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文档简介

1、第1章 绪论植物组培的定义:在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体,培养在人工培养基上和人工控制的环境中,使其生长、分化、增殖,甚至长出新的植株的过程和技术。组织培养的基本特点:无菌条件、离体的植物材料(外植体)、和人工培养基与培养环境。植物组织培养的特点:培养条件可以认为控制生长周期短,繁殖率高管理方便,利于工厂生产和自动化控制。外植体:无菌条件下,离体培养于人工培养基上的、用于达到某种培养目的的原始植物材料。培养基:根据植物营养原理和植物组织离体培养的要求而人工配置的营养基质,通常含有大量无机元素、微量无机元素、维生素、氨基酸、糖类、植物生长调节物质,以及其他如固化物、活性

2、炭、天然提取的营养物等;水也是其重要和主要组成成分。植物细胞的全能性:是指植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息,在适合的条件下,具有形成完整植株的能力。全能性的3个含义:植物细胞轮是体细胞还是生殖细胞均具有该物种的全套遗传信息只有在适宜的条件下,植物细胞才能具有发育成完整植株的能力事物每个细胞均具有发育成完整植株的能力。细胞分化:由于细胞的分工而异导致细胞结构和功能的改变,或发育方式改变的过程。即细胞功能特化的过程。植物组织活细胞离体培养中的形态发生有:器官发生或体细胞胚胎发生着两种途径形成再生植株。脱分化:是指一个成熟的细胞回复到分化状态或胚性细胞状态的现象。即失去已分化细胞的典型特征

3、。再分化:是脱分化的分生细胞重新恢复细胞分化能力,沿着正常的发育途径,形成具有特定结构和功能的细胞。再分化有2个途径实现:胚胎发生、直接分化器官,再形成植株。探索阶段:20世纪初到30年代中1838年,德国植物学家Schleiden发表植物发生论39年德国动物学家Schwann关于动植物的结构和生长一致的研究,两位科学家创立了细胞学说奠定了组织培养理论的基础1898年德国植物学家Haberlandt开始设计用实验方法检验细胞学说,1902年提出,植物细胞全能性理论(针对高等植物的组织)1904年Hanning通过实验证实全能性1943年美国的White出版了植物组织培养手册,他是奠基人。第2章

4、 组培的设备和培养条件实验室基本组成:无菌操作室化学实验室培养室细胞学观察室暗室驯化移栽室实验室的设计:选址 地点应选在安静、清洁,远离繁忙市区,且交通方便的城市近郊分区布局 按照工艺流程顺序排列,即以组培苗生产环节循环为主线合理布局。设计中每个组成部分最好能按工作的自然程序连续排列分区大小、比例及其产量预测 不计温度是面积,培养室与其余几个部分比例大致为3:2.培养架所占的面积按2/3计算培养室的光照与温度控制 组培所需的基本仪器和设备:1.玻璃器皿培养起码(试管、三角瓶、培养皿、果酱瓶或罐头瓶、太空玻璃杯)承装容器(分注器、离心管、磨口瓶、滴瓶、锅具)计量容器(容量瓶、移液管和移液枪、量筒

5、)其他玻璃器皿(称量瓶、酒精灯、玻璃棒)2.器械用具镊子剪刀解剖刀接种工具(接种针、接种钩、接种铲)钻孔器细菌过滤器其他(酒精灯、pH计、电热灭菌器、磁力搅拌器、微波炉试管架、托盘等)3.仪器与设备恒温箱、生化培养箱、光照培养箱、人工气候箱和植物生长箱烘箱(洗80100,灭菌150,干重分析80)空调、加热器灭菌设备(2个大气压约120保持1020mins)冰箱和冰柜振荡和旋转培养器(低60120/mins高120250/mins,组培用100次/mins左右)天平酸度计显微镜 水浴锅 蒸馏水制造装置 超净工作台温度条件:大多数植物在2332一般25±2低于15或高于35对植物的生长

6、不利。湿度条件:培养室的湿度一般在70%80%;培养容器中的湿度为100%光照条件:组培的光照强度一般在10005000lx,光诱导器官形成时,只需5001000lx,这是为了提高今后出瓶种植到土壤或其他介质中的成活率,光质对愈伤组织的诱导、培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。气体条件:培养基的渗透压:糖对培养基的渗透压起决定性作用,因此调节渗透压常常从糖着手。糖不仅是渗透调节物质,还是培养基的碳源和能源,用糖多的原因。多属植物的适宜浓度为2%6%。根分化所用糖浓度较低,一般为2%3%。体细胞胚胎发生所用糖浓度较高,最高为15%。培养基pH值:5.65.8基本能适应大多数植物培养的需求

7、。常用灭菌方法:物理方法是利用高温、射线等杀菌或滤膜过滤除菌等物理措施而实现无菌的目的,包括干热、湿热、射线处理、超声波、微波处理、流体过滤除菌、离心沉淀、大量无菌水反复冲洗等技术措施:化学方法是利用各种化学药剂对杂菌进行杀灭而实现无菌的目的,常使用升汞、福尔马林、双氧水、来苏水、高锰酸钾、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精等。第3章 培养基及其制备培养基:是植物组织培养的物质基础,也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一培养基营养成分:碳源(糖类物质、醇类物质、有机酸)维生素类肌醇氨基酸天然复合物培养基其他成分及作用:支持物(琼脂)活性炭(为了吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物,浓度0.5%3

8、%)抗生素(为了防止外植体内生菌造成的污染)抗氧化物硝酸银。植物生长调节物质:调节植物生长发育的物质,包括植物激素和植物生长调节剂,掐着是植物体内天然产生的,后者是人工合成的。极微小的量影响植物细胞的分裂、分化、发育,影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等。生长素:促进植物细胞伸长和分裂,生长素还有促进扦插生根、抑制器官脱落、性别控制、延长休眠、顶端优势、单性结实等。在组培中,生长素要被用于诱导愈伤组织的形成、根的分化以及细胞的分裂和伸长。生长素与一定量的细胞分裂素配合用于不定芽的诱导。(2.4-D>NAA>IBA>IAA)细胞分裂素:影响细胞分裂,

9、顶端优势的变化和茎芽的分化。促进细胞分裂和分化,诱导胚状体和不定芽的形成,延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。(TDZ>2-ip>ZT>6-BA>KT)植物生长调节物质在组培中的调节方式:不同生长调节物质间浓度和比例的影响不同生长调节物质间的拮抗作用外源生长调节物质对内源激素的影响斯不同生长调节物质间的连锁性作用基本培养基的类型:MS培养基、B5培养基、White培养基、N6、KM-8P、NT、DKW、WPM、BL、ER、H、SH、WS、HE、LS培养基中分裂素和生长素浓度偏高有利于芽发生,低有利于根,合适有利于愈伤组织的发生。大量元素母液:N、P、K、Ca、Mg、S微量

10、元素母液:B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl铁盐母液:配成100倍或200倍,定容倒入棕色贮液瓶贮存有机母液:维生素和氨基酸等物质,100或200倍植物生长调节物质母液:生长素类、细胞分裂素类、赤霉素、脱落酸、多胺培养基的配置准备工作:实验用具的准备试剂、药品的准备根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配置的培养基体积计算所需各种母液及其附属物的量。(具体操作去规定数量的糖源加以处理根据所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊附加物,搅拌均匀加水定容至规定体积,搅拌均匀调整培养基的pH值5.65.8分类封口灭菌:高压蒸汽灭菌、过滤灭菌保存:避光、防尘第4章 植物材

11、料外植体:植物组织培养是在无菌的条件下培养植物离体材料,这些用于无菌培养的离体植物材料称为外植体。特点:植物在其生长发育过程中都要经历幼年期和成年期。幼年期是植物早期生长阶段,除了少数植物外,大多属植物都要经过幼年期的营养生长才可以是植物过渡到成年期,木本植物基部通常是幼年期,顶部是成年期,中部则是中间类型。复壮或复幼:就是用来描述树木组织或细胞形态发生的幼态特性的恢复过程。完全复壮:有成熟组织或细胞经胚胎发育形成正常的幼态植株,有性生殖产生的合子是自然的完全复壮。复壮措施:栽培技术措施 将成熟枝条的接穗嫁接到幼嫩砧木上,可使接穗获得一定程度的复壮物理化学措施 一些物理化学措施可以减少细胞器数

12、量,并简化其结构,或使其DNA表达不准确,使细胞得到复壮目的组织培养措施 外植体的成熟程度直接影响离体组织的培养,取自植物幼年部位的外植体要比哦成年部位的外植体容易组织培养成功外植体的类型:带芽外植体 包括茎尖的顶芽、腋芽、根芽连接处的萌蘖等胚 自然状态和试管中精卵融合受精后形成的各个时期的胚分化的器官组织 嫩茎、嫩芽、形成层、根、花瓣、花萼以及珠心等二倍体组织花粉及雌配子体中的单位体细胞外植体选择:植物的种质选择外植体的增殖能力外植体的大小(0.51cm)外植体的年龄和着生部位取外植体的季节和时间木本材料的特殊性外植体体表灭菌的常用化学药品:乙醇、升汞、次氯酸钠、漂白粉、过氧化钠,等(溴水)

13、外植体的灭菌步骤:刷洗、植物材料的表面灭菌不同材料的灭菌方法:茎尖、茎段以及叶片等材料的灭菌 多需要在流水中冲洗较长的时间,有的还要使用洗涤剂、吐温等进行洗涤。在超净工作台上体表灭菌时,要用70%乙醇浸泡数秒钟,再用无菌水冲洗2到3次,去掉残留在体表的乙醇。然后依材料的幼嫩程度,选择适当的灭菌药品进一步进行体表灭菌果实和种子的灭菌 用自来水冲洗10到20分钟。再用70%的乙醇体表灭菌10到30分钟。用无菌水洗涤2到3次后,就可以取出果实内的种子或组织进行培养花药灭菌 将整个花蕾或幼穗进行体表灭菌,一般用70%的乙醇浸泡数秒,无菌水洗涤2到3次,然后在漂白粉溶液中浸泡10分钟,无菌水洗涤2到3次

14、,即可达到体表灭菌的目的根和地下器官的灭菌 用流水洗净,用软毛笔洗刷,切去损伤及污染严重的地方,吸水纸吸干后,再用乙醇漂洗再用升汞(0.1%0.2%)浸泡5-10mins,再用无菌水冲净残留的升汞。第5章 植物离体快速繁殖快繁:是利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖方法;是常规营养繁殖方法的一种扩展和延伸。(在无菌条件下,把离体的植物器官、组织,放在人工控制的环境中,使其分化、繁殖,在短期时间内产生大量遗传一致的完整新植株的技术)优点:繁殖系数高,繁殖周期短,繁殖速度快应用广泛,是推广良种的重要手段繁殖材料用量少,不受季节限制,可实现工厂化生产能获得无毒苗木无性系木本植物应用潜力作用(意义)

15、:是改良品种,培育新品种的一种手段,又是快速繁殖良种,获得大量优质苗木的一种有效方法。快繁基本程序:稳定的无菌培养体系的建立时期稳定培养系的增殖、生长和增壮时期诱导茎芽生根形成小苗时期生根小苗移栽和驯化时期(商品苗培育时期)稳定无菌培养体系的建立时期:指从外植体选择、采取、清洗、灭菌、接种和茎芽发生,一直到获取茎芽稳定生长和增殖,茎芽扩繁数量可以随意控制的整个时期。试管外生根:将嫩枝先用50200mg/kgIBA溶液快速浸蘸,或在含生长素的琼脂培养基或液体培养基上处理微枝510天后,或不经任何处理,直接扦插到生根基质上诱导生根。生根小苗移栽和驯化时期:这个阶段是将已生根的完整植株从培养室移植到

16、室外土壤中,是小苗继续长大。形成发达的根系及健壮的苗干。包括两个过程,异养阶段过渡到自养阶段;人工环境过渡到室外自然环境。该阶段遇到的问题:小苗移植后,环境条件突然骤变以致死亡;移栽后失水变干;常发生由真菌引起的病害;移植时正值小苗进入休眠,不易成活。采取措施:将小苗分级进行炼苗选好定植场所严格掌握移栽技术重视移栽后的管理快繁的影响因素:内因 外植体、继代培养次数、愈伤组织的遗传特性及其生理状态、芽的增殖途径外因 培养基、培养条件常见问题:污染外植体褐变试管苗的玻璃化四试管苗的移栽成活遗传稳定性污染来源:材料表面杀菌不彻底无菌操作过程中有外界环境进入培养容器造成污染的种类:细胞性污染真菌性污染

17、污染的防止:选择植物材料严格消毒灭菌合理安排繁殖程序规范操作,控制环境条件。影响褐变因素:基因型外植体的生理状态培养基温度和光照外植体的大小外植体组织的受伤程度材料转移时间用于外植体体表灭菌的化学药品克服褐变的措施:选择适宜的外植体和培养条件连续转移加入抗氧化剂试管苗玻璃化:即所谓玻璃苗,就是试管苗的茎、叶变成透明水浸状、生长畸形,增殖系数明显下降,难易诱导生根,即使诱导生根,其根系质量极差,移栽成活率极低。控制和克服玻璃化的措施:使用透气性好的封口材料,尽可能降低培养容器中的空气湿度,改善氧气的供应情况选择合适的激素种类和浓度,注意生长素和分裂素的配合,尽量兼顾繁殖系数采用固定培养基,适当增

18、加琼脂量,降低培养基汇总的水势高温季节培养室要有降温措施,避免培养温度的突然升高改变供氮形态在培养基中适当添加间苯三酚或根皮苷、青霉素G钾、活性炭、聚乙烯醇(PVA)均可以有效地控制玻璃苗的产生可适当地延长光照培养的时间或增加自然光照,提高光照的强度适当提高培养基中无机盐的含量。提高试管苗的一猜成活率的措施:提高试管苗生根质量加强移栽前炼苗保证组培苗移栽基质质量做好移栽前根系处理移苗后的湿度控制移苗后的温度控制移苗后的光照控制。影响遗传稳定性的因素:基因型继代次数发生方式激素浓度提高稳定性的措施:尽量不采用易发生体细胞变异的增殖途径取幼龄的外植体材料采用适当的生长调节物质种类和较低的浓度:减少

19、或不使用培养基中容易引起诱变的化学物质定期检测第6章 愈伤组织培养愈伤组织:原指植物在受伤之后于伤口表面形成一团薄壁细胞,在组培中,则指在人工培养基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。优良的愈伤组织特征:高度的胚性或再分化能力,以便从这些愈伤组织得到再生植株容易散碎,以便用这些愈伤组织建立优良的悬浮系,并且在需要的时能从中分离出全能性原生质体旺盛的自我增值能力,以便用这些愈伤组织建立大规模的愈伤组织无性系经过长期继代保存而不丧失胚性,以便有可能对它们进行各种遗传操作。愈伤组织形成过程:诱导期 细胞的大小变化不大分裂期 细胞分裂快,结构疏松,缺少有组织的结构,颜色浅而透

20、明形成期 细胞经过诱导、分裂形成了无序结构的愈伤组织时期,特点大而不规则、高度液泡化,表面以下约510个细胞是细胞生长的中心分化期 停止分裂的细胞发生生理代谢变化,导致形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。特征,细胞分裂部位和方向发生变化;分化组织瘤状结构和维管组织的形成;出现各种类型的细胞生长旺盛的愈伤组织一般显乳黄色或白色,有光泽,也有浅绿色或绿色的,而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。植物愈伤组织培养条件:外植体材料的基因型对愈伤组织的器官分化有决定性的影响通常同一种植物的不同器官或组织所形成的愈伤组织,无论在生理上或形态上,其差别均不大年龄较幼的外植体,不仅易于诱导形成愈伤组织,

21、而且也容易诱导分化成植株。 培养基生长调节剂 细胞分裂素和生长素的比例是控制芽和根形成的重要条件之一无机营养素有机成分物理性质。 培养环境条件光照 光照对器官的作用是一种诱导反应,一定的光照对小苗的形成、根的发生、枝的分化和胚状体的形成有促进作用温度 一般采用2225。不同用途愈伤组织的定向诱导:愈伤组织之间的质地有显著不同,有的很松脆,有的很坚实,且着两类愈伤组织可以互相转变。其方法是:加入高浓度的生长物质,可使坚实的愈伤组织变为松脆的愈伤组织。反之,减低或去掉生长物质,则松脆愈伤组织可以转变为坚实愈伤组织。愈伤组织的形态发生方式:脱分化后的细胞进行再分化的过程有两种不同的方式器官发生方式,

22、指细胞或愈伤组织培养物,通过形成不定芽再生成植株,这是细胞和组织培养中常见的器官发生方式胚胎发生方式,细胞经脱分化后,发生持续细胞分裂增殖,并依次经过原胚期、球形胚期、心形胚期、鱼雷形胚期和子叶期,进而形成成熟的有机体。胚状体:由愈伤组织的类似薄壁组织细胞不经过有性过程而直接产生类似胚的这一结构。胚状体是双极性的。一般愈伤组织的培养:外植体的获取外植体材料的消毒和接种培养胚性愈伤组织:能形成体细胞胚的愈伤组织。选材:未成熟的胚、幼穗、幼叶、幼根等。培养过程(胚性愈伤组织):外植体的获取培养胚性愈伤组织的诱导胚性愈伤组织的保持和培养。第7章 体细胞胚发生体细胞胚胎发生的概念:经体细胞胚发生形成类

23、似合子胚的结构称为胚状体或体细胞胚。三层含义,体细胞胚是组织培养的产物体细胞胚起源于非合子细胞体细胞胚的形成经历胚胎发育过程。体细胞胚胎发生的特点:体细胞具有两极性存在生理隔离遗传性相对稳定重演受精卵形态发生的特征体细胞胚胎发生具有普遍性与两极性等特点。意义:为植物细胞分化、全能性表达过程和机理等重大理论问题的研究提供了理想的试验体系人工种子作为建立在体细胞胚发生应用基础研究智商的高新科技,是促进离体快速繁殖、实现田间和温室栽培的重要途径。体细胞胚胎发生的主要阶段:胚性愈伤组织的诱导,体细胞胚的诱导,体细胞胚早期的分化发育,体细胞胚成熟以及体细胞胚萌发和成苗。根据诱导时对生长调节剂要求的不同,

24、体细胞胚诱导可分为4种情况:不需加任何激素加入2,4-D,这对禾本科植物的体细胞胚有到特别重要只需要加入体细胞分裂素就足以诱导体细胞胚发生要求细胞分裂素和生长素相互配合,大多数植物体细胞胚发生的诱导都属于这种情况。影响体细胞胚胎发生的因子:外植体(产生部位、生理状态、基因型)培养基(氮源、其他重要离子、碳水化合物、活性炭)植物生长调节物质(生长素、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸乙烯和多胺)环境因子(光照、温度)培养容器和培养基状态人工种子:1978年由Murashige提出概念概念:狭义 将植物离体培养中产生的胚状体,主要是指体细胞胚,或者能发育成完整植株的分生组织,包裹在有养分和具有保护功能的物

25、质中形成的类似于天然植物种子的结构。广义 经过干燥或不经干燥,不经包埋成球,直接播种发芽的体细胞胚。人工种子的构造:最外面一层是人工种皮中间的是人工胚乳最内面则是被包埋的胚状体或类似物。优点:不受外界自然条件影响和土地的约束快捷高效的繁殖方式,缩短育种时间可以认为赋予种子多种优良品质固定杂种优势对于一些自然繁殖困难的名优珍贵品种,可采取人工种子技术进行大量快速繁殖不易霉变,便于保存和运输。制作:人工胚的获取人工种子的包埋(海藻酸钠)人工种子的贮藏和防腐。第8章 植物细胞培养植物细胞培养概述:以单细胞或细胞团为单位进行的植物组织培养方式。植物细胞培养方法:植物细胞悬浮培养是从愈伤组织的液体培养的

26、基础上发展起来的一种培养技术,即用类似于微生物培养所用发酵罐的生物反应器,提供满足细胞正常生长和生物物质合成的可控环境,进行细胞大量培养的方法植物细胞固相化培养植物单细胞培养是指纯粹单离的细胞成群培养方式。植物细胞培养的影响因素:遗传特性、环境条件。液体培养3个有点:增加培养细胞与培养液的接触面,改善营养的供应可带走培养物产生的有害代谢产物,避免有害代谢产物局部浓度过高保证氧的充分供给。悬浮培养细胞的生长测定:细胞计数细胞体积细胞的鲜重和干重有丝分裂指数。悬浮培养的同步方法:物理方法(体积选择法、冷处理方法)化学方法(饥饿法、抑制和解除、有丝分裂阻抑)。单细胞分离的方法:从植物器官分离单细胞(

27、机械法、酶解法-果胶酶、化学方法-秋水仙素)由培养组织中分离单细胞。平板培养:将含有0,6%琼脂的培养基冷却到35时,将悬浮液接种进去,充分混合,倒入9cm的培养皿中,约铺成1mm厚薄层,培养皿用塑料膜封口。条件培养:在选用的培养基中,加入一定量已生长过组织或细胞的培养液。看护培养:将亲本愈伤组织或高密度的悬浮细胞同低密度细胞一起培养,以促进低密度细胞生长、分裂的培养方法。液体培养:微室培养法、微滴培养法、液体浅层培养。第9章 组培脱毒无毒苗的意义(目的):为了生产提供无毒良种种苗。无病毒良种种苗的优点:产量提高品质提高抗病性增强无病毒概念理解:无病毒苗是一个相对概念,并不是绝对不带有任何病毒

28、,只是不带有对当地生产危害最大的集中病毒而异。热处理脱毒原理:病毒DNA分子进入细胞后随细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒,只能钝化病毒的活性,使病毒在植物体内增殖减缓停止,而失去传染能力。热处理是一种物理效应,与冷处理异养可以加速植物细胞的分裂,使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜处于优势地位。热处理的方法:愈伤组织热处理 离体培养愈伤组织热处理继代分化培养热空气处理脱毒法 将试管母株放在高温生长室中生长一阶段,使其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速,然后切去其茎尖分生组织进行离体培养。热处理的缺点:并非所有的病毒都对热处理敏感延长热处理时间,病毒钝化效果好,同事也可能会钝化植物组织中

29、的抗性因子而降低处理效果热处理后只有一小部分植株能够存活。微茎尖培养脱毒:原理及依据病毒在植物体内分布不均匀吗,越接近顶端分生组织,病毒浓度越稀,因此可采用小茎尖的离体培养脱除植物病毒病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争,在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势技术关键同一种病毒在植物体内分布位置不同不同种类病毒在同一种植物中的分布位置不同茎尖越小,对培养基要求越高,成功率越低。0.2,mm0.5mm操作程序 外植体经表面灭菌后,在解剖镜下,经无菌操作切取小茎尖,接种到备用培养基上,放入培养室内进行培养。愈伤组织培养脱毒法:原理及依据病毒在植物体内不同器官或组织分布不均匀病毒复制的能力衰

30、退或丢失继代培养的愈伤组织产生抗性变异。微体嫁接离体培养脱毒法:把极小(小于0.2mm)的茎尖作为接穗嫁接到实生砧木上,然后将嫁接后的砧木接种到新的培养基上培养。脱毒苗脱毒效果的检测:视觉观察法生物鉴定法(敏感植物的概念 有些植物对病毒极为敏感,一旦感染病毒就会在其叶片乃至全株上表现特殊的病斑;鉴定方法 摩擦接种鉴定法、嫁接鉴定法、电子显微镜鉴定法)抗血清鉴定法分光光度法五毒原种的保存:隔离种植保存离体保存第10章 植物胚胎培养植物胚胎培养概念:对植物的胚、及胚器官进行人工离体无菌培养,使其发育成幼苗的技术。意义:克服杂种胚的败育;获得稀有杂种获得单倍体和多倍体植株打破种子休眠,促进胚萌发快速

31、繁殖良种,缩短育种周期克服种子生活力低下和自然不育性,提高种子发芽率提高后代抗性,改良品质种子活力的快速测定品质资源的搜索和保存研究胚胎发育的过程和控制机制。胚胎培养的内容:胚培养(成熟胚培养成功率高,因为含有相应生长发育物质较多)胚珠培养子房培养胚乳培养植物离体受精。胚乳看护培养:在进行未成熟胚的培养时,若在其周围培养基上存在来自同一种物质的另一种子的胚乳,对胚的生长有明显的促进作用。渗透压的调节主要依赖于糖。糖在胚培养中的3个作用:调节渗透压、作为碳源和能源、防止幼胚的早熟萌发。植物离体受精:在离体条件下通过在裸露的胚珠上授粉而结实的方法。植物离体受精的方法:将未受粉的子房,经表面灭菌后,

32、在无菌条件下,切开取出胚珠,接种到培养基上。然后,把经过灭菌消毒的花粉授在胚珠或胚座上,或是撒在培养基上,花粉发芽后,花粉管长入胚珠内受精。第11章 植物花药和花粉培养花粉和花药培养的优点:染色体加倍产生的纯合二倍体,在遗传上非常稳定,不会发生性状分离在同一选择周期中,单倍体选择的效率要比二倍体高得多花药培养和花粉培养加倍后的纯合二倍体植株,可排除杂合子中显性因子掩盖隐性因子造成的干扰,提高选择的准确性和可靠性花粉花药培养既可充分利用植物的种质资源,又可获得性状的多样性。花粉培养和花药培养:将花粉培育成单倍植株,再经染色体自然或人工加倍得到纯合二倍体。花药培养时花粉发育的途径:营养细胞发育途径,即花粉经第一次有丝分裂形成不均等的营养核和生殖核生殖细胞发生途径,营养核分裂12次即退化了,而生殖核经多次分裂发育成多细胞团营养细胞和生殖细胞并进发育途径花粉均等分裂途径。染

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