色素c是一种广泛存在于生物体内，具有铁卟啉的色蛋白是一种广泛存在于生物体内，具有铁卟啉的色蛋白 （含有（含有104个氨基酸残基），在生物氧化中起传递电子的作用。个氨基酸残基），在生物氧化中起传递电子的作用。 120个物种，个物种，28个个aa位置不变，是维持构象上发挥功能的必要位置不变，是维持构象上发挥功能的必要 部位。可变残基随进化而变异，亲缘关系越近，部位。可变残基随进化而变异，亲缘关系越近，aa差异越小。差异越小。 人与黑猩猩大致相同；人与黑猩猩大致相同； 人与马有人与马有12处不同处不同 B、分子进化

24、、分子进化 牛牛文库文档分享 （2）一级结构与分子病）一级结构与分子病 一级结构相同，功能相同，一级结构的细小变化导致功一级结构相同，功能相同，一级结构的细小变化导致功 能完全不同。能完全不同。 A A、分子病的概念：由于遗传基因的突变导致蛋白质分、分子病的概念：由于遗传基因的突变导致蛋白质分 子结构的改变或某种蛋白质缺乏引起的疾病。子结构的改变或某种蛋白质缺乏引起的疾病。 例如：镰刀性贫血病例如：镰刀性贫血病 牛牛文库文档分享 举例：分子病举例：分子病镰刀型红细胞贫血症镰刀型红细胞贫血症 1910年发现于非洲，年发现于非洲，40年后搞清病因，一种遗传病。年后搞清病因，一种遗传病。 症状：红细

25、胞在缺氧时呈镰刀状，症状：红细胞在缺氧时呈镰刀状，Hb与与O2的亲和力改变，的亲和力改变， 红细红细 胞易破裂发生溶血，运氧功能障碍，头昏、胸闷等贫血症状。胞易破裂发生溶血，运氧功能障碍，头昏、胸闷等贫血症状。 牛牛文库文档分享 病因：血液中血红蛋白异常（病因：血液中血红蛋白异常（HbS），正常：），正常： HbA 血红蛋白：两条血红蛋白：两条链和两条链和两条链组成四聚体链组成四聚体22 ， 链含链含141AA2，链含链含146个个AA2， 总共总共574个个AA。 牛牛文库文档分享 HbS与与HbA不同：不同：链第链第6位氨基酸残基异常。位氨基酸残基异常。 HbA：第：第6位氨基酸为位氨基酸

26、为Glu。 HbS ：第：第6位氨基酸为位氨基酸为Val。 链链 HbA (正常正常) ： H2N-Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-COOH HbS (异常异常) ： H2N-Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-COOH 除此以外，血红蛋白的其他部分均完全相同，仅此微小差异除此以外，血红蛋白的其他部分均完全相同，仅此微小差异 （574个氨基酸中只有两个氨基酸差异），使个氨基酸中只有两个氨基酸差异），使HbA和和HbS在功能在功能 上表现出很大的差异。上表现出很大的差异。 牛牛文库文档分享 贫血病人：贫血病人： 其血红蛋白的其血红蛋白的 -链的链的58

27、、87位，位， -链的第链的第63、 92位上的任何一个组氨酸被取代，位上的任何一个组氨酸被取代， 血红蛋白容易氧化成高铁血红蛋白，丧失输送氧血红蛋白容易氧化成高铁血红蛋白，丧失输送氧 的能力。的能力。 说明蛋白质结构与功能的相适应性，说明蛋白质结构与功能的相适应性， 二者之间有高度统一性。二者之间有高度统一性。 牛牛文库文档分享 （3）蛋白质的激活）蛋白质的激活 例如：胰岛素原的激活例如：胰岛素原的激活 体内的某些蛋白质分子初体内的某些蛋白质分子初 合成时，呈无活性状态，合成时，呈无活性状态， 称为蛋白质原称为蛋白质原. . 蛋白质原的部分肽链以特蛋白质原的部分肽链以特 定的方式断裂后，才变

28、为定的方式断裂后，才变为 活性分子活性分子. . 牛牛文库文档分享 蛋白质高级结构与功能的关系蛋白质高级结构与功能的关系 以别构现象为例以别构现象为例 别构现象：蛋白质由于别构现象：蛋白质由于构象变化构象变化而引起分子性质变化从而引起分子性质变化从 而导致生物功能的变化。而导致生物功能的变化。 血红蛋白为例：血红蛋白为例： 血红蛋白由四个亚基组成的四聚体，四个亚基血红蛋白由四个亚基组成的四聚体，四个亚基 间以次级链相连，每个亚基含有一个间以次级链相连，每个亚基含有一个Fe2+。Fe2+ 能与氧气可逆结合，起运输能与氧气可逆结合，起运输O2的作用，每个亚基的作用，每个亚基 都结合一个都结合一个O

29、2，每个，每个Hb最多可结合最多可结合4个个O2。 牛牛文库文档分享 牛牛文库文档分享 血红蛋白有两种构象状态：血红蛋白有两种构象状态： T-型构象型构象与氧气亲和力低；与氧气亲和力低； R-型构象型构象与氧气亲和力高。与氧气亲和力高。 当氧气与当氧气与Hb中的一个亚基结合后引起该亚基构象中的一个亚基结合后引起该亚基构象 发生变化，由发生变化，由T R型构象，一个亚基构象的变化又型构象，一个亚基构象的变化又 会引起另外三个亚基相继发生变化，亚基间次级键破会引起另外三个亚基相继发生变化，亚基间次级键破 坏，使坏，使Hb整个分子的构象发生变化，使所有亚基都变整个分子的构象发生变化，使所有亚基都变

30、的适宜与的适宜与O2结合，结合，Hb与与O2结合的速度大大加快。结合的速度大大加快。 牛牛文库文档分享 变构作用：变构作用： 当蛋白质的一个亚基结合氧后，使整个分子发生当蛋白质的一个亚基结合氧后，使整个分子发生 构象改变，因而对氧的亲和力急剧增加，这种构象改变，因而对氧的亲和力急剧增加，这种 现象称为变构作用。现象称为变构作用。 牛牛文库文档分享 第十节第十节 蛋白质的性质和测定蛋白质的性质和测定 牛牛文库文档分享 一、蛋白质的性质一、蛋白质的性质 两性解离和等电点 分子量大，大小不等 胶体性质 沉淀作用 变性作用 颜色反应 牛牛文库文档分享 二、蛋白质的测定二、蛋白质的测定 双缩脲反应 福林

31、酚法 考马斯亮兰显色 紫外吸收 牛牛文库文档分享 1、双缩脲反应、双缩脲反应 肽键 牛牛文库文档分享 原理原理 在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物 蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似 最大光吸收在540nm，颜色深浅与蛋白质浓度成正比 测定范围：110mg蛋白质/mL溶液 牛牛文库文档分享 2、福林酚法（、福林酚法（Lowry法）法） 在碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质铜复合物；复合物将Folin酚试 剂中的磷钼酸磷钨酸还原成蓝色复合物，蓝色程度与蛋白质的含量成正比 测量范围：25250g/mL 牛牛文库文档分享 3、考马斯亮兰比色、考马斯亮兰比色 1976年由Bradf

32、ord建立（Bradford法） 目前灵敏度最高的蛋白质比色测定法，最低蛋白质检测量可达1g 测定快速、简便，完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。颜色可以在1小时内 保持稳定 牛牛文库文档分享 原理原理 考马斯亮兰G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的 位置由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。 染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基 相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比 牛牛文库文档分享 4、紫外吸收、紫外吸收 蛋白质分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质具有吸收紫外光的性质。 吸收高峰在280nm处，吸光度（即光密度值）与蛋白质含量成正比，可以进行蛋白质含量的测定。 适用于柱层析洗脱液的快速连续检测 嘌呤、嘧啶及核酸等物质有干扰 牛牛文库文档分享 本章总结本章总结1 蛋白质的定义 20种常见氨基酸、必需氨基酸 氨基酸的性质 氨基反应（茚三酮、DNFB、PITC） 羧基反应、侧链基团反应（用于鉴定） 牛牛文库文档分享 本章总结本章总结2 蛋白质的一四级结构的定义、作用力 一级结构的测定步骤和方法（C、N末端氨基酸的测定：DNFB，肼解法） 二级结构的种类和特征 蛋白质的性质和应用 蛋白质的测定 牛牛文库文档分享 完毕！完毕！ 牛牛文库文档