食品分析与检验重要实验讲解

1、实验一：食品中亚硝酸盐的测定一、实验目的1. 掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的原理2. 掌握分光光度计的使用、标准曲线的绘制及计算方法3. 了解分光光度计的构造二、实验原理样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重 氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，其最大吸收波长为538 nm,可测定吸光度并与标准比较定量。三、仪器与试剂1. 仪器（1）分光光度计（2）小型胶肉机（3）恒温水浴锅2试剂（1）亚铁氰化钾溶液（106g/L）:称取106.0g亚铁氰化钾，用水溶解，并稀释至1000 mL。（2）乙酸锌溶液（220g/L）:称取220.0 g乙酸锌，先加30mL冰

2、醋酸溶解，用水稀释至 1000 mL。（3）饱和硼砂溶液（50g/L）:称取5.0g硼酸钠，溶于100mL热水中，冷却后备用。（4）对氨基苯磺酸溶液（4g/L）:称取0.4 g对氨基苯磺酸，溶于100mL20 % （V/V ） 盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。（5）盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）:称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL水中,混匀后， 置棕色瓶中，避光保存。（6）亚硝酸钠标准溶液（200u/mL）:准确称取0.1000g于110C120C干燥恒重 的亚硝酸钠，加水溶解移入500mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0卩g/m）L :临用前，吸取亚硝酸

3、钠标准溶液 5.00mL， 置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度。四、实验步骤1. 提取称取2.50g经绞碎混匀的样品，于50mL烧杯中，加硼砂饱和溶液12.5mL饱和硼砂 溶液，搅拌均匀，以70C左右的水约300 mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴 中加热15mi n，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。2. 提取液净化在振荡上述提取液时加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL乙酸锌溶 液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min,除去上层脂肪，上清液用滤纸过 滤，弃去初滤液30mL，滤液备用。3.亚硝酸盐的测定与数据记录0123456789标准使用液体积mL0.000.

4、200.400.600.801.001.502.00样品质量 g/样品提取液体积mL/对氨基苯磺酸溶液2mL（混匀静置3-5min）盐酸萘乙二胺溶液1mL水至刻度，混匀，静置15mi n比色测吸光度2cm比色皿，538nm，0管调零吸光度1.五、结果计算绘制标准曲线2.3.（卩 g）。m X 1000 X=以亚硝酸钠量（卩g）为横坐标，与其对应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 用样品提取液的吸光度，在以上亚硝酸钠标准曲线上查出亚硝酸钠的量 计算V2 m X X 1000Vi式中：X 样品中亚硝酸盐的含量，mg/kg；m测定用样液中亚硝酸钠的含量，卩g；m样品的质量，gVi样液总体积mLV2测定用

5、样液体积mL六. 思考题1. 若从标准曲线上查不到滤液所相当的亚硝酸钠量（即大于10卩g）是，如何改进本实验？2. 采用回归方程计算与从校正曲线直接求得亚硝酸钠的含量，各有什么优缺 点？3. 紫外可见分光光度计由哪几部分组成，每个主要部分的作用是什么？4. 使用紫外可见分光光度计时，应注意哪些问题？实验二：茶饮料中茶多酚的测定一、实验目的1. 掌握分光光度计法测定茶饮料中茶多酚的基本原理和操作程序。 2掌握分光光度计的使用及计算方法二、实验原理茶饮料中的多酚类物质能与亚铁离于形成紫蓝色络合物，用分光光度计法测定 其含量。三、仪器与试剂1. 仪器(1)分析天平：感量 0.001g。(2)分光光度

6、计。2. 试剂所用试剂均为分析纯(AR);试验用水应符合GB/T 6682中的三级水规格。(1) 酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁0.1g和酒石酸钾钠0.5g,用水溶解并定容至 100mL(低温保存有效期10天)。(2) PH7.5磷酸缓冲溶液A. 23.87 g/L磷酸氢二钠：称取磷酸氢二钠23.87 g加水溶解后定容至1 L。B. 9.08g/L磷酸二氢钾：称取经110C烘干2h的磷酸二氢钾9.08g,加水溶解后定容至 1L。取上述磷酸氢二钠溶液85mL和磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。四、实验步骤1. 试液制备( 1 )含二氧化碳茶饮料量取充分混匀的样液100mL于250mL烧杯中，称取其总

7、质量，然后置于电炉上加 热至沸，在微沸状态下加热10mi n,将二氧化碳气排除。冷却后，用水补足其原来的 质量。摇匀后，备用。( 2)茶叶称取3g磨碎样品于500mL锥形瓶中，加入热蒸馏水450mL,立即移入沸水浴中浸 提45min (每隔10min摇动一次)浸提完毕后，立即趁热减压过滤。滤液移入 500mL 容量瓶中，残渣用少量热蒸馏水洗涤 2-3次，并将滤液滤入上述容量瓶中，冷却后， 用蒸馏水稀释至刻度。2. 测定( 1 )茶饮料精确移取上述制备的试液1 mL5 mL于25 mL容量瓶中，加水4 mL、酒石酸亚 铁溶液5mL，充分摇匀，用PH7.5磷酸缓冲溶液定容至刻度。用10mm比色皿，

8、在波 长540nm处，以试剂空白作参比，测定其吸光度(A1)。同时移取等量的试液于25mL 容量瓶中，加水4mL，用PH7.5的磷酸缓冲液定容至刻度，测定其吸光度(A2)。( 2)茶叶精确移取上述制备的试液1 mL于25 mL容量瓶中，加水4 mL、酒石酸亚铁溶液 5mL，充分摇匀，用pH7.5磷酸缓冲溶液定容至刻度。用10mm比色皿，在波长540nm 处，以试剂空白作参比，测定其吸光度 (A)。m式中： X样品中茶多酚的含量，mg/kg;Ai试液显色后的吸光度；A试液底色的吸光度；K 稀释倍数；m 测定时称取试样的质量，g；1.957用10mm比色皿，当吸光度等于 相当于1.957mg。(2

9、)茶叶中茶多酚含量计算公式A X 1.957X 2X(%)=0.50 时,1mL茶汤中茶多酚的含量100X样品中茶多酚的含量，A试样溶液的吸光度；M称取试样的质量，gV1试样溶液的总体积，ViXV2X M%X 100mLmLV2测定用试样溶液的体积， 1.957用10mm比色皿，当吸光度等于相当于1.957mg。六.思考题1.若实验室无10mm比色皿，可否用1mm比色皿进行测定, 作何变化。0.50 时,1mL茶汤中茶多酚的含量若可以，结果计算公式将五、结果计算1.数据记录(1)茶饮料样品质量mg测定用样液体积mL试液显色后的吸光度A1试液底色的吸光度A2(2)茶叶样品质量Mg试液显色后的吸光

10、度A2.计算(1)茶饮料中茶多酚含量计算公式(A1- A2)X 1.957X2X KX=X 1000实验三：火焰原子吸收光谱法测定食品中的铜一、实验目的1. 通过对铜最佳测定条件的选择，了解与火焰性质有关的一些条件参数对铜测定灵 敏度的影响；2.3.4.5.了解原子吸收分光光度计的基本结构和原理； 掌握火焰原子吸收光谱分析的基本操作；学习食品中铜含量的测定方法。 熟悉和掌握原子吸收分光光度法的定量分析方法 学习微波消解仪在样品前处理中的应用、实验原理 样品处理后，导入原子吸收分光光度计中，原子化以后，吸收 324.8共振线，其 吸收量与铜含量成正比，与标准系列比较定量。三、仪器与试剂1. 仪器

11、（ 1 ）原子吸收分光光度计（附铜空心阴极灯）（ 2）微波消解仪2. 试剂1)硝酸：优级纯2)过氧化氢（ 30%）3)硝酸： 1+994)6mol/L 硝酸：量取 60 mL 硝酸，加水稀释至5)铜的标准储备液（1000卩g/mL）:称取1.000除非另有规定， 本方法所使用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。160mL。克金属铜（ 99.99%），分次加入6mol/L硝酸溶解，总量不超过37mL,移1000 mL容量瓶中，用水稀释至刻度。溶液稀释， 配制成浓度为 0.4、可以直接购买该元素的有证国家标准物质作为标准溶液 （6）铜标准使用液： 将铜标准储备液用硝酸 （1+1

12、99） 0.8、1.0、2.0、3.0、4.0mg/L 的标准使用液。四、实验步骤狭 缝： 0.19nm 灯头高度： 3mm1. 原子吸收光谱仪分析参考条件测定波长：324.8nm灯 电流：6mA空气流量： 9L/min乙炔流量： 2L/min背景校正：氘灯可根据仪器情况调至最佳状态。2. 样品消化称取0.10g0.50g试样于消解罐内，加硝酸5mL,12mL30%的过氧化氢，盖好 安全阀后，将消解罐放入微波炉消解系统中，选择合适的消解条件进行消解，至消 解完全，转移到25 mL容量瓶中,用硝酸（1+199）定容至刻度。同时作试剂空白。 3. 样品测量将标准溶液、空白溶液和样品溶液依次喷入火焰

13、，测量吸光度。4.绘制标准曲线并查出样液铜元素的浓度。 五、结果计算1.数据记录样品质量mg样品提取液体积VmL样液中铜元素浓度Cmg/L2.计算CX VX (mg/ kg )=mX 试样中铜的含量(mg/kg)；C 样品中检测物浓度，mg/LV 样品体积，mLm 样品质量，g计算结果保留两位有效数字。1.六、思考题原子吸收光谱仪由哪几部分组成，每个主要部分的作用是什么?2.在原子吸收分析中，为什么常选用共振线作为吸收线?153.原子吸收定量分析的依据是什么？进行定量分析有哪些方法？试比较它们的优缺点。实验四：食品中甜蜜素的测定一、实验目的1. 了解气相色谱仪的使用方法；2. 了解气相色谱仪的

14、基本结构和原理； 3学习食品中甜蜜素的气相色谱测定方法。二、实验原理 在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应,生成环己醇亚硝酸酯,利用气 相色谱法进行定性和定量。三、仪器与试剂1. 仪器气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。旋涡混合器。离心机。10卩L微量注射器。DB-5 毛细管柱 30m X 0.53mmX 0.25 卩 m（1）（2）（3）（4）（5）正己烷氯化钠 层析硅胶 （或海砂 ）。50g/L 亚硝酸钠溶液100g/L 硫酸溶液。环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取 1.0000g 环己基氨基磺酸钠,加水溶解2. 试剂（1）（2）（3）（4）（5）（6）并定容至100mL，此溶液每毫升含环

15、己基氨基磺酸钠 10mg。四、实验步骤DB-5毛细管柱 30mX 0.53mmX 0.25卩m,或相当者。 检测器温度：200 C 汽化室温度：200 C 炉箱温度： 载气流速（ 氢气流速（ 空气流速（1 、气相色谱检测样品参考条件：（1）（2）（3）60 r压力）： 60kPa压力）： 50kPa压力）： 60 kPa（4）（5）（6）（7）2. 试样制备称取20.0g试样于100mL带塞比色管，置冰浴中。3. 测定（1）标准曲线的制备：准确吸取1.00mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100mL带塞 比色管中，加水20mL。置冰浴中，加入5mL50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸 溶

16、液，摇匀，在冰浴中放置 30min，并时常摇动，然后准确加入 10mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后振摇80次。待静止分层后吸出正己烷层于 10mL带塞离心管中进行 离心分离。每毫升己烷提取液相当于1mg环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样1 uL5 uL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。(2)试样测定：处理过程同标准溶液前处理。吸取的试样提取液1uL注入色谱仪进行分析。五、结果计算1. 数据记录样品质量mg样品提取液体积VmL样液中甜蜜素浓度C mg/mL2.计算CX VX (g/kg )=mC样品中甜蜜素浓度，mg/mLV 样品提取液体积，mL m 样液质量，g 计算结果保留两位有效数字。

17、六、思考题1. 气相色谱仪由哪几部分组成，各有什么作用？2. 气相色谱定量分析的方法有几种？各有哪些优缺点?实验五：乳制品中三聚氰胺的测定一、实验目的1. 了解 HPLC 仪器基本结构 ,掌握实验仪器的一般使用方法；2. 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择；3. 掌握液相色谱定性定量分析技术。4. 掌握乳制品中三聚氰胺的测定方法二、实验原理试样用甲醇 -水提取，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱柱分离后，根据保 留时间和峰面积进行定性和定量。三、仪器与试剂1. 仪器高效液相色谱仪，配有紫外检测器或二极管阵列检测器分析天平：感量为 0.0001 g超声波水浴涡旋混合器(1)( 2

18、)( 3)2. 试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的一级水。 甲醇：色谱纯 乙腈：色谱纯 柠檬酸 辛烷磺酸钠：色谱纯( 4)(1)(2)(3)(4)(5)离子对试剂缓冲液：准确称取2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠，加入约980 mL 水溶解，调节pH至3.0后，定容至1L备用。(6) 三聚氰胺标准品： CAS 108-78-01，纯度大于 99.0%。(7)三聚氰胺标准储备液：准确称取100 mg (精确到0.1 mg)三聚氰胺标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇水溶液(1+1)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL的 标准储备液，于4C避光

19、保存。四、实验步骤1、高效液相色谱检测样品参考条件：C18柱，250 mmX4.6 mm, 5 ym,或相当者。 流动相：乙腈 +离子对试剂缓冲液 (10+90) 恒量流速 离子对试剂缓冲液：10mM辛烷磺酸钠+10mM柠檬酸加1000mL水定容 流速： 1mL/min温度： 25C 进样体积： 20yL 检测器： DAD 检测器 波长 236nm根据保留时间定性，外标峰面积法定量(1)( 2 )( 3)( 4)( 5 )( 6 ) ( 7)2. 标准曲线的制备：用流动相将三聚氰胺标准储备液稀释得到的浓度为5、10、20、40、50卩g/m的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积 -浓度作

20、图，得到标 准曲线回归方程。3. 试样测定：称取试样2克左右样品，移入100mL容量瓶中，加入适量甲醇+水(2+8)，充分混匀，超声提取10分钟后用甲醇+水（2+8）定容至刻度，过滤，滤液过0.45叩 滤膜过滤后进液相色谱测定。五、结果计算1.数据记录样品质量mg样品提取液体积VmL样液中三聚氰胺浓度Cmg/L2.计算CX VX （mg/kg ）=mX 试样中三聚氰胺的含量（mg/kg）；C 样品中检测物浓度，mg/LV 样品体积，mL m 样品质量，g 计算结果保留两位有效数字。六、思考题1. 高效液相色谱仪由哪几部分组成？2. 在高效液相色谱分析中，为什么要对流动相进行脱气？有哪些脱气方式

21、?实验六：食品中合成着色剂的测定一、实验目的1. 掌握聚酰胺吸附法提取色素的样品前处理方法。2. 加深对色谱分离原理的理解,掌握主要实验条件的选择；3. 掌握液相色谱定性定量分析技术。4. 掌握食品中人工合成色素的测定方法二、实验原理食品中人工合成着色剂在酸性条件下用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取,制成水溶液,注入高效液相色谱仪,经反相色谱分离后,根据保留时间定性,与峰面积 比较进行定量。三、仪器与试剂2. 试剂除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为 GB/T 6682规定的一级水。(1) 甲醇(色谱纯)：经0.45 pm滤膜过滤。聚酰胺粉(尼龙 6)：过 200目筛。甲醇冲酸(6+4)溶液：

22、量取甲醇60 mL,甲酸40 mL,混匀。 柠檬酸溶液：称取20g柠檬酸，加水至100 mL,溶解混匀。无水乙醇-氨水-水(7+2+1)溶液：量取无水乙醇70 mL,氨水20 mL，水10mL,(2) 0.02 mol/L乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵，加水溶解至1000 mL,经0.45 pm滤 膜过滤。( 3)( 4)( 5)( 6)混匀。(7) pH6的水：水加柠檬酸溶液调pH值到6。(8) 合成着色剂标准溶液： 准确称取按其纯度折算为 100%质量的柠檬黄、 日落黄各 0.100 g,置100 mL容量瓶中，加pH 6水到刻度，配成浓度为1.00 mg/mL的着色剂 水溶液。也可以

23、直接购买该着色剂的有证国家标准物质作为标准溶液。(9) 合成着色剂标准使用液：临用时将上述溶液加水稀释 100倍，经0.45 p m滤膜过 滤，配成每毫升相当于10 pg的合成着色剂。(10) 乙酸高效液相色谱仪,配有紫外检测器或二极管阵列检测器 分析天平：感量为 0.0001 g 电热恒温干燥箱 真空泵 真空抽滤瓶G3垂融漏斗2. 仪器：(1)( 2)( 3)( 4)( 5)四、实验步骤1 、高效液相色谱检测样品参考条件：(1)( 2)( 3)( 4)( 6)Ci8柱，250 mmx4.6 mm, 5 ym,或相当者 流动相：甲醇 -乙酸铵溶液 (PH=4.0,0.02 mol/L) 梯度洗

24、脱：甲醇：20%35%, 5min; 35%98%, 5min； 98% 继续6 min 流速： 1mL/min(5)检测波长：254nm2. 样品处理1、称取20.0g40.0g放入100mL烧杯中，加热驱除二氧化碳。2. 色素提取1、聚酰胺吸附法：试样溶液加柠檬酸溶液 pH值到6,加热至60C,将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60C PH=4的水洗涤35次，然后用甲醇-甲酸混合溶液洗涤35次，再用水洗至中性，用乙醇- 氨水-水混合溶液解吸35次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干， 加水溶解，定容至5mL。约0.45pm滤膜过滤，

25、取20此进高效液相色谱仪分析。2、测定取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留 时间定性，外标峰面积法定量。五、结果计算1. 数据记录样品质量mg样品提取液体积VmL样液中柠檬黄浓度C1 mg/L样液中日落黄浓度C2 mg/L2.计算ex VX(g/kg )=mx 1000C样品中检测物浓度，mg/LV 样品体积，mL m 样品质量，g 计算结果保留两位有效数字。六、思考题1、什么是梯度洗脱？它与气相色谱中的程序升温有何异同？2、用聚酰胺粉吸附提取色素时，用柠檬酸调整样液的pH值到6的目的是什么？如何 解吸被聚酰胺粉吸附的色素？实验七：糖精含量的检测 （薄层色谱法 ）一、实验目的1. 学习薄层色谱法测定食品中糖精含量的基本原理。2. 掌握薄层色谱法的基本操作技术。二、实验原理在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取，浓缩、薄层色谱分离、显色后， 与标准比较，进行定性和半定量测定。三、仪器与试剂盐酸溶液（ 1