微生物知识总结

1、推荐精选微生物学实验复习微生物学实验复习1、培养基的种类及用途：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离、鉴定、计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产、连续培养化学合成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产半合成培养基部分天然物质和部分化学试剂配制而成兼有天然培养基和合成培养基的优点目的用途加富培养基营养物质仅适合一种或一类微生物能使某种微生物的生长、繁殖比其他微生物更加迅速、逐渐淘汰其他微生物鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加(或缺少)某种化学成

2、分菌种的分离2、培养基中的营养物质：营养要素 含义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物， 有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、 核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂， 而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮元素以外的 各 种 重 要 元素，包括某些

3、大量元素细胞内的组成成分， 生理调节物质， 某些化能自养菌的能源，酶的激活剂3、培养基的配置原则：(1)(1)目的要明确目的要明确( (根据微生物的种类根据微生物的种类、培养目的等培养目的等) )，如培养基可由简单的无机物组成如培养基可由简单的无机物组成，生产用培养基生产用培养基内可加入化学成内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。分不明确的天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。(2)(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。推荐精选(3)pH(3)pH 要适宜：各种微生物适宜生长

4、的要适宜：各种微生物适宜生长的 pHpH 范围不同，如细菌、放线菌和真菌的最适范围不同，如细菌、放线菌和真菌的最适 pHpH 分别分别为：为：6.56.57.57.5、7.57.58.58.5 和和 5.05.06.06.0。4、灭菌与消毒：项目项目概念概念常用方法常用方法应用的范围应用的范围消毒消毒使用较为使用较为温 和 的 物温 和 的 物理理或 化 学 方或 化 学 方法法仅 杀 死 物仅 杀 死 物体体上 绝 大 多上 绝 大 多数数微生物微生物( (包包括 病 原 微括 病 原 微生 物 和 有生 物 和 有害 微 生 物害 微 生 物的 营 养 细的 营 养 细胞胞) )煮沸消毒法

5、：在煮沸消毒法：在 100100 煮沸煮沸 5 56 6 minmin一般物品一般物品巴氏消毒法：巴氏消毒法：70707575 煮煮 3030 minmin 或在或在 8080 煮煮1515 minmin一些不耐高温的液体，如牛奶一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手如用酒精擦拭双手、 用氯气消毒水源用氯气消毒水源等等紫外线消毒法：紫外线消毒法：3030 W W 紫外灯照射紫外灯照射 3030 minmin接种室接种室5、细菌培养基的配制过程？答：配制培养液调节 PH分装包扎灭菌搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的 1/2）【问题与探究】【问题与探究】（1

6、1）培养基灭菌后，为什么需要冷却到）培养基灭菌后，为什么需要冷却到 5050左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？你用什么办法来左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？你用什么办法来估计培养基的温度？估计培养基的温度？【提示【提示】琼脂的凝固点为琼脂的凝固点为 4040，温度太高易使培养皿破裂温度太高易使培养皿破裂，低于低于 4040，培养基已凝固培养基已凝固，倒不倒不出出， 所以培养基灭菌后所以培养基灭菌后， 需冷却到需冷却到 5050左右时才能用来倒平板左右时才能用来倒平板， 可以用手触摸盛有培养基的试管可以用手触摸盛有培养基的试管，感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。感觉试管的温度

7、下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。（2 2）为什么需要使试管口通过火焰？）为什么需要使试管口通过火焰？【提示】【提示】通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基。项目项目概念概念常用方法常用方法应用的范围应用的范围灭菌灭菌使用强烈使用强烈的物理或的物理或化学方法化学方法使物体内使物体内外所有的外所有的微生物永微生物永远丧失其远丧失其生长繁殖生长繁殖能力能力灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌接种工具的灭菌干热灭菌：干热灭菌：160160170170 下灭菌下灭菌 1 12 2 h h玻璃器皿、金属工具的灭菌玻璃器皿、金属工具的灭

8、菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌：121121 条件下条件下，灭菌灭菌 15153030 minmin培养基及容器灭菌培养基及容器灭菌推荐精选（3 3）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？【提示】【提示】使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力意高压蒸汽灭菌锅的压力(100(100 kPa)kPa)、温度、温度(121(121) )和灭菌时间和灭菌时间(20(20min)min)。6 6、无菌操作和接种技术无菌操作

9、和接种技术(1)(1)接种接种概念：在概念：在_ _无无 菌菌条件下将微生物接入条件下将微生物接入培养基培养基_的操作过程的操作过程。工具：工具：玻璃刮铲玻璃刮铲、接种针和接种环接种针和接种环。方法：方法：穿刺穿刺接种接种、斜面划线接种和斜面划线接种和平板划线平板划线接种接种、涂抹平板等涂抹平板等。（2 2）无菌操作）无菌操作微生物接种技术的关键微生物接种技术的关键培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要灭菌灭菌_ _。通常接种操作要在通常接种操作要在_酒精灯火焰酒精灯火焰_的附近进行。的附近进行。【想一想】【想一

10、想】 在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。7 7、微生物的分离、微生物的分离（1 1）原理原理：根据微生物对根据微生物对_ _营养成分营养成分、氧气氧气、pHpH 等要求的不同等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的通过只提供目的微生物生长的必需必需条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到选择分离选择分离微生物的目的。微生物的目的。( (2 2) )方法方法据菌落形态特征初步分离据菌落

11、形态特征初步分离常用方法常用方法平板分离法平板分离法分类分类_混合平板法混合平板法_：是常用的平板分离法：是常用的平板分离法，有扇形划线有扇形划线、连续划线连续划线、交叉交叉划线和方格划线等划线和方格划线等目的：在培养基上得到目的微生物的目的：在培养基上得到目的微生物的单个单个菌落菌落【归纳】无菌技术的具体内容【归纳】无菌技术的具体内容(1)(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)(3)实验操作应在酒精灯火焰

12、附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。(4)(4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。（5 5）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。8 8、平板分离法、平板分离法原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培

13、养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成便于移植的菌落。便于移植的菌落。常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。. .方法方法：(1)(1)涂抹平板法涂抹平板法：分离材料进行分离材料进行 1010 倍系列稀释倍系列稀释，取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅在平板表面生长。平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅

14、在平板表面生长。(2)(2)混合平板法：分离材料进行混合平板法：分离材料进行 1010 倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。(3)(3)平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。涂抹平板法涂抹平板法平板划线法平板划线法推荐精选4.4.目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。(1)(

15、1)灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。(2)(2)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。(3)(3)划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。9、菌落数目的统计方法菌落数目的统计方法(1)(1)显微镜直接计数法显微镜直接计数法原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。量。方法：用计数板计数。

16、计数板是特制的载玻方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为片，其上有特定的面积为 1 1 mm2mm2，高为，高为 0.10.1 mmmm 的计数室，一个计数室又被分成的计数室，一个计数室又被分成 2525 个个( (或或 1616 个个) )中中格，每个中格再被划分成格，每个中格再被划分成 1616 个个( (或或 2525 个个) )小格，每个计数室都由小格，每个计数室都由 400400 个小格组成。个小格组成。操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数 4 45 5 个中格中的细菌数个中

17、格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。计算公式计算公式每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数每毫升原液所含细菌数每小格平均细菌数4004001000010000稀释倍数。稀释倍数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。（2 2）间接计数法）间接计数法( (活菌计数法活菌计数法) )原理原理：当样品的稀释度足够高时当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌

18、落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作操作设置重复组设置重复组，增强实验的说服力与准确性增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列将待测样品经一系列 1010 倍稀释倍稀释，然后选择三个稀释度然后选择三个稀释度的菌液，分别取的菌液，分别取 0.10.1 mLmL 接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培数。

19、为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。养，计算出菌落平均数。2.2.为了保证结果准确，一般选择菌落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在 3030300300 的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。远，意味着操作有误，需重新实验。( (3 3) )滤膜法滤膜法实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红美蓝培养基上培养，在该培养基上，大肠杆菌美蓝培养基

20、上培养，在该培养基上，大肠杆菌菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。【特别提醒】【特别提醒】统计菌落数目的注意事项：统计菌落数目的注意事项：一般选择菌落数在一般选择菌落数在 3030300300 的平板进行计数。的平板进行计数。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。设置对照，目的是排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。设置对照，

21、目的是排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。推荐精选实验探究：微生物的分离实验探究：微生物的分离【操作与实践】【操作与实践】微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。1.1.稀释稀释用用 1 1mLmL 无菌吸管吸取无菌吸管吸取 1 1mLmL 大肠杆菌培养液，加入到盛有大肠杆菌培养液，加入到盛有 9 9mLmL 无菌水的大试管中，充分混匀，无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取然后用无菌吸管从此试管中吸取 1 1mLmL 加入另一支盛有加入另一支盛有 9 9mLmL 无菌水的试管中，混合均匀

22、，依次类无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成推制成 10101 1、10102 2、10103 3、10104 4、10105 5、10106 6 系列稀释度的大肠杆菌稀释液。系列稀释度的大肠杆菌稀释液。2.2.划线或涂布划线或涂布(1)(1)平板划线分离法平板划线分离法在近火焰处在近火焰处，左手拿皿底左手拿皿底，右手拿接种环右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划挑取大肠杆菌培养液在平板上划线线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种常用的划线方法有平行划线和连续划线两种( (如图如图) )。平行划线时平行划线时，每转一个角度烧一次接种环每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖

23、，做好标记。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。特别提醒特别提醒平板划线法中的注意事项平板划线法中的注意事项1 1取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的次灼烧目的如下表：如下表：取菌种之前取菌种之前每次划线之前每次划线之前划线结束划线结束目的目的杀死接种环上原杀死接种环上原有的微生物有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端线的末端， 使每次划线后菌种数目

24、减少使每次划线后菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种杀死接种环上残存的菌种，避免细菌避免细菌污染环境和感染操作者污染环境和感染操作者从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。推荐精选(2)(2)涂布分离法涂布分离法取取 3 3 个平板，底面分别用记号笔写上个平板，底面分别用记号笔写上 10104 4、10105 5 和和 10106 6 三种稀释度，然后三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各 0.10.1 mLmL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃刮铲在培，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃刮铲在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置 5 51010 minmin，使菌液吸附进培养基，使菌液吸附进培养基( (如图如图) )。特别提醒特别提醒将玻璃刮铲末端浸在盛有体积分数为将玻璃刮铲末端浸在盛有体积分数为 70%70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴的酒精