光线性角化病皮损细胞的P21ras蛋白定量及DNA倍体分析

1、    光线性角化病皮损细胞的P21ras蛋白定量 及DNA倍体分析        ras癌基因编码的P21ras蛋白是参与细胞浆膜内面刺激细胞生长信号传递的主要物质，当 ras癌基因发生突变时可导致基因活化，使基因产物P21ras蛋白呈现过度表达1。我们应用 流式细胞免疫荧光技术对光线性角化病（actinic keratosis,AK）皮损细胞的P21ras蛋白相对含 量进行了定量分析,以探讨P21ras蛋白与该病的联系。 一、材料和方法 （一）标本来源：采用19

2、721995年我院保存的石蜡包埋组织块，AK27份、正常皮肤4份 、高分化皮肤鳞癌8份，并把8份符合下列条件的AK归为异型增生较重的AK，表皮层次 及细胞极性有较严重的紊乱,异形细胞不仅限于基底层，但尚无原位癌的特点。 （二）试剂与方法： 1.本研究所用的流式细胞仪为美国生产的FACS420型流式细胞仪。 2.细胞DNA倍体检测样本的制备及检测方法参见文献2。 3.细胞P21ras蛋白检测样本的制备及检测方法参见文献3，本研究采用间接免疫荧光法， 一抗为1400倍稀释的鼠抗人ras基因产物单克隆抗体(panrasCloneF13262OncogeneScience, Inc.USA),二抗采用

3、120倍稀释的羊抗鼠FITCIgG抗体(军事医学科学院微生物研究所生产 )。 4.测定资料的分析：根据DNA指数(DI值)来判断DNA倍体，DI值=样品细胞的G0/G1期峰均道 值/正常组织细胞的G0/G1期峰均道值，DI值=1.0±2CV为2倍体，DI值1.0±2CV为异倍体。 CV为仪器的变异系数，一般调整为5.0之内。按照Morkve4等提出的方法分析P21ras蛋白含量，以荧光指数（FI值）表示P21ras蛋白 的相对含量，FI值=(肿瘤细胞的ras基因表达的平均荧光强度对照样品ras基因表达的平均 荧光强度)/正常皮肤组织细胞的ras基因表达的平均荧光强度。 表1

4、 各组样品的P21ras蛋白和对含量组别例数P21ras蛋白相对含量FI值t值P值范围<"0 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100317180524218" 12 14>±s正常人皮肤40.909-1.1070.997±0.0871.59>0.05光线性名化病270.833-1.5431.180±0.221异形增生程度较轻190.833-1.3601.124±0.1652.16<0.05异形增生程度较重80.970-1.5431.248±

5、0.192高分化鳞状细胞癌80.137-1.9801.458±0.246二、结果 各组样品的P21ras蛋白相对含量结果见表1。正常皮肤无DNA异倍体，光线性角化病有3例 DNA异倍体(3/27)，其DI值分别是1.115、1.115、1.114，与其对应的P21ras蛋白FI值分别是 1.543、1.117、0.970。高分化皮肤鳞癌有5例DNA异倍体(5/8)，其DI值分别是1.780、1.338、 1.221、1.154、1.127，与其对应的P21ras蛋白FI值分别是1.360、1.432、1.131、1.980、1.300。 三、讨论 P21ras蛋白是ras癌基因家族(

6、HrasKrasNras)编码的蛋白质，在肿瘤细胞中因其ras基因 的点突变基因激活，导致P21ras蛋白过量表达，P21ras蛋白持续激活靶分子并向细胞传递 生长信号，使细胞持续增殖，最终导致细胞恶变1。另外，研究发现光暴露部位的AK及 SCC存在ras基因的点突变,并认为紫外线照射与皮损中的ras基因激活有关，AK细胞的恶性 转化与ras基因激活有关5。 本研究结果表明，27例光线性角化病皮损细胞的P21ras蛋白含量与正常皮肤组织细胞比较 差异无显著性，但前者的P21ras蛋白含量存在着增高的倾向。8例异形增生较重的光线性 角化病皮损细胞的P21ras蛋白含量高于另外19例光线性角化病皮

7、损细胞及正常皮肤组织细 胞的P21ras蛋白含量，差异均具显著性，这表明P21ras蛋白含量可随光线性角化病皮损细 胞异形增生程度的加重而增高。另外，皮肤高分化鳞癌及光线性角化病皮损细胞的 P21ras蛋白含量的最高值病例（1.980及1.543）均是DNA异倍体细胞。上述这些变化均提示 P21ras蛋白与光线性角化病皮损细胞异形增生及细胞的恶性转化有关。作者单位：李玉平（050000石家庄，河北医科大学第二医院皮肤科）刘强（050000石家庄，河北医科大学第二医院皮肤科）孙修蓉（050000石家庄，河北医科大学第二医院皮肤科）廖海鹰（050000石家庄，河北医科大学第二医院外科）石凤梧（05

8、0000石家庄，河北医科大学第二医院外科）参考文献1张继强，范顺才，刘华福.Ras癌基因产物P21在乳腺良、恶性病变中的表达.中华病理学杂志,1994,23:302303.2李玉平，廖海鹰，孙修蓉，等.光线性角化病皮损细胞的DNA含量流式细胞分析.中华皮肤科杂志,1997,30:246247.3四荣联，李玉平，姚春华，等.皮脂腺癌及汗腺癌细胞Bcl2蛋白的定量分析.中华皮肤科杂志,1997,30:258259.4Morkve O, Laerum OD. Flow cytometric measurement of p53 protein expression and DNA content in paraffinembedded tissue from bronchial carcinomas. Cytometry, 1991,12:438 444. 5Spencer JM, Kahn SM, Jiang W, et al. Activat