实验四肌肉组织氨基移换作用---纸层析ppt课件

1、 肌肉组织氨基移换作用 纸层析法一、实验目的一、实验目的1. 了解氨基移换作用的原理。了解氨基移换作用的原理。2. 熟习纸层析法的根本原理。熟习纸层析法的根本原理。3. 掌握纸层析法分别鉴定氨基酸的方法。掌握纸层析法分别鉴定氨基酸的方法。n 氨基移换作用转氨基作用氨基移换作用转氨基作用在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉- -氨基生成相氨基生成相应的应的- -酮酸，而另一种酮酸，而另一种- -酮酸得到此氨基生成相应的氨基酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程。酸的过程。二、实验原理二、实验原理n 人体内最重要的两种转氨酶：人体内最重要的两种转氨酶：谷丙转氨酶谷丙转氨酶

2、GPT/丙氨酸转氨酶丙氨酸转氨酶ALT 谷草转氨酶谷草转氨酶GOT/天冬氨酸转氨酶天冬氨酸转氨酶AST谷氨酸谷氨酸 +丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸酮戊二酸 +丙氨酸丙氨酸GPT谷氨酸谷氨酸 +草酰乙酸草酰乙酸 -酮戊二酸酮戊二酸 +天冬氨酸天冬氨酸 GOT正常人各组织中正常人各组织中GPT及及GOT 活性活性 (单位单位/克湿组织克湿组织)n血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预血清转氨酶活性，临床上可作为疾病诊断和预后的目的之一。后的目的之一。组组 织织 GPT GOT组组 织织 GPT GOT 肝肝 44000 142000胰胰 腺腺 2000 28000 肾肾 19000 91000脾脾 1

3、200 14000 心心 7100 156000肺肺 700 10000 骨骼肌骨骼肌 4800 99000血清血清 16 20COOH COOH CH2CH2C=OHCNH2COOHCH3COOHCOOHCH2CH2CHNH2COOHCH3C=O ALT谷氨酸谷氨酸 丙酮酸丙酮酸-酮戊二酸酮戊二酸 丙氨酸丙氨酸2. 层析 层析系统通常都有两个相组成：固定相和流动相。层析系统通常都有两个相组成：固定相和流动相。混合物在层析系统中的分别决议于该混合物的组分混合物在层析系统中的分别决议于该混合物的组分在这两相中的分配情况，普通用分配系数来描画。在这两相中的分配情况，普通用分配系数来描画。常用的分配

4、层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。常用的分配层析包括柱层析、纸层析、薄层层析。纸层析法纸层析法固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分固定相：吸附在滤纸纤维之间的水分流动相：层析液水饱和酚流动相：层析液水饱和酚分别原理：分别原理：利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数利用混合物各组分在固定相和流动相中分配系数差别而分别差别而分别谷氨酸：亲水性氨基酸谷氨酸：亲水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸丙氨酸：疏水性氨基酸3. 显色反响显色反响茚三酮与茚三酮与- -氨基酸反响生成紫红色化合物氨基酸反响生成紫红色化合物相对迁移率相对迁移率Rf三、实验步骤三、实验步骤1、酶液的制备、酶液的制备2、氨基移换反响、氨基移

5、换反响 参与物参与物ml对看管对看管测定管测定管 肌匀浆肌匀浆10滴滴10滴滴煮沸煮沸 5 min37 5 min0.1 mol/L丙氨酸溶液丙氨酸溶液0.5 ml0.5 ml0.1 mol/L-酮戊二酸溶液酮戊二酸溶液0.5 ml0.5 ml0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液1.5 ml1.5 ml混匀，混匀， 37 50 min 煮沸煮沸5 min3 3、层析、层析圆滤纸上标志圆滤纸上标志点样点样制造滤纸芯制造滤纸芯滤纸芯插入圆滤纸滤纸芯插入圆滤纸组装层析安装组装层析安装4 4、显色、显色把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器把层析后的滤纸取下，吹风机吹干后，用喷雾器均匀喷洒均匀喷洒0.50.5茚三酮溶液，再用吹风