食品中大肠菌群的测定实用教案

1、 一、目的一、目的(md)第1页/共62页第一页，共61页。第2页/共62页第二页，共61页。第3页/共62页第三页，共61页。第4页/共62页第四页，共61页。第5页/共62页第五页，共61页。培养特性：大肠杆菌(d chn n jn)合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37，在42-44 条件下仍能生长，生长温度范围15-46 。第6页/共62页第六页，共61页。第7页/共62页第七页，共61页。第8页/共62页第八页，共61页。 4、 培养基和试剂培养基和试剂(shj)第9页/共62页第九页，共61页。 四、四、 检验检验(jinyn)方法方法第

2、10页/共62页第十页，共61页。第11页/共62页第十一页，共61页。 1、样品的稀释 （1）固体和半固体样品 称取25g样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水(shnglynshu)的无菌均质杯内，8000r/min-10000r/min均质1min-2min，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水(shnglynshu)的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min-2min，制成1:10的样品匀液。第12页/共62页第十二页，共61页。第13页/共62页第十三页，共61页。第14页/共62页第十四页，共61页。第15页/共62页第十五页，共61页。 （5）根据对样品污染状况的估

3、计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕(wnb)，全过程不得超过15min。第16页/共62页第十六页，共61页。 2、 初发酵初发酵(f jio)试验试验第17页/共62页第十七页，共61页。 记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性(ynxng)，产气者则进行复发酵试验。第18页/共62页第十八页，共61页。第19页/共62页第十九页，共61页。 根据大肠菌群阳性管数，检索MPN表（见附录B)，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN值。 注意：当检样的量与表中的量有增加

4、(zngji)或减少时，表内的数也应相应减少或增加(zngji)。第20页/共62页第二十页，共61页。第21页/共62页第二十一页，共61页。大肠杆菌大肠杆菌(d chn n jn)0157显显色培养基上的色培养基上的菌落菌落第22页/共62页第二十二页，共61页。在伊红美兰乳糖在伊红美兰乳糖(r tn)琼琼脂（脂（EMB）上）上 第23页/共62页第二十三页，共61页。大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂(qingzh)上的典型特征上的典型特征 典型菌落为红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀(chndin)环。菌落直径为2-3mm或更大。第24页/共62页第二十四页，共61页。大肠菌

5、群在结晶紫中性大肠菌群在结晶紫中性(zhngxng)红琼脂红琼脂(VRBA)上典型特征上典型特征 典型菌落为紫红色(hngs),菌落周围有红色(hngs)的胆盐沉淀环。菌落直径为0.5mm或更大。第25页/共62页第二十五页，共61页。大肠杆菌在大肠杆菌在MFC琼脂上的典型琼脂上的典型(dinxng)特征特征 第26页/共62页第二十六页，共61页。第27页/共62页第二十七页，共61页。试验试验(shyn)流程流程第28页/共62页第二十八页，共61页。1 1、 样品样品(yngpn)(yngpn)的稀释的稀释 按第一法中的稀释方法(fngf)进行。第29页/共62页第二十九页，共61页。

6、（1） 选取2个3个适宜的连续(linx)稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1mL。同时分别取1mL生理盐水加入两个无菌平皿作空白对照。 （2） 及时将15 mL-20mL冷至46 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板，置于36l 培养18h-24h 。2 2、 平板平板(pngbn)(pngbn)计数计数第30页/共62页第三十页，共61页。第31页/共62页第三十一页，共61页。第32页/共62页第三十二页，共61页。第33页/共62页第三十三页，共61页。例：

7、10-4样品稀释液1mL，在VRBA平板(pngbn)上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：1006/10104/g（mL）=6.0105CFU/g（mL）。第34页/共62页第三十四页，共61页。国标国标4789.3的的08版与版与03版主要版主要(zhyo)不同不同 1、名称更改 以大肠菌群计数代替原来的大肠菌群测定。 2、增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法。 3、大肠菌群的MPN法以乳糖为主改为以月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤为主的要培养基的MPN法。 4、大肠菌群的MPN法中原(zhngyun)“报告每100 m

8、l （或g）大肠菌群的MPN值”改为“报告每1 ml （或1g）大肠菌群的MPN值”。第35页/共62页第三十五页，共61页。 比较区别 GB/T4789.38-2008大肠杆菌(dchnnjn)的计数第36页/共62页第三十六页，共61页。03版流程(lichng)第37页/共62页第三十七页，共61页。第38页/共62页第三十八页，共61页。第39页/共62页第三十九页，共61页。 同一稀释度在做菌落总数测定的同时接种乳糖胆盐发酵管，并且(bngqi)用大肠埃希氏菌、产气肠杆菌混合菌种作对照 。第40页/共62页第四十页，共61页。第41页/共62页第四十一页，共61页。第42页/共62页

9、第四十二页，共61页。第43页/共62页第四十三页，共61页。第44页/共62页第四十四页，共61页。 可疑菌落特点： 具有(jyu)金属光泽的深紫黑色菌落； 不带或略带金属光泽的菌落； 中心色较深的淡紫黑色菌落。第45页/共62页第四十五页，共61页。第46页/共62页第四十六页，共61页。第47页/共62页第四十七页，共61页。第48页/共62页第四十八页，共61页。第49页/共62页第四十九页，共61页。第50页/共62页第五十页，共61页。第51页/共62页第五十一页，共61页。第52页/共62页第五十二页，共61页。 5、对初发酵时未产气的发酵管有疑问时，可用手轻轻敲动或摇动试管，如

10、有气泡沿管壁上升(shngshng)，应考虑有气体产生，做进一步试验。第53页/共62页第五十三页，共61页。 6、MPN检索表是采用(ciyng)三个稀释度九管法，较理想的结果是最低3管为阳性，最高3管为阴性。如无法估测样品中的菌数时，应做一定范围的稀释度。第54页/共62页第五十四页，共61页。 7、MPN检索表只提供(tgng)了3个稀释度，若改用其它浓度时，表内数字应相应增加或减少。第55页/共62页第五十五页，共61页。 酱油（GB/T2717-2003） 细菌菌落( jnlu)总数：30000cfu/ml 大肠菌群：30MPN/100ml 肠道致病菌：不得检出第56页/共62页第五

11、十六页，共61页。全脂奶粉、脱脂奶粉（GB5410-1999）特级一级二级细菌菌落总数(zngsh)：200003000050000（cfu/ml）大肠菌群409090（MPN/100g）肠道致病菌：不得检出不得检出不得检出第57页/共62页第五十七页，共61页。巴氏杀菌乳（GB5408.1-1999）细菌菌落(jnlu)总数：30000cfu/ml大肠菌群：90MPN/100ml肠道致病菌：不得检出第58页/共62页第五十八页，共61页。生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）菌落(jnlu)总数cfu/ml：100总大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml：不得检出耐热大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml：不得检出大肠埃希氏菌cfu/100ml或MPN/