专题2微生物的培养与应用

1、专题2微生物的培养与应用一、课标要求：（一）知识目标：1、了解最基本的微生物技术（培养基的制备、高压蒸汽灭菌和干热灭菌、倒平板操作、平板划 线操作和稀释涂布平2、说明土壤中分解尿素菌的分离与计数的研究思路和实验设计3、简述纤维素酶的种类及应用价值。（二）能力目标：1、掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌、平板划线法、稀释涂布平板法等基本操作技术。2、运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物的分离与培养等实际问题。（三）情感态度与价值观：1、领悟实验原理2、体验实验操作3、交流实验体会4、培养学生良好的科学态度与习惯。二、知识网络构建1、目的要明确 培养基制备 2、营养要协调 课ph要适宜3、

2、题一无菌操作技术 1、灭菌与消毒2、方法和原理分解尿素菌的分离与计数课题二1、土壤取样2实验设计、普通培养基与选择培养基的制备原理2、培养与计数1、分离原理 分解纤维素菌的分离 课题三1、土壤取样 实验设计2、分离培养、鉴定三、复习策略：介绍了最基本的微生物技术（培养基的制备、高压蒸汽灭3个课题中，课题1、本专题的1 ,这些知识和技能是应用选菌和干热灭菌、倒平板操作、平板划线操作和稀释涂布平板法）的基础。本专题中所强调的无菌操作技择培养基分离某种特定的微生物（课题32和课题的顺利完成。因此，有关微生物技术内容是复专题“术，还将有助于3 ”植物组织培养技术 习重点。、要理论联系实际：学法上应理论

3、联系实际，在做中学是最有效的复习方法途径，联2且相互联系农业生产实际，如尿素分解菌、固氮菌、硝化细菌等与土壤中氮素的利用有关，联系发酵生产中更好地理解微生物活动与土壤肥力及农作物产量的关系。相互利用。系，注重实验设计中应该遵循运用所学知识和方法去分离选择培养某种微生物。防杂菌污染，的原则：本专题涉及的设置对照组、重复组、怎样选材、怎样做假设、怎样对实验结果进行预测和分析、尤其注重分析实验失败的原因。四、重要考点归纳不同的微生物需要采用不同的培养基配方，尽管培养基的配方各不相同，但（一）培养基：是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。、培养基的配制原则 1 .目的要明确：目的包含两层含义，一指

4、培养的微生物种类、二指培养的目的，是用于生产还是科学研究，因为二者对培养基的化学成分、物理状态等方面要求不同，例如用于生产的培养基应具有原料易得、价格低廉、配制方便等特点，而用于科学研究的培养基应具有成分含量准确，可多次重复实验的特点。营养要协调：它表现在两个方面，一是营养物质的浓度要适宜，二是营养物质间的浓度比例要适宜。ph要适宜：由于微生物在生长代谢过程中营养物质利用和代谢产物的形成往往会改变环境中 的ph,为了维持培养基中出的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，最常用的缓冲剂是磷酸氢 二钾或磷酸二氢钾。2、培养基配制的程序及注意事项计算称量熔化调ph f火菌倒平板全程要求无菌操作，无菌技术

5、除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。培养基灭菌后，需要冷却到50 c左右时，才能用来倒平板。可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。操作时使锥形瓶的瓶口通过火焰，通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。将平板倒置，既可 以 造成污染。因为空气中在皿盖与皿底平板冷凝后皿盖上会凝结水珠， 凝固后的培养基表面的湿度也比较高, 使培养基表面的水分更好地挥发， 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基, 的微生物可能在倒平板的过程中，不能将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,之间的培养基上滋生。3、培养基的种类：按培

6、养基物理性质划分名称特征固体培养基功能主要用于微生物的分离、鉴定主要 用于工业生产外观显固体状态 的培养基呈液体 状态的培养基液体 培养 基按培养基的化学成分划分种类 天然 培养 基合 成培关宜 仆年特征用化学成分不明 确的天然物质配 成用化学成分已 知的化学物质配 成用主要用于工业生主要用于微生物的分类、鉴按培养基的功能分种类制备方法原理例用途选择加入使混合菌样中的劣势青霉素培养基中加如某种养菌 变成优势菌，从而培分离得到酵基 母菌和霉菌化学成分提高该菌的筛选率伊红和美蓝鉴别和区分菌落相似别加如某种鉴的微生物培养试剂或化培养基可以鉴别大肠杆菌主要用于构成微生物的细胞物质和一些代谢产物作用异养

7、微生物的主要能源物质关于自养微生物和异养微生物碳源的利用和能量的来源根据某种微生物的特殊营养 要求或其对某化学、物理因 素的抗性而设计的培养基 依据微生物产生的某种代谢 产物与培养基中特定试剂或 化学药品说明不同种类的 微生物，对碳源需要差别大基学药品反应，产生明显 的特征变化而设 计（二）微生物的纯化培养（两种接种方法）1、平板划线法：操作简单，但是单菌落不易分离无菌操作：在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划

8、线时， 接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细 菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。 由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开 始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2、稀释涂布平板法：操作复杂，但是单菌落易分离无菌操作：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。应从操作的各个细节保证无菌。例如，对涂布器等接种器具进行消毒和灭菌、酒

9、精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；每一个稀释度下涂布三个平板作为重复组，不同稀释度下涂布的平板形成对照组，且每个平板所用的样液不超过0.1毫升。统计实验结果时注意选取菌落数介于30 300个之间的平板进行计数，且重复组结果要有相近性。 3、评价和分析实验结果 培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的； 如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程

10、中， 无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。是否进行了及时细致的观察与记录培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点, 并能观察到其他一些细微的变化。（三）微生物营养1、碳源概念凡能为微生物提供所需碳元素的营养物质无机碳源：co2、nahco3等 来源有机碳源：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等自养微生物以 co2或碳酸盐为唯一碳源进行代谢生长；异养微生物必须以有机物为碳源进行 代谢生长。异养微生物生命活动所需的能源主要依靠物质氧化分解放能，碳源是异养微生物的主要能源物质；某些异养微生物也可以光能作为能源，例如红螺菌，它不能以co2作为主要或唯

11、一碳源,而需要有机物参与，才能利用光能将co2还原成细胞物质，这种营养类型称为光能异养型。总结如下表不同的微生物所需要的碳源不同代表生物基本碳源能源营养类型.co2蓝细菌、藻类等 光光能自养光能异养光co2与简单的有机物红螺菌科co2硝化细菌、硫细菌、铁细菌化能自养 无机物绝大多数细菌与全部真核微生物有机物有机物化能异养利用某些微生物碳源的特殊性解决环境污染、粮食危机等问题。a、利用某些细菌、放线菌、酵母菌以石油作为碳源的原理，消除石油污染。b、运用某些细菌可以分解、利用富化物、酚等有毒物质的原理处理有害物质。22粮与c、研究开发以纤维素、石油、 co、h等作为碳源和能源的工业微生物，解决工业

12、发酵用 人们日常用粮的矛盾。2、氮源.概念凡能为微生物提供所需氮元素的营养物质来源无机氮源：n2、氨、镂盐、硝酸盐等有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白月东、氨基酸等作用 主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物说明异养微生物：含 c、h、o、n的化合物既是碳源，又是氮源关于氮源物质的来源和作用对许多微生物来说，既可利用无机含氮化合物作为氮源，也可利用有机含氮化合物作为氮源固氮微生物可以利用氮气作为氮源镂盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质；自养微生物与异养微生物类型的划分主要是依靠能否以 co2 作为生长的主要或唯一碳源，而不决定于氮源。（四）微生物的选择培

13、养和鉴别培养1、研究思路（一）筛选菌株微生物的选择培养， 是指利用培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术。 在课题 2 提供的选择培养基的配方中， 尿素是培养基中的惟一氮源， 因此， 原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。 但实际上， 微生物的培养是一个非常复杂的问题， 有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖， 因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。（二）统计菌落数目统计菌落数目的理论依据是： 当样品的稀释度足够高时， 培养基表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的一个活菌。 因此， 恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键。

14、为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30300的平板进行计数。教材中 p22 实例是为了说明设置重复组的重要性。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了 3 个平板，但是，其中 1 个平板的计数结果与另 2 个相差太远， 说明在操作过程中可能出现了错误， 因此， 不能简单地将 3 个平板的计数值用来求平均值。这个实例启示学生，在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。 在分析实验结果时， 一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作

15、有误，需要重新实验。（三）设置对照教材中 p23 实例是为了说明设置对照组的重要性。 a 同学的结果与其他同学不同， 可能的解释有两种。一是由于土样不同，二是由于培养基污染或操作失误。究竟是哪个原因， 可以通过实验来证明。实验方案有两种。一种方案是可以由其他同学用与a 同学一样的土样进行实验，如果结果与 a 同学一致，则证明 a 无误；如果结果不同，则证明 a 同学存在操作失误或培养基的配制有问题。另一种方案是将a 同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 通过这个事例可以看出， 实验结果要有说服力， 对照的设置是必不可少的。2、课题成果评价土壤中某

16、样品细菌的分离与计数 培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 说明培养基没有被杂菌污染。 牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。样品的稀释操作是否成功如果得到了 2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。重复组的结果是否一致如果学生选取的是同一种土样， 统计的结果应该接近。 如果结果相差太远， 需要分析产生差异的原因。土壤中纤维素分解菌的分离培养基的制作是否合格以及选择培养基是否筛选出菌落： 对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说明培养基制作合格。 如果观

17、察到产生透明圈的菌落， 则说明可能获得了分解纤维素的微生物。分离的结果是否一致： 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌的数量， 因此最容易分离得到的是细菌。但由于所取土样的环境不同，也可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。五、经典例题剖析例题 1 下列可以作为自养微生物氮源的是（ ）a n2 、尿素b 牛肉膏、蛋白胨c 尿素、酵母粉 d 铵盐、硝酸盐包括无机碳源和无机氮源。 固氮微生物虽能直接b 凡是碳源都能提供能量。解析： 明确自养微生物从外面吸收的是无机物，利用 n2 还原为 nh3 、但是它属于异养生物。） d 答案（例题 2 下列说法正确的是（ ）a 同一种物质不可能既作碳源又作

18、氮源。c 除水以外的无机物仅提供无机盐。 d 无机氮源也能提供能量。解析 ：自养微生物以 co2 或碳酸盐为唯一碳源进行代谢生长，但是co2 不能作为能源。铵盐、硝酸盐等既可作为微生物最常用的氮源，也可作为某些化能自养微生物的能源物质。答案（ d ） 例题 3 通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。 在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入 10 酚可以抑制细菌和霉菌。利用下述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出 （ ） （ 2004 江苏）a 大肠杆菌b 霉菌c 放线菌d 固氮细菌解析：围绕选择培养基对微生物的选择

19、作用原理进行问题思考。答案：.b 、 c、 d例题 4 尿素分解菌能分解尿素是因为可以合成a 尿素酶b 脲酶 c 蛋白酶d 细菌酶解析： 尿素分解菌能分解尿素的原理是可以合成脲酶。答案：（ b ）例题 5. 为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？答案：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖， 而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。例题 6、 .如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？答案： 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3 个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。例题 7、 为什么分

20、离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？答案： 这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg ）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中： 好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185 万， 放线菌数约为477 万， 霉菌数约为23.1 万。 因此，为获得不同类型的微生物， 就需要按不同的稀释度进行分离， 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。例题8、人们不会在热泉中发现活着的嗜冷海藻，而经常可以在冷水环境中分离出嗜热微生物。请根据酶的特性分析产生这种现象的原因。 （ 2004 天津理科综合能力测试）微生物与环境的关系、酶的特这是

21、一道分析综合题，联系微生物取样的依据的知识、 解析：性等知识来回答。答案： 嗜冷海藻体内的酶遇到高温后，酶的分子结构被破坏而失去活性， 海藻很快会死亡；而嗜热微生物体内的酶遇到低温环境， 酶的活性降低， 但酶分子结构没有被破坏， 遇到合适的温度又可以恢复活性。例题9、淀粉酶可以通过微生物发酵生产，为了提高酶的产最，请你设计一个实验，利用诱变育种方法， 获得产生淀粉酶较多的菌株。 写出主要实验步骤。 根据诱发突变率低和诱发突变不定向性的特点预期实验结果。提示：生产菌株在含有淀粉的固体培养基上，随其生长可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈。 （ 2004 天津理科综合能力测试）解析

22、： 这是一道以诱变育种、选择培养和鉴别培养等知识为载体的实验设计题， 综合性强，难度较大。 既要求学生掌握实验原理， 也要求学生具备较强的实验设计的能力及对实验结果的预测和分析能力。答案：主要实验步骤：第一步： 将培养好的生产菌株分两组。 一组用一定剂量的诱变剂处理， 另一组不处理做对照。第二步：制备含淀粉的固体培养基。第三步： 把诱变组的大量菌株接种于多个含淀粉的固体培养基上， 同时接种对照组， 相同条 件下培养。第四步：比较两组菌株菌落周围透明圈的大小，选出透明圈变大的菌株。预期实验结果：a.由于诱发突变率低，诱变组中绝大多数菌落周围的透明圈大小与对照组相同。b.由于诱发突变不定向性，诱变

23、组中极少数菌落周围的透明圈与对照组相比变大或变小。限时训练一、 选择题： （本大题共32 题， 每题 2 分， 共 64 分。 每小题只有一个选项最符合题意。 ） 1、下列几项需要用到灭菌的是a、实验者的衣着和手b、实验操作的空间c、牛奶d、 培养基2、高温灭菌的原理是a、每种微生物生长的最适宜温度是一定的b 、微生物对于高温环境不适应c、高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动 d 、 高温降低了环境中的氧气浓度3、能排除培养基是否有杂菌污染的方法是a、将未接种的培养基放在实验桌培养b、将未接种的培养基放在窗台培养c、将未接种的培养基放在恒温箱中培养d、将已接种的培养基放在恒温箱中培养

24、、有关培养基配制原则叙述正确的是4氮源、无机盐及生长因子a 、任何培养基都必需含有水、 碳源 、碳源和氮源必需具有一定的比例，且碳源比氮源要多 b 、氧、渗透压的影响c 、微生物的生长除受营养因素影响外，还受到 ph 、营养物质的浓度越高越好d 、灭菌的标准是5 b 、杀死所有的微生物 a 、杀死所有的病原微生物c 、杀死所有微生物的细胞、芽胞、孢子d 、抑制病原菌生长6、用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目， 其结果与实际值比 a 、 比实际值要高 b、 比实际值要低d、比实际值可能高也可能低c、和实际值一样7、尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培养基时a 、葡萄糖在培养基中越多越好b 、

25、尿素在培养基中越少越好c、尿素分解菌有固氮能力，故培养基中只需无机氮d、尿素分解菌无固氮能力，故培养基中的尿素为化合态氮8 、外科手术器械要以杀死什么为标准芽胞、 c 、 螺旋菌d a 、球菌b 、杆菌、在尿素分解菌的分离与计数的实验中，产生标准菌落的细菌最初数目和培养基分别是9 b 、许多细菌，液体培养基培养基a 、一个细菌，液体培养基d 、许多细菌，固体培养基c 、一个细菌，固体培养基6 个菌落， 10 培养基上筛选出大约 15010 、在做分离分解尿素的细菌实验时， a 同学从对应）同学的结果产生原因可能有（而其他同学只选择出大约50 个菌落。 a没有设置对照由于土样不同 由于培养基污染

26、由于操作失误、c、 db、 a、） 11、下列叙述正确的是： （、 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质a 、 培养基只有两类： 液体培养基和固体培养基 b 、固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 c d 、微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌12、下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是（）、mgso7ho、葡萄糖、尿素、琼脂、水 naa、khpo、hpo 242244 o、葡萄糖、琼脂、水 mgso - 7hpob、kh、 nahpo、222444 7h - 0、尿素、琼脂、水 c、khpo、nahpo、mgso 242442。、牛肉膏、蛋白月东、 琼脂、水、d、kh

27、po、nahpomgso - 7h242244 37度的恒温箱中的目的是13将接种后的培养基和未接种的培养基同时放入 对比分析培养基上是否生有杂菌b 、 a 、对比观察培养基有没有被微生物利用d 、 为了下次接种时再用 b 、没必要放入未接种的培养基 ） 14 、请选出下列正确的操作步骤（土壤取样无菌水的锥形瓶中10g 土壤取出加入盛有90ml称取吸取0.1ml进行平板涂布7631245 1 0 1 0、稀释度依次稀释至1010、10、10、10、b、a.d、c、15、可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是：（）a、以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂b、以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂

28、c、以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹出试剂d、以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩服试剂16、下面不符合微生物培养基配制原则的是a.配制培养基时，要注意各种营养物质的浓度和比例b.任何培养基都不能没有有机物c .培养基的ph要适宜d.异养微生物的培养基至少要有一种有机物17 .通常用来作为菌种鉴定的重要依据是（）a .菌落 b.细菌形态c.细菌体积d.细菌结构18 .要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）a.加入青霉素的培养基b.加入高浓度食盐的培养基c.固体培养基d.液体培养基19 .某混合样品中微生物a的含量极少，要得到大量的微生物a比较理想方法是（）a.固体发酵 b.氨基酸发酵 c.

29、液体发酵d.需氧发酵20、突变型面包霉常需要在基本培养基上添加适当的氨基酸才能生长。现在用两种氨基酸依赖型红色面包霉突变株 a和b,分别接种到下面的 6种培养基上，两种突变株都不能在1、3、5号培养基上生长，a、b可以分别在2、4和2、6号培养基上生长。培养基成分如下表，关于突变株 a 和b分别对于a-j中氨基酸需求的说法正确的是（）12345 6 培养基ehgj bcde befg ghij cfhi defi添加氨基酸 a.两种突变株对氨基酸的需求是相同的b .两种突变株都需要 g氨基酸才能生长c.两种突变株必须同时供应4种氨基酸才能生长d.两种突变株都能在由4、5号两种培养基组成的混合培

30、养基中生长21、将乳酸菌的培养条件从有氧环境转变为无氧环境时，下列过程加快的是葡萄糖的利用二氧化碳的放出atp的形成丙酮酸的氧化a . b. c. d.22、科学家在被称为“九北”（东太平洋赤道附近的北纬 ）的漆黑的海底深处的火山口附近发现了“人丁兴旺”的生物村落。这里的细菌能把有毒的废料当“早餐”，能利用硫化氢、铁、氢和其他一些化学物质来产生葡萄糖，从而维持自己的生命活动。这些细菌的新陈代谢类型是 （a.光能自养型b.化能自养型c.光能自养和化能自养的混合型d.异养型23、下列说法正确的是（）a.发酵罐中微生物的生长繁殖与代谢产物的形成都与ph有关b .单细胞蛋白是从微生物细胞中提取出来的c

31、.谷氨酸棒状杆菌要在隔绝空气的条件下发酵才能得到谷氨酸（味精的主要成分）d.人工诱变、细胞工程、基因工程等都对微生物进行定向改造24、发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌，获得纯种的方法不包括（ 根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基a.b.根据微生物缺乏生长因子的种类，在培养基中增减不同的生长因子c,根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同比例的核酸d.根据微生物对抗菌素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗菌素25固关于固氮微生物的叙述正确的是（）a .代谢类型是自养需氧型的b.只能与豆科植物共生c.促进了自然界的氮循环d.能将no还原成nh3226、给含氨

32、（nh）较多的土壤中耕松上，有利于提高土壤肥力， 其原因是（）3a .改善土壤通气性，根呼吸加强b.增加土壤中n的含量2c.改善土壤通气性，硝化细菌繁殖快，有利于土壤中硝酸盐增加d.促进氮的扩散27、在光亮处用同一培养液分别培养单细胞绿藻和酵母菌，结果如图。原因是（）a.培养液中缺少无机盐b.培养液中缺少o 2c.培养液中缺少cod.培养液中缺少有机物228、实验测定链霉素对 3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂培养 基上画3条等长的平行线（3条线均与右图中的链霉素带接触），将培养皿置于37 c条件下恒温培养.以下关于链霉结果如图所示。 从实验结果看，3天，）素的叙述哪一项是不正

33、确的？（ a .它能阻止结核菌的生长 b.它对结核菌比对霍乱菌更有效 c.它对结核菌比对伤寒菌更有效d.它可用于治疗伤寒病人、要从土壤中将分解纤维素的细菌分离出来，应29该将它们接种在 含有蛋白豚的固体培养基上 b、a、加入指示剂的鉴别培养基上含四大营养要素的培养基上d、 c、只有纤维素粉而无其他碳源的选择培养基上、将配制好的培养基进行灭菌应用30煮沸灭菌、d、高压蒸汽灭菌c、干热灭菌 a、灼烧灭菌 b、对微生物进行计数时，一般应该选择菌落数在何种范围内的平板计数 3130-600 d、c、30 300 a、30 100b、30-20032、进行系列稀释时，按怎样的顺序进行 两者都可a、b d

34、、不论稀释度大小 ba、稀释 度递增、稀释度递减 c、分）多选题（2*2=4使用选择培养基培养微生物的目的是33、 b、使需要的微生物大量繁殖、除去其他微生物 ad、可以增加要培养的微生物的浓度c、通过表现特殊性状，与其他微生物相区别、设置对照实验的要求是34 b、其他条件相同、控制单一变量 a、只要其他条件相同就可以d、其他条件要适宜 c.二、简答题 （说明：37、38任选一题，）36、（8分）下表为一种营养液的配方，试根据表中的内容作答:（1）若用于植物培养，在培养的初期，植物出现萎蕉现象，最可能的原因是。可采用的最简单的有效措施是 o（2）要使植物正常生活，培养液中至少还应加入 种必需元

35、素。-2+等离较少而ca （3）培养一段时间后，检测到培养液中留存的no3子较多，这一现象与细胞膜的 有关。（4）此培养液若用于培养微生物，则可以培养的微生物代谢类型是o培养液中含有的营养物质有 类。表中各成分重量确定的原则是，若用于菌种的鉴定，应该增加的成分.37、（5分）有人送来一支芽抱杆菌，其中一部分芽胞杆菌有抗青霉素能力，另一部分没有抗性。请你把对青霉素有抗性的芽胞杆菌分离出来。（1）现有条件：无菌牛肉膏培养基两个，无菌接种台,接种工具齐备，医用青霉素两支。请你填写有关的实验操作及实验分析。取两个培养基，分别标号a、b, a、b培养基分别加入 ,加入过程一定要操作。向 a培养基中接种

36、o接种后，将 a培养基放入恒温箱培养两天。从 挑取生长良好的芽抱杆菌，接到 b培养基中。接种后， 将b培养基放入恒温箱内培养两天，即可获得较多抗青霉素芽抱杆菌。第两个步骤的目的38、（5分）现有金黄色葡萄球菌、酵母菌、硝化细菌、圆褐固氮菌、乳酸菌等微生物混合在一起的液体。请设计实验，利用改变培养基成分等培养条件，将它们分离开来（它们不能在同一种培养基上生长），并说明注意事项。例如：用加高浓度食盐的培养基，加少许液体，分离金黄色葡萄球菌。39、（6分）下面是最早发现青霉素的科学家弗莱明所进行的探索过程。观察及对问题的认识：细菌培养基中，偶然生出青霉菌，在其周围细菌没有生长。为什么出,现这种现象？

37、假设：进行实验：把青霉菌放在培养液中进行培养，然后观察使用这种培养液对细菌生长的影响。结果：这种培养液阻止了细菌的生长和繁殖。结论：弗莱明在持续的研究中分离出了这一物质，分析出它的特征，并将它命名为青霉素。说明：在实验室里培养细菌常用琼脂配制成凝胶，平铺在培养皿里作为培养基 （图2 9a）o某细菌需要添加特殊培养液才能正常生长（图2 9b） o.请回答：.）作为这一实验的下列假设中，最为恰当的是 （1青霉菌能产生有利于人类的物质a.青霉菌污染了细菌生长的培养基b,青霉菌可能吞噬了细菌c.青霉菌可能产生了不利于细菌繁殖的物质d. （2）为了证明青霉素确实是由青霉菌产生的而不是培养液和培养基中的其

38、他物质产生的，则应设计对照实验，其实验方法是。.（3）若对照组实验结果为，则充分证明青霉素确实能产生可阻止细菌繁殖.的物质。40、（8分）三位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为6的培养基中，得到以下三种统计结果。10 o第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230,并且取平均值 239200、第二位同学在该浓度下涂布了3个平板统计的菌落数分别为20、作为统计结果。153,并且取220237、218、233、第三位同学在该浓度下涂布了4个平板统计的菌落数分别为作为统计结果。平均值 227你认为三位同学的结果是否有效？第一位同学的结果理由是第二位同学的结果理由是第三位同学的结果 .理由是该实例说明了哪些问题？ ？同a分）某班两同学在做用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数实验时，41、（56个菌