荧光介绍及荧光显微镜的使用

1、 荧光介绍及荧光显微镜的使用荧光介绍及荧光显微镜的使用Leica 图象分析仪图象分析仪组成部分组成部分 显微镜显微镜 荧光显微镜荧光显微镜 可见光显微镜可见光显微镜 成象系统成象系统 照相机照相机 图象采集软件图象采集软件 检出能力高检出能力高 对细胞的刺激小对细胞的刺激小 能进行多重染色能进行多重染色 物体构造的观察物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析发荧光量的测定对物质定性、定量分析 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光。

2、再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。即：物质吸收短波光，发射出的长波光。 一种光化荧光一种光化荧光 透射荧光显微镜原理透射荧光显微镜原理荧光激发滤色块荧光激发滤色块 透过能使标本产生荧光的特定波长的光，同透过能使标本产生荧光的特定波长的光，同时阻挡对激发荧光无关的光。时阻挡对激发荧光无关的光。 几种主要的荧光激发滤色块几种主要的荧光激发滤色块 荧光显微镜标本制作要求荧光显微镜标本制作要求 （一）载玻片（一）载玻片载玻片厚度应在载玻片厚度应在0.81.2mm之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另之间，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片

3、必须光洁，厚度均匀，无明显自一方面不能使激发光在标本上聚集。载玻片必须光洁，厚度均匀，无明显自发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。发荧光。有时需用石英玻璃载玻片。 （二）盖玻片（二）盖玻片盖玻片厚度在盖玻片厚度在0.17mm左右，光洁。左右，光洁。（三）标本（三）标本组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发光大部分消耗在标本下部，而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判而物镜直接观察到的上部不充分激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响判断。断。（四）封裱剂（四）封裱剂封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的

4、亮度在封裱剂常用甘油，必须无自发荧光，无色透明，荧光的亮度在pH8.59.5时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和时较亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l pH9.09.5的碳酸盐的碳酸盐缓冲液的等量混合液作封裱剂。缓冲液的等量混合液作封裱剂。（五）镜油（五）镜油一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用一般暗视野荧光显微镜和用油镜观察标本时，必须使用镜油，最好使用特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替特制的无荧光镜油，也可用上述甘油代替。单细胞悬液制备制胶片DNA碱解旋电泳中和细胞裂解染色与观察单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）单细胞凝胶电泳试验（彗星试验）对照组

5、与实验组中对照组与实验组中肺泡巨噬肺泡巨噬细胞细胞DNA迁移的实验图象迁移的实验图象 二、可见光显微镜的使用二、可见光显微镜的使用 光源在显微镜下方，不需要开汞灯光源在显微镜下方，不需要开汞灯 可以观察载玻片上的任何物质可以观察载玻片上的任何物质三、成象系统三、成象系统1、照相机、照相机2、图象采集软件、图象采集软件 Leica100图象分析软件，把显微镜下看到的图象拍摄图象分析软件，把显微镜下看到的图象拍摄下来，保存成图片文件，再进行相关分析。下来，保存成图片文件，再进行相关分析。 标本制作标本制作 正确选择滤色镜正确选择滤色镜 200W的超高压汞灯作光源的超高压汞灯作光源 ，需预热需预热15分。寿命有限，标分。寿命有限，标本应集中检查，以节省时间，保护光源。本应集中检查，以节省时间，保护光源。 防止污染（载物台已被防止污染（载物台已被EB污染）污染） 染色后尽快观察，荧光逐渐减弱染色后尽快观察，荧光逐渐减弱测试题测试题1、该仪器由哪几部分组成？该仪器由哪几部分组成？2、什么是荧光？荧光有几种类型？有什么性、什