实验六_土壤中真菌纯化、分离和培养

1、实验六实验六 土壤中真菌分离、纯化和培养土壤中真菌分离、纯化和培养 一、目的要求一、目的要求 掌握从土壤中初步分离培养真菌的方法，掌握从土壤中初步分离培养真菌的方法， 从而获得真菌纯培养技能；了解基本接从而获得真菌纯培养技能；了解基本接 种技术。种技术。 二、实验原理二、实验原理 土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发 现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。 不同土样中各类微生物数量不同，一般土不同土样中各类微生物数量不同，一般土 壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。壤中细菌数量最多；其次为放线菌和霉菌。 本次实验从土壤中分

2、离真菌。本次实验从土壤中分离真菌。 三、仪器和材料三、仪器和材料 样品：样品：新鲜土壤新鲜土壤 培养基：加有培养基：加有2ml2ml链霉素的链霉素的PDAPDA培养基或培养基或 孟加拉红培养基。孟加拉红培养基。 无菌水：无菌水：装有装有9mL无菌水的试管无菌水的试管4支支。 其它：其它：无菌培养皿无菌培养皿4皿皿、无菌吸管、酒精、无菌吸管、酒精 灯、培养箱等灯、培养箱等 。 四、真菌纯种分离的操作方法四、真菌纯种分离的操作方法 u1 1、土壤稀、土壤稀释释液的制液的制备备 用用“ “稀稀释释平板平板计数计数法法” ”中的方法中的方法 进进行，行，将将土土样样稀稀释释至至1010 5 5。 。

3、将将1瓶土壤菌液（称取土样瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛放入盛90 mL无菌水）和无菌水）和4管管9mL的无菌水排列好，的无菌水排列好， 按按10-1、10-2、10-3、10-4及及10-5依次编号。依次编号。 在无菌操作条件下，用在无菌操作条件下，用lmL无菌移液管吸无菌移液管吸 取取lmL10-1浓度的菌液于一管浓度的菌液于一管9mL无菌水无菌水 中，将移液管吹洗三次，摇匀即为中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓浓 度菌液。同样方法，依次稀释到度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 注意：注意：在土壤稀释过程中，吸取不同梯在土壤稀释过程中，吸取不同梯 度的菌液需换用不同的吸管。度的

4、菌液需换用不同的吸管。 土壤稀释液的制备和稀释液的取样土壤稀释液的制备和稀释液的取样 2、分离方法、分离方法 采用稀释平板分离法。又可分为两种采用稀释平板分离法。又可分为两种 方法。方法。 混菌法混菌法和和涂抹法涂抹法。 混混 菌菌 法法 涂涂 抹抹 法法 u3 3、培、培养养 将将上述接上述接种种土壤土壤悬悬液的平板液的平板 倒置于倒置于2828培培养养3-5d3-5d。 u4 4、挑菌、挑菌纯纯化化 u5 5、计数计数 u6 6、菌、菌种种保存保存 将将分离到的分离到的真真菌菌转转接到接到PDAPDA斜面上培斜面上培 养养，待，待长长好后，置于冰籍中保存，必要好后，置于冰籍中保存，必要 时进时进行深入行深入研研究。究。 六、注意事项六、注意事项 1、混菌法接种时温度不能过高，应低于、混菌法接种时温度不能过高，应低于45， 如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。如不用温度计，则以不烫脸、手为宜。 2、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无、涂布法接种时一定要涂抹均匀，否则就会无 法记数。法记数。 3、接种后的培养皿应静置、接种后的培养皿应静置15分钟以上，然后倒分钟以上，然后倒 置培养。置培养。 七、作业七、作业 题题 1 在分离真菌时为什么需加链霉素（庆在分离真菌时为什么需加链霉素（庆 大霉素或氯霉素），而不加青霉素？大霉素或氯霉