软骨素提取方案汇总

1、最新资料推荐软骨素提取方案汇总硫酸软骨素提取方案一：稀碱-酶解提取法软骨煮沸4-6h （ 80C）与2% NaOH混匀（1 :6.25 ）提取1.5h调滤液pH（HCl，6-6.5 ） 过滤滤渣与2%NaOH混匀（1:0.12） 提取 1h 合并滤液调 pH（ 8.0-9.0 ） 加 入胰酶（1 000:0.5）水解1h加入胰酶（1000:0.5） 水解1.5h 加高岭土和活性炭吸附（用硅藻土代替）氯仿萃取取水层调pH6.8-7.295%乙醇沉淀（2.5倍）软骨素 步骤：先将软骨在80C水中煮46h ,然后按原料（干质量）与2%氢氧化钠的比例为1 : 6.25的量加入氢氧化钠溶液，室温提取1.

2、5h，然后用盐酸调pH到66.5 ,双层纱布过滤； 留下滤液， 滤渣再以1 : 0.12的质量比加入2%的氢氧化钠溶液， 于40C下提 取lh ,再用双层滤布过滤； 弃滤渣， 取滤液。合并2次滤液，并测量体积待用。滤液调节pH到8.09.0 ,按滤液与胰酶1000 : 0.5的比例 加入胰酶，于4050C水解lh 后，再按1000： 0.5的质量比加 入胃蛋白酶，4050C水解1.5 h ,过滤后加入高岭土和活性炭吸 附。用氯仿反萃取法萃取滤液,留水层调水层pH至6.87.2 ,再加入2.5 倍体积的95%以上乙 醇沉淀，即得硫酸软骨索。方案二：浓碱-复合酶提取法软骨煮沸4-6h （ 80C）

3、与1 mol/L NaOH混匀（1 :2 ）搅拌提取2h （ 45C）滤液pH（HCl , 6-6.5 ） 过滤滤渣与1mol/L NaOH 混匀 （1:1 ）提取 1.5h 合并滤液调 pH （ 8.0-9.0 ） 加入复合酶（1 000:1 ）水解 4h （ pH 为 8.5-9.0 , 40- 50C） 软 骨素白色粉末步骤：碱提取的最佳条件是按软骨与1 mol/L氢氧化钠溶液质量比1 ：2 混合，温度控制在45C,搅拌提取2h。复合酶酶解工艺的适宜条件为按复合蛋白酶与料液1 : 1000的质量比加入蛋白酶，控温4050C,保持溶液pH 8.59.0 ,水解4h。在最佳试验条件下，得到硫

4、酸软骨素为白色粉末，产品纯度达95.2 % , 收率为32.6%。方案三复合酶酶解提取法加酶（1%） 搅拌12h （ 55C）钠搅拌升温（85C）保温20min软骨预处理成骨粉加水（1:3 ）,调酸（HCI , 7.5 ） 加2%醋酸过滤滤液加胰酶酶解保温15min（85C） 超滤浓缩至1/2 装柱（IRC50离子交换树脂）加0.2mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=4.0 ） 加液10mL（速10mL/h）最新资料推荐收集洗脱液95%乙醇沉淀抽滤干燥软骨素纯品红外和液相检测步骤：把猪软骨预处理后， 以骨粉1 : 3的比例加入去离子水， 加 入原料量1%的复合酶(胰酶和木瓜蛋白酶)，于55C搅

5、拌酶解12 h。复合酶水解液用盐酸调PH7.5 ,加入2%的醋酸钠溶液，搅拌溶解后，升温到85C,保温20min ,过滤去残渣。滤液加入胰酶酶解.经酶解后的酶解液在 85C下维持15min , 过滤，乙醇沉淀， 干燥磨粉后得成品。影响该工艺水解反应的因素为酶解温度50C、pH 8.68.9值与加酶量039L。方案四碱提法软骨粉碎水提(1:4 ,碱浓度1 5%,提取 时间8h ,温度为40C)离心取上清液调pH ( 7.0 ) 95%乙醇沉淀(两倍)离心干燥软骨素粗品方案五双层酶提法软骨水浴干燥 (100C ,12h)冷却漂洗干燥(60C ,5h )加入锥形瓶放入摇床恒胰蛋白酶、木瓜蛋白酶溶液温

6、反应(38C)调pH加胃蛋白酶反应完全后酶灭活调 pH为中性 离心取上清液乙醇沉淀(2倍)静置(24h)过夜离心取沉淀干燥 (50 C ,3h) 称重软骨素粗品方案六 软骨蒸煮去肉和油脂冷冻干燥碱液提取(2%碱液，料液比1:8 ,温度为 35C ,时间为13h ) 过滤调pH胰蛋白酶水解(加酶量2%, pH9.2 ,温度58C, 时间8h ）升温灭酶离心醇沉干燥软骨素粗品 方案七软骨离心处理 碱性复合酶解（1.07%碱液，pH8.5 ,温度为 57C,时间为8h ）离 心上清液1.5%NaCL加热盐析沉淀蛋白质冷冻离 心去蛋白 质上清 液透析乙醇沉淀恒温干燥硫酸软骨素方案八软骨粉碎碱提取（料液

7、比1 :2 , 4%碱液，pH8.5 ,温度为 40C,时间为8h ）过 滤滤液胰蛋白 酶水解灭酶（85C）过滤冷冻离 心10min取上清 液调pH为6.0左右乙醇沉淀（三倍） 丙酮乙醚洗涤沉 淀真空 冷冻干燥成品方案九双酶提取法软骨粉碎恒温干燥至恒重水提（1:1.5 ） 第一类酶酶解（1 % ,50C酶解2h ） 第二次酶解（50C 1h, pH7.5 ）酶解和盐解（2%的NaCI和第2类酶 55C,0.5小时）灭酶（80C, 5 min）过滤调pH 6.595%乙醇沉淀 （12 h）水溶解沉淀（10 倍）脱色（1% H2O2, 0.5 h,75 C, 5min ） 过 滤95%乙醇第二次沉

8、淀乙醇脱水恒温干燥成品步骤：干燥软骨室温（25 C）浸泡24小时,80 C恒温0.5小时后捞出， 清洗,-20 C速冻保存。实验时,取冻软骨粉碎，以100g/份分装于烧杯中，另取一份在 70C80C恒温干燥至恒重，测湿骨粉含水量。按1 : 1.5的料液比加入去离子水，分别加入原料1%的碱性 蛋白酶，调pH值至对应最适作用范围,50 C搅拌酶解2小时,直到 残渣是总量的20%左右时倒去上清液，残渣中再加入0.5%的碱性 蛋白酶,再调pH值至对应最适作用范围,50 C搅拌酶解1小时。滤去残渣，将2次酶解液混合,50 C恒温1小时,调pH值至最新资料推荐7.5,加入2%的NaCI和2%的胰蛋白酶进行酶解和盐。55C恒温0.5 小时后,80 C恒温5分钟灭酶。立即过滤。调pH值6.5,用95%乙醇调至乙醇终浓度至 69%,静置12 小时