生物化学课件：蛋白质化学9-10

1、2021-10-261第六节：蛋白质的性质2021-10-262一、蛋白质性质：一、蛋白质性质： 胶体性质胶体性质(p299) 两性性质及等电点两性性质及等电点 (p291) 蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固 (p233,300) 蛋白质的紫外吸收蛋白质的紫外吸收 蛋白质的分子量蛋白质的分子量 (p291) 蛋白质的呈色反应蛋白质的呈色反应 二、蛋白质含量测定法二、蛋白质含量测定法 (p315)2021-10-263 蛋白质分子量大，它在水溶液中所形成蛋白质分子量大，它在水溶液中所形成的颗粒直径约为的颗粒直径约为1100nm。胶体溶液具有胶体溶液具有布朗运动、丁达尔

2、现象、电泳现布朗运动、丁达尔现象、电泳现象、不能透过半透膜以及具有吸附能力象、不能透过半透膜以及具有吸附能力等。等。 利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可利用蛋白质不能透过半透膜的性质，可以对蛋白质进行纯化，这是提纯蛋白质的一以对蛋白质进行纯化，这是提纯蛋白质的一种常用方法。种常用方法。( (一一) )胶体性质胶体性质2021-10-264在溶液中能形成稳定的胶体的因素在溶液中能形成稳定的胶体的因素极性不电离基团：极性不电离基团：形成形成水化层水化层极性电离基团：极性电离基团：形成形成双电子层双电子层原原因因2021-10-265 ( (二二) )两性性质及等电点两性性质及等电点PrCOO-NH

3、3+pH=pI净电荷净电荷=0=0Isoelectric point (pI)定义定义： 在某一在某一pH值溶液中，值溶液中，Pr酸性基团和碱性基团酸性基团和碱性基团的解离程度相当的解离程度相当, Pr分子所带正负电荷相等，净分子所带正负电荷相等，净电荷为零电荷为零,在电场中既不向阳极也不向阴极移动，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的此时溶液的pH值称为值称为该蛋白质的该蛋白质的pIpI。pHpI净电荷为负净电荷为负PrCOO-NH2OH-H+pHpI净电荷为正净电荷为正PrCOOHNH3+OH-H+2021-10-266 蛋白质和氨基酸一样，是两性电解质。蛋白质和氨基酸一样，是两性

4、电解质。在蛋白质分子中，可解离基团除了肽链末在蛋白质分子中，可解离基团除了肽链末端的端的-氨基氨基和和-羧基羧基外，主要的还是肽外，主要的还是肽链上氨基酸残基的一些侧链基团，链上氨基酸残基的一些侧链基团， 如：如： NHNH2 2、COOHCOOH、-COOH-COOH、咪唑基、胍、咪唑基、胍基、基、OHOH等等。2021-10-2672021-10-268 pH=pI时时，净电荷为零，在电场中不移动，净电荷为零，在电场中不移动 pHpI时时，净电荷为负，在电场中向阳极移动，净电荷为负，在电场中向阳极移动 pHpI时时，净电荷为正，在电场中向阴极移动，净电荷为正，在电场中向阴极移动 在在pI时

5、，蛋白质失去了胶体的稳定条件，即没有相时，蛋白质失去了胶体的稳定条件，即没有相同电荷相互排斥的作用。所以不稳定，溶解度最小，同电荷相互排斥的作用。所以不稳定，溶解度最小，易沉淀易沉淀. 2021-10-269（三）蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固（三）蛋白质的变性、复性、沉淀和凝固2.复性复性1.变性变性3.沉淀和凝固沉淀和凝固定义定义变性因素变性因素变性实质变性实质变性蛋白质的特点变性蛋白质的特点 变性的分类变性的分类定义定义沉淀类型沉淀类型2021-10-2610 吴宪教授吴宪教授19311931年年：“天然天然PrPr分子借助次级键分子借助次级键连接而成一种紧密，有规则的空间结构，变连接而

6、成一种紧密，有规则的空间结构，变性作用使次级键破坏从而使结构松散性作用使次级键破坏从而使结构松散”。1. 蛋白质的变性蛋白质的变性(denaturation)(1)定义：在某些理化因素的作用下，蛋白质严格定义：在某些理化因素的作用下，蛋白质严格的空间结构（不包括肽键）被破坏，从而引起若的空间结构（不包括肽键）被破坏，从而引起若干理化性质改变和生物学功能丧失的现象。干理化性质改变和生物学功能丧失的现象。2021-10-2611变变性性 因因素素物理因素物理因素高温、高压高温、高压紫外线、紫外线、X射线射线、电离辐射和超声波等电离辐射和超声波等化学因素化学因素有机酸、生物碱有机酸、生物碱有机溶剂、

7、重金属盐有机溶剂、重金属盐高浓度尿素、盐酸胍等高浓度尿素、盐酸胍等2021-10-2612变性实质：变性实质：破坏了破坏了空间结构，一级结构空间结构，一级结构不受不受影响（分子组成、影响（分子组成、MWMW不变）。不变）。2021-10-2613变性蛋白变性蛋白质质 的特点的特点生物学活性丧失生物学活性丧失理化性质改变理化性质改变易被蛋白酶水解易被蛋白酶水解 空间结构改变空间结构改变旋光性、光吸收改变等旋光性、光吸收改变等溶解度溶解度，沉降率，沉降率粘度粘度扩散速度扩散速度2021-10-2614变性变性分类分类可逆变性可逆变性: Pr变性后如将变性剂除去，该变性后如将变性剂除去，该Pr分子的

8、天然构象和生物学分子的天然构象和生物学 活性还能恢复，这活性还能恢复，这一过程称为一过程称为复性复性（renaturation）不可逆变性：不可逆变性：若变性条件强烈，作用时若变性条件强烈，作用时间长，构像变化大，理化性质难以恢复。间长，构像变化大，理化性质难以恢复。举例：医疗；生物制品保存；生活等。举例：医疗；生物制品保存；生活等。应用：变性灭菌、消毒；变性制食品；应用：变性灭菌、消毒；变性制食品；2021-10-2615HOCH2CH2SH O NH2- C -NH2= NH2+ NH2- C -NH2=UreaGuanidine HClMercaptoethanolCl-SDSSO4-

9、-(CH2)11CH3常見的蛋白常見的蛋白质变质变性性剂剂Juang RH (2004) BCbasics2021-10-2616极极性性头头部部非非极极性尾巴性尾巴SDS 是一是一种表种表面活性面活性剂剂sodium dodecyl sulfateStryer (1995) Biochemistry (4e) p.2752021-10-2617SDS 在蛋白在蛋白质质表面均勻表面均勻铺铺上一上一层负电荷层负电荷SDSboiling变变性蛋白質成一性蛋白質成一线线狀分子狀分子自然状态自然状态蛋白蛋白质质並且均勻帶上一並且均勻帶上一层负电荷层负电荷Juang RH (2004) BCbasics

10、2021-10-26182021-10-2619核糖核酸酶变性与复性作用核糖核酸酶变性与复性作用Native ribonucleaseDenative reduced ribonucleaseNative ribonuclease8 M urea and -mercapotoethanolDialysis变性变性2021-10-2620 去除变性因素后，变性蛋白恢复原来去除变性因素后，变性蛋白恢复原来的空间结构，恢复生物活性的现象。的空间结构，恢复生物活性的现象。本质本质一级结构决定高级结构一级结构决定高级结构2.复性复性（renaturation）2021-10-2621变性蛋白质为什么能复

11、性？变性蛋白质为什么能复性？ 在一定的环境条件下，蛋白质的一级在一定的环境条件下，蛋白质的一级结构能够决定二、三、四级结构。变性蛋结构能够决定二、三、四级结构。变性蛋白质的二、三、四级结构虽然遭到破坏，白质的二、三、四级结构虽然遭到破坏，但是一级结构仍然保持不变，因此除去变但是一级结构仍然保持不变，因此除去变性剂后，在适当的环境条件下，蛋白质能性剂后，在适当的环境条件下，蛋白质能卷曲折叠成为卷曲折叠成为能量最低能量最低的构象，一般天然的构象，一般天然蛋白质正是具有这种能量最低的构象。蛋白质正是具有这种能量最低的构象。 2021-10-2622 加热使蛋白质变性并凝聚成块状称为加热使蛋白质变性并

12、凝聚成块状称为凝凝固（固（coagulation）。 因此，凝固的蛋白质一定发生变性。因此，凝固的蛋白质一定发生变性。 Whats coagulation of protein?2021-10-2623 凝固：凝固：变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于变性后的蛋白质由于疏水基团的暴露而易于沉淀沉淀( (但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质但沉淀的蛋白质不一定都是变性后的蛋白质) ) ，加热等因素使蛋白质变性并凝聚成块状。加热等因素使蛋白质变性并凝聚成块状。3. 沉淀与凝固沉淀与凝固沉淀：沉淀：蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现蛋白质分子相互聚集而从溶液中析出的现象称沉淀。象称沉淀。202

13、1-10-2624 沉淀类型沉淀类型 PI PI法法 盐析法盐析法 有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法 重金属盐沉淀蛋白质重金属盐沉淀蛋白质 生物碱、有机酸试剂沉淀蛋白质生物碱、有机酸试剂沉淀蛋白质 加热变性沉淀法加热变性沉淀法 抗体对蛋白质的沉淀：抗体对蛋白质的沉淀：2021-10-2625机理：夺取蛋白质颗粒上的水化膜，机理：夺取蛋白质颗粒上的水化膜， 降低溶液的介电常数降低溶液的介电常数2021-10-2626+-+-蛋白质胶体颗粒的沉淀蛋白质胶体颗粒的沉淀 带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质酸酸酸酸碱碱碱碱脱水脱水脱水脱水脱水脱水

14、不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒 （沉淀）（沉淀）带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质 （疏水胶体）（疏水胶体）带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质 （疏水胶体）（疏水胶体）碱碱酸酸（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）（亲水胶体）2021-10-2627不可逆沉淀不可逆沉淀 在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构蛋白质的结构和性质和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质由于沉淀过程发生了蛋白

15、质的结构和性质的变化，所以又称为的变化，所以又称为变性沉淀。变性沉淀。 如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀如加热沉淀、强酸碱沉淀、重金属盐沉淀和生物碱沉淀和生物碱沉淀等都属于不可逆沉淀等都属于不可逆沉淀2021-10-2628可逆沉淀可逆沉淀 在温和条件下，通过改变溶液的在温和条件下，通过改变溶液的pHpH或电荷或电荷状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。状况，使蛋白质从胶体溶液中沉淀分离。 在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变在沉淀过程中，结构和性质都没有发生变化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，化，在适当的条件下，可以重新溶解形成溶液，所以这种沉淀又称为所以这种沉淀又称为非变性沉淀非

16、变性沉淀。 可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，可逆沉淀是分离和纯化蛋白质的基本方法，如如等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等电点沉淀法、盐析法和有机溶剂沉淀法等等。2021-10-2629定义定义：加入大量中性盐以破坏加入大量中性盐以破坏PrPr的稳定因素并的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。使从溶液中沉淀析出的现象。 原理原理: :破坏破坏PrPr两个稳定因素：水化膜和电荷层两个稳定因素：水化膜和电荷层中性盐中性盐：(NH(NH4 4) )2 2SOSO4 4；NaNa2 2SOSO4 4；NaClNaCl等。等。 半饱和硫酸铵沉淀半饱和硫酸铵沉淀球球PrPr 饱和硫酸铵沉淀清饱和

17、硫酸铵沉淀清PrPr优点优点：PrPr不变性，常用。不变性，常用。盐析法（盐析法（Salting out)(p305)Salting out)(p305)叫分段盐析法叫分段盐析法2021-10-2630蛋白质分子表面的疏水区域，聚集了许多H2O，盐浓度高时，这些水分子被盐抽出，暴露出的疏水区域相互结合疏水区域相互结合，沉淀。盐析（盐析（NH4）2SO42021-10-2631分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，后破坏了分子在等电点时，相互吸引，聚合沉淀，后破坏了这种吸引力，使分子分散，溶于水中这种吸引力，使分子分散，溶于水中盐溶2021-10-2632 大部分蛋白质均含有带共轭双键的大部分蛋白

18、质均含有带共轭双键的TyrTyr、PhePhe和和TrpTrp。这三种。这三种AAAA在在280nm280nm 附近有特征性吸收附近有特征性吸收峰。在此波长范围，蛋白质的峰。在此波长范围，蛋白质的A A280280与其浓度成正与其浓度成正比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定量测定。比。利用这个性质，可以对蛋白质进行定量测定。 此外，蛋白质的肽键在此外，蛋白质的肽键在215nm215nm、225nm225nm亦有紫亦有紫外吸收，可以用于蛋白质浓度的测定外吸收，可以用于蛋白质浓度的测定( (四）蛋白质的紫外吸收四）蛋白质的紫外吸收2021-10-2633（五）（五） 蛋白质的分子量蛋白质的分子量

19、蛋白质的相对分子量蛋白质的相对分子量蛋白质相对分子量在蛋白质相对分子量在10 0001 000 000之间。测定之间。测定分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。2021-10-2634测定蛋白质测定蛋白质分子相对质分子相对质量的方法量的方法1.根据化学组成测定最低根据化学组成测定最低相对分子质量相对分子质量4.渗透压法：渗透压法：6.沉降法：沉降法：超速离心超速离心3.凝胶过滤法凝胶过滤法：2 .SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳法：法： 5. 葡聚糖凝胶过滤法葡聚糖凝胶过滤法p2

20、97 2021-10-26351.根据分子组成测定最小分子量根据分子组成测定最小分子量 测定某一微量元素或某一氨基酸的含量如铁原子或色氨酸，测定某一微量元素或某一氨基酸的含量如铁原子或色氨酸，并假设蛋白质分子中只有一个铁原子或一个色氨酸，即最低相并假设蛋白质分子中只有一个铁原子或一个色氨酸，即最低相对分子质量对分子质量=铁的原子量铁的原子量/铁的百分含量铁的百分含量牛血清白蛋白含牛血清白蛋白含Trp 0.58% 最低最低M=35200，实际为，实际为69000，含，含2个个Trp100=16700=最小最小MFe分子量分子量 Fe(%)55.80.335(实为实为16900 马心马心)如肌红蛋

21、白含如肌红蛋白含0.335%的铁的铁2021-10-26362 .SDSPAGE （十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳）聚丙烯酰胺凝胶电泳）2021-10-2637 加入加入SDS和少量巯基乙醇，则电泳迁移率主要和少量巯基乙醇，则电泳迁移率主要取决于其取决于其相对分子质量相对分子质量，而与电荷和分子形状无关。，而与电荷和分子形状无关。影响迁移率的主要因素影响迁移率的主要因素凝胶的分子筛效应对长短不同的棒形分子会凝胶的分子筛效应对长短不同的棒形分子会 产产 生不生不同的阻力主要因素同的阻力主要因素凝胶的浓度和交联度凝胶的浓度和交联度同一电泳条件下，分子小，受阻小，游动快，迁移同一

22、电泳条件下，分子小，受阻小，游动快，迁移率大。相对分子质量大者，迁移率小率大。相对分子质量大者，迁移率小 优点：优点：快速，样品用量少，可同时测几个样品快速，样品用量少，可同时测几个样品 缺点：缺点：误差大，约为误差大，约为10（误差主要来源于迁（误差主要来源于迁移距离的测量误差）移距离的测量误差） 此方法只能测得此方法只能测得 亚基肽链的相对分子质量亚基肽链的相对分子质量2021-10-26383 凝胶电泳：凝胶电泳：用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。用凝胶（淀粉、琼脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。 1）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。）圆盘电泳：玻璃管中进行的凝胶电泳。2）平板电泳

23、：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。）平板电泳：铺有凝胶的玻板上进行的电泳。+ -+2021-10-26394 .据据pr的渗透压测的渗透压测 蛋白质分子量蛋白质分子量 2021-10-2640用一半透膜将用一半透膜将pr溶液与纯水隔开，当渗透压达平溶液与纯水隔开，当渗透压达平衡时，测定其渗透压，计算分子量：衡时，测定其渗透压，计算分子量：C：浓度（克：浓度（克/升）升）R：气体常数（：气体常数（0.082升升/大气压大气压/克分子克分子/K开氏温度）开氏温度）T：绝对温度（开氏温度）：绝对温度（开氏温度） ：以大气压表示的渗透压：以大气压表示的渗透压ccTRMr0lim=2021-10-2641

24、优点：优点： 渗透压法简单、准确渗透压法简单、准确(10000-100000)、且不受蛋白质分子的、且不受蛋白质分子的形状和水化程度影响形状和水化程度影响不足：不足： 但受但受pH的影响，不能区别溶液中蛋白质分子是否均一的影响，不能区别溶液中蛋白质分子是否均一2021-10-2642 5、 葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量葡聚糖凝胶过滤法分析蛋白质分子量 p297 2021-10-2643 标准蛋白质（已知标准蛋白质（已知MrMr和斯托克和斯托克半径）和待测蛋白质半径）和待测蛋白质必须具有相同必须具有相同的分子形状的分子形状（接近球体），分子形（接近球体），分子形状为状为线型线型或与凝胶发生或

25、与凝胶发生吸附吸附的蛋白的蛋白质不可用此法测定。质不可用此法测定。2021-10-2644沉降系数（沉降系数（s）：单位（）：单位（cm）离心场里的沉降速度。）离心场里的沉降速度。 s = v2x v =沉降速度（沉降速度（dx/dt）=离心机转子角速度（弧度离心机转子角速度（弧度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm）沉降系数的单位常用沉降系数的单位常用S，1 S=110-13（s）超离心法超离心法是最准确可靠的确定蛋白质分子量方法。是最准确可靠的确定蛋白质分子量方法。（Svedberg 于于1940年设计）：蛋白质颗粒在年设计）：蛋白质颗粒在25

26、50104 g离心力作用下从溶液中沉降下来。离心力作用下从溶液中沉降下来。6 .超离心法超离心法2021-10-2645蛋白质分子量（蛋白质分子量（M）与沉降系数（）与沉降系数（s）的关系）的关系M = RTsD（1V）R气体常数（气体常数（8.314107ergsmol -1 度度-1）T绝对温度绝对温度D扩散常数（蛋白质分子量很大，离心机转速很扩散常数（蛋白质分子量很大，离心机转速很快，则忽略不计）快，则忽略不计）V蛋白质的微分比容（蛋白质的微分比容（m3g-1）溶剂密度（溶剂密度（20，gml-1） s沉降系数沉降系数2021-10-2646 反应反应 试剂试剂 颜色颜色 反应基团反应基

27、团 有此反应的有此反应的Pr及及AA双缩脲反应双缩脲反应 NaOH,稀稀CuSO4 紫或粉紫或粉 2个以上肽键个以上肽键 所有蛋白质所有蛋白质Millon反应反应 Millon,硝酸，亚硝酸硝酸，亚硝酸 红色红色 酚基酚基 Tyr黄色反应黄色反应 HNO3及及NH3 黄、橘黄黄、橘黄 苯基苯基 Phe,Tyr乙醛酸反应乙醛酸反应 乙醛乙醛酸酸H2SO4 紫红紫红 吲哚吲哚 Trp坂口反应坂口反应 次氯酸钠次氯酸钠,萘酚萘酚 红色红色 胍基胍基 ArgFolin酚试剂反应酚试剂反应 CuSO4磷钨酸磷钨酸-钼酸钼酸 蓝色蓝色 酚基酚基 Tyr茚三酮反应茚三酮反应 茚三酮茚三酮 紫蓝色紫蓝色 游离

28、氨、羧基游离氨、羧基 Pro和羟和羟Pro呈黄色呈黄色（六）蛋白质的呈色反应（六）蛋白质的呈色反应2021-10-2647二、二、PrPr含量测定法含量测定法 1.1.微量凯氏定氮法：微量凯氏定氮法：2.2.双缩脲法：双缩脲法：3.3.福林福林- -酚酚(Lowry)(Lowry)法法 改良的改良的LowryLowry法法4.4.考马斯亮蓝法（考马斯亮蓝法（BradfordBradford法法) )5.5.紫外吸收法紫外吸收法6.BCA6.BCA法法7.7.胶体金法胶体金法2021-10-2648 蛋白质含有多个肽键，可发生双缩脲反应，蛋白质含有多个肽键，可发生双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与

29、铜离子形成紫红色络合物，在碱性溶液中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物，可在可在540nm比色测定，其颜色深浅与蛋白质浓度成比色测定，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质的相对分子质量及氨基酸组成无正比，而与蛋白质的相对分子质量及氨基酸组成无关。关。 快速，但不很准确快速，但不很准确该法测定的蛋白质浓度范围是该法测定的蛋白质浓度范围是 110mg/ml (g/L)双双 缩缩 脲脲 法法2021-10-2649LowryLowry法法 此法是对双缩脲法的发展，首先在碱此法是对双缩脲法的发展，首先在碱性溶液中形成铜与蛋白质的复合物，然后性溶液中形成铜与蛋白质的复合物，然后这种复合物及这种复合物及T

30、yr和和Trp残基还原磷钼酸及残基还原磷钼酸及磷钨酸试剂磷钨酸试剂(福林福林-酚试剂酚试剂)，产生深蓝色。，产生深蓝色。 测定蛋白质的含量范围：测定蛋白质的含量范围： 500nm 0.050.5mg/ml 750nm 0.03 0.3mg/ml2021-10-2650改良改良LowryLowry法：法： 在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混合试剂与酪氨酸在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混合试剂与酪氨酸上的酚发生反应，生成上的酚发生反应，生成蓝色蓝色化合物，将其与双缩化合物，将其与双缩脲法结合起来，形成两种颜色的混合物，在脲法结合起来，形成两种颜色的混合物，在650nm650nm具有特定的吸收。灵敏度较高具有

31、特定的吸收。灵敏度较高2525 g-250g-250 g/ml.g/ml. 曾经的蛋白质浓度测定标准方法曾经的蛋白质浓度测定标准方法2021-10-2651 考马斯亮蓝考马斯亮蓝G G250250是一种带有负电荷的染料，是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下可与在酸性条件下可与蛋白质蛋白质上的正电荷结合，上的正电荷结合，形成蓝色化物，在形成蓝色化物，在595595nmnm具有特定吸收具有特定吸收本法反应快，操作简单，灵敏度高，重复性本法反应快，操作简单，灵敏度高，重复性好，消耗样品少，但不同蛋白质之间的差异好，消耗样品少，但不同蛋白质之间的差异较大，且标准曲线线性较差。较大，且标准曲线线性较差。测定范围：测定范围：0.010.011.0mg/ml1.0mg/ml2021-10-2652紫外吸收法紫外吸收法 280nm和和260nm 吸收差法：吸收差法： 由于核酸在由于核酸在260nm具有光吸收，对测定干扰较大，可采具有光吸收，对测定干扰较大，可采用用280nm、2