实验2 蛋白质的沉淀与透析

1、实验二实验二 蛋白质的沉淀与透析蛋白质的沉淀与透析l生物化学实验之生物化学实验之山东师范大学生命科学学院山东师范大学生命科学学院【实验目的】【实验目的】 1. 学习蛋白质沉淀和透析的基本原理学习蛋白质沉淀和透析的基本原理 2. 掌握蛋白质可逆沉淀、透析的基本操作方法掌握蛋白质可逆沉淀、透析的基本操作方法 【实验原理】【实验原理】 某些试剂（如硫酸铵、氯化钠）与蛋白质作某些试剂（如硫酸铵、氯化钠）与蛋白质作用，可使蛋白质沉淀；但当除去使蛋白质沉淀的用，可使蛋白质沉淀；但当除去使蛋白质沉淀的因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中，这因素后，蛋白质又可再次溶于原来的溶剂中，这种沉淀作用称为可逆的沉淀

2、作用。种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。 一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等）或一些物理因素（如剧烈震荡、搅拌等）或化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破化学因素（如重金属离子、有机酸等），会破坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。即坏蛋白质的稳定的构象，引起蛋白质变性。即使除去了使蛋白质沉淀的因素，蛋白质也不能使除去了使蛋白质沉淀的因素，蛋白质也不能再溶于原来的溶剂中再溶于原来的溶剂中, 即为不可逆沉淀作用。即为不可逆沉淀作用。 在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利在实验室分离纯化蛋白质的过程中，常利用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质（无机盐、单糖等

3、）。利用透析膜的半透膜作（无机盐、单糖等）。利用透析膜的半透膜作用，小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶用，小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶液进行物质交换，大分子物质（蛋白质）保留液进行物质交换，大分子物质（蛋白质）保留在透析袋中而彼此分离。在透析袋中而彼此分离。【实验步骤】【实验步骤】 1. 蛋白质的检查蛋白质的检查 取卵清蛋白取卵清蛋白/NaCl/NaCl溶液溶液2ml2ml和和10%NaOH10%NaOH溶溶液液1ml1ml，摇匀，加，摇匀，加1%CuSO1%CuSO4 4溶液溶液1 12 2滴，滴，边加边摇。边加边摇。 2. 蛋白质的可逆沉淀作用蛋白质的可逆沉淀作用 1） 球蛋白沉

4、淀球蛋白沉淀 取卵清蛋白取卵清蛋白/NaCl溶液溶液2ml，倾斜试管，沿管壁，倾斜试管，沿管壁慢慢加入饱和硫酸铵溶液慢慢加入饱和硫酸铵溶液2ml，轻轻混匀，静置，轻轻混匀，静置5min。 2）清蛋白沉淀）清蛋白沉淀 过滤，除去盐过滤，除去盐析出的蛋白质。析出的蛋白质。 向滤液中加入向滤液中加入硫酸铵粉末至饱和。硫酸铵粉末至饱和。 3. 蛋白质的透析蛋白质的透析（1）装样：取一段透析袋，将一端夹住，由）装样：取一段透析袋，将一端夹住，由开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（不可开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀（不可装太满，并适当排出空气），夹住袋口。装太满，并适当排出空气），夹住袋口。（2）透析：取）透析：取10倍以上蛋白质体积的去离子倍以上蛋白质体积的去离子水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。水，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。在烧杯底部放一个磁子，缓慢搅拌以促进溶在烧杯底部放一个磁子，缓慢搅拌以促进溶液交换。更换洗脱溶液数次（约液交换。更换洗脱溶液数次（约30min一次），一次），至达到透析平衡为止。至达到透析平衡为止。4. 蛋白质透析效果检查蛋白质透析效果检查 1）Cl-的检查：的检查： 取洗出液约取洗出液约2ml，加加10%HNO3溶液溶液12滴滴至酸性，加至酸性，加1%AgNO3 23滴，观察有无白色滴，观察有无白色沉淀。沉淀。