母种培养基的配制

1、实验一 母种培养基的配制、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；、主要仪器设备及药品材料： 试管（若干个）、 刀 、砧板、 天平、 电磁炉， 铝锅、棉塞（或硅胶塞） 、 纱布 、 烧杯、 量筒 、马铃薯、 琼脂 、葡萄糖、高压灭菌锅 三、实验步骤与方法 :1 PDA 培养基配方马铃薯 200克,葡萄糖 20克,琼脂 20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制（ 1 ）熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取 200克，切成玉米大小颗粒或薄 片。量筒量取 1 000毫升水，铝锅中煮沸后记时 30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和

2、琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至 1000 毫升。（2）调节PH值。（3） 分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长 度的 1/5 左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。4）捆把。7 支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。5）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。6）摆斜面，培养基长度约为试管长度的 1/2 。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。2、胡萝卜马铃薯培养基配方马铃薯20g,胡萝卜20g，琼脂20g，水1000ml3、完全培养基配方蛋白胨2g，葡糖糖20g,磷酸二氢

3、钾0.46g，硫酸镁0.5g，磷酸氢二钾1g,琼 脂 15g，水 1000ml四、实验结果1. 常用的母种培养基配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g。琼脂20g，水1000ml，如果需要配制250ml的培养 基，那么马铃薯、葡萄糖、琼脂的比例是 50:5:5,也可用蔗糖取代葡萄糖，即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾 3g，硫酸镁1.5g，维生素B1 10哑，即为马铃薯综合培养基。广泛适用于各种食用菌母种的分离，培养和保藏。马铃薯玉米粉培养基：马铃薯（去皮）200g，蔗糖20g，玉米粉50g，琼脂20g，磷酸二氢钾1g,硫酸镁0.5g，水1000ml。本配

4、方适合于香菇、黑木耳、猴头菌的培养。 马铃薯黄豆粉培养基：马铃薯 200g，蔗糖20g，琼脂20g，黄豆粉20g ,碳酸钙10g，磷酸二氢钾1g ,硫酸镁0.5g，水1000ml。适用于蘑菇、草菇。 葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：葡萄糖20g，蛋白胨20g，琼脂20g ,水 1000ml 。 蛋白胨、酵母、葡萄糖琼脂培养基：蛋白胨2g，酵母膏2g,硫酸镁0.5g，磷酸二氢钾0.5g，磷酸氢二钾1g ,葡萄糖20g , 维生素B1 20哑，琼脂20g，水1000ml 。具体步骤1.计算。按照选定的培养基配方，计算各种成分的用量。2. 称量。用天平秤取各种物质，马铃薯去皮去芽眼，削掉青绿部分，对不易称量

5、的成分，可用玻棒和烧杯称重，微量元素等需要量少，难以称准时，可先配成较浓的原液，再从中取出需要的量。3. 配制。若配制合成培养基，先量取蒸馏水，加入琼脂，加热溶化;再加入称好的其他物质。为避免发生沉淀造成营养损失，加入的顺序一般是先加缓冲剂，再依次加入主要元素、微量元素和维生素等;若各种成分均不发生沉淀，也可一起加入。4. 煮汁，去滤液。马铃薯切成 1 cm见方的小块或23伽厚的薄片，加水约1200ml煮沸，再用文火保持 2030分钟、并适当搅拌，使营养物质充分溶解出来，然后用 4层预湿的纱布过滤，取其滤液。5. 补足水量，加药品溶化。补足水量至1000ml,然后往滤液中加入琼脂，小火加热，搅拌至琼脂完全溶解，再加入葡萄糖和其他营养物质使其溶化后，用PH试纸检测其PH值，可根据需要使用氢氧化钠和盐酸，调整适宜的酸碱度，进行分装。注意开锅搅拌，防止溢出或焦底。6. 分装试管。制备好的培养基应趁热分装，可用玻璃试管，首先把较大的玻璃漏斗固定在滴定架上，下接一段乳胶管和玻璃管，用弹