砂仁复方挥发油提取工艺优选研究

1、砂仁复方挥发油提取工艺优选研究作者：唐灿，吴仕财，李云鹏，张彦燕，赵剑，蒲 清荣，兰才【摘要】目的优选砂仁复方挥发油提取工艺。方法以乙酸龙脑酯 收率为指标，采用气相色谱仪，运用正交设计法优选砂仁复方挥发油 提取工艺条件。结果优选出的砂仁复方挥发油提取工艺为：取砂仁捣 破，其他药材切成饮片，加水浸泡05 h,加水量为药材量的96倍， 采用水蒸气蒸馆法提取4 ho结论 采用该提取工艺提取砂仁复方挥 发油有效成分乙酸龙脑酯收率较高且稳定，说明该工艺合理可行。【关键词】砂仁复方挥发油；乙酸龙脑酯；气相色谱法；提 取工艺abstract: objectiveto optimize the extract

2、ing process of volatile oil from amomum vi 1 losum etc methodsby the orthogonal design and gas chromatography, taking the rate of bornyl acetate as the index, we optimized the extracting process conditions of volatile oil from amomum vi1losum etc.resultsthe optimum extracting process conditions of v

3、olatile oil from amomum vi1losum etc .were that amomum vi1losum was pounded to pieces, water was 96 t imes the weight of herbs, soaking t ime was half an hour and extracting t ime was 4 hours.conclusionexperiment results make it clear that because the rate of bornyl acetate in volatile oil from amom

4、um vi 1 losum etc. by the optimum extracting process is high and stable, the extracting process of volatile oi1 from amomum vi1losum etc is reasonable and feasiblekey words: volatile oi 1 from amomum vi1losum etc；bornyl acetate; gas chromatography; extracting process砂仁为姜科植物阳春砂、绿壳砂、海南砂的干燥成熟果实，具 有化湿行气

5、、温中止呕止泻、安胎之功效，主要用于湿邪困脾、脾胃 气滞、脾胃虚寒吐泻以及气滞妊娠恶阻、胎动不安等症。主含挥发油, 油中主要有效成分之一为乙酸龙脑酯(bornyl acetate )o据文献报 道，目前砂仁药材及其中成药质量是以挥发油收率进行控制的。但挥 发油为混合物，组成和性质均不稳定，作为定量标准还不很完善。而 乙酸龙脑酯结构清楚，含量较高，药理实验证实乙酸龙脑酯为与砂仁 功效主治密切相关的有效成分。乙酸龙脑酯作为砂仁及其中成药的定 量标准较挥发油更完善，能够更好地控制砂仁药材及其中成药的质量 1 o因此采用气相色谱法，以乙酸龙脑酯收率为指标，优选砂仁复 方挥发油提取工艺具有重要的质量控制

6、意义。1仪器及材料gx 300a氮、氢、空三气一体发生器（北京市中兴科技发展 有限公司），gc112a气相色谱仪（上海分析仪器厂）、双圈牌电子分 析天平（上海天平仪器厂），tg 328a分析天平（上海分析仪器厂）, 1 000, 2 000 ml挥发油测定器（轻油）、20 u 1微量移液器，10 ml 容量瓶，1卩1, 10卩1微量注射器;砂仁药材购自泸州宝光医药公 司白招牌大药房，经鉴定为阳春砂。醋酸乙酯（分析纯）、蒸馆水（自 制）、乙酸龙脑酯化学对照品（供含量测定用，759200102, 0.2 ml）（中国药品生物制品检定所）。2方法与结果2. 1 gc分析条件2色谱柱：硅烷化102白色

7、载体（6080 目）、固定液5%se 30 （ 3 mm x 2 m,不锈钢柱）；柱温：程序升温 80 140°c （15°c/min）. 140 200°c （ 40°c/min ）;载气：n2 流速 30 ml/min; h2流速20 ml/min;空气流速200 ml/min,初始时间、升 温时间、终止时间均为5 min,检测器：fid;仪器：gc112a气相色 谱仪、gx 300a氮氢空三气一体机。2.2砂仁挥发油含量与成分分析砂仁等药材均含较多挥发油， 其中阳春砂达到约3.0%以上，油中最主要成分之乙酸龙脑酯的含量占到25%-30%左右，可见乙

8、酸龙脑酯为砂仁的最主要有效成 分之一，其权重系数最大，而且乙酸龙脑酯受热稳定。故采用水蒸气 蒸馆法提取有效成分乙酸龙脑酯的方法具有充分的理论依据3, 4 。2. 3工艺优选砂仁等药材采用水蒸气蒸馆法提取挥发油，以乙 酸龙脑酯收率为指标，考察水蒸气蒸馆法的最佳工艺条件。准确称取 砂仁等药材，按l9 （ 34 ）正交表，共9份实验，见表12。表1考察的因素水平（略）2. 3. 1制取砂仁等药材挥发油溶液按上述正交表安排的水蒸 气蒸馆法提取，收集挥发油，读数（ml）,利用油水分离性质，油在 上，水在下，采用20 ul微量移液器抽取挥发油，用醋酸乙酯溶解 挥发油并定容于10ml容量瓶中，即得砂仁等药材

9、挥发油乙酸龙脑酯 溶液；以醋酸乙酯溶剂作为空白对照，以缺砂仁的其它两药同法制醋 酸乙酯溶液作为阴性对照，贮存备用。2. 3.2乙酸龙脑酯标准曲线的绘制精密称取乙酸龙脑酯化学 对照品0. 192 7 g,用醋酸乙酯溶解并定容于10 ml容量瓶中，配制 成乙酸龙脑酯对照品溶液的浓度为19.27 mg/ml,在2. 1项gc分析 条件下测定，乙酸龙脑酯化学对照品积分面积a与其质量m呈现良好 的线性关系：a=6 070. 157 2+51 976. 565 4 m, r=0. 999 0 (n=6 ), 线性范围：0. 038 54 19.27 p go表2砂仁等药材挥发油提取正交设计实验(略)2.

10、3. 3重复性实验及优选工艺复核实验按照优选出的砂仁等 药材挥发油提取工艺a2b3c1d1投料，提取6次挥发油，分别测定油 中乙酸龙脑酯含量，结果乙酸龙脑酯收率为药材量的(0727 6 ± 0.018 15) %, n=6, rsd=2.49%,说明a2b3c1d1工艺能够很好的重复 并将乙酸龙脑酯含量提取达到最高。2. 3.4精密度实验与稳定性实验以乙酸龙脑酯对照品溶液 19. 27 jag/ m h 进 0. 5 ili 1/次，从 20051223 下午 14： 00晩上21： 40,每隔36 min测定1次，连续测定12次，以积分面积 计算精密度实验和稳定性实验rsd ( %

11、 )。其中稳定性试验rsd=3 31%, 表明乙酸龙脑酯在6 h内测定含量是稳定的；精密度试验rsd=2. 06%, 表明仪器精密度试验良好。2. 3. 5加样回收率实验取已测定乙酸龙脑酯含量的砂仁，加入乙酸 龙脑酯对照品，同法提取，按砂仁挥发油中乙酸龙脑酯含量测定方法 操作。结果见表3。表3砂仁挥发油中乙酸龙脑酯加样回收率实验（略）2. 3.6样品测定取砂仁等药材挥发油乙酸龙脑酯溶液 样品，分别进样1 ml,在2. 1项gc分析条件下测定，采用标准曲 线法计算含量，结果见表2,优选出的最佳工艺为a2b3c1dl经过复 核实验，证明a2b3c1d1最佳。即将砂仁捣破，其他药材切成饮片， 加水量

12、为药材量的96倍，浸泡0.5 h,水蒸气蒸馆提取4 h,砂仁等 药材挥发油中乙酸龙脑酯收率达到（ 0.727 6 ±0.018 2） %, n=6, rsd=2.49%。3讨论在实验中曾比较5%se 30, 2%ov 17两种气相色谱柱填料, 根据砂仁挥发油中乙酸龙脑酯、樟脑的色谱行为综合考虑，以5%se-30 较好。并进行了等温与程序升温试验比较，结果发现程序升温色谱图 较理想。并对程序升温进行一阶与二阶升温试验，发现二阶程序升温 （80140°c, 15°c/min, 一阶;140 200°c，40°c/min,二阶）得 到非常理想的色谱图

13、。见图1。乙酸龙脑酯峰与杂质樟脑峰的分离度、 峰对称性，理论塔板数均达到最佳。醋酸乙酯空白对照无干扰，缺砂 仁的其它两药的醋酸乙酯阴性对照溶液无干扰，结果令人满意。a 化学对照品b 样品c空白对照品图1气相色谱图（略）对砂仁单方提取挥发油以及砂仁等3种中药复方提取挥发油。 含量进行比较结果发现单方提取与复方提取所得挥发油中乙酸龙脑 酯含量相差较大。经测定单方提取挥发油量较少，但是乙酸龙脑酯含 量较多；复方提取挥发油量较多，但是乙酸龙脑酯含量较低。可能系 复方提取时3种挥发油相互乳化，产生干扰，致使乙酸龙脑酯在色谱 柱中分离更困难（经测定复方提取8 h乙酸龙脑酯含量反而比提取4 h 低，可能系复方提取时间越长，挥发油相互乳化越彻底，分离就越困难） 或者3种挥发油在气化室约200°c温度下产生化学变化导致乙酸龙脑 酯含量下降，其机理有待于进