系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞增殖反应与其产生甲硫氨酸脑啡肽的关系课稿

1、系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞增殖反应与其产生甲硫氨酸脑啡肽的关系安徽医科大学学报2000 年第 3 期第 35 卷 基础医学研究作者：徐星铭戴宏魏伟单位：徐星铭戴宏（安徽医科大学第一附属医院肾内科，合肥230022）；魏伟（安徽医科大学临床药理研究所，合肥230032）关键词：红斑狼疮；系统性；血液；淋巴细胞；脑啡肽；甲硫氨酸摘要目的研究系统性红斑狼疮(SLE) 患者外周血淋巴细胞(PBL) 增殖反应与其产生甲硫氨酸脑啡肽(Met-Enk) 的关系。方法 淋巴细胞增殖法和 Met-Enk 放免测定。结果 SLE患者 PBL 增殖反应异常增高的同时， 其产生的 Met-Enk 亦明显升高。

2、结论PBL产生的内源性 Met-Enk 可能参与了 SLE患者 PBL增殖反应的异常改变。中图分类号R593.24文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)03-0184-02 Relation between proliferationand methionine-enkephalin production of the peripheral bloodlymphocytefrompatientswithsystemiclupuserythematosusXu Xingming,Dai Hong(The First Affiliated Hospital Wei Wei）（In

3、stitute of ClinicalPharmacology,Anhui Medical University,Hefei 230032)AbstractObjectiveTo observe therelationshipbetweenproliferationandmethionine-enkephalin(Met-Enk)production of the peripheral blood lymphocyte(PBL) frompatients with systemic lupus erythematosus(SLE). MethodsLymphocyteproliferation

4、and Met-Enk radioimmunoassaywere used.ResultsThe abnormalincreaseof PBLproliferation in SLE patients was related to the increaseof Met-Enkproduction.ConclusionEndogenousMet-EnkproducedbyPBLmay participatein theabnormalproliferation with SLE PBL.MeSHlupuserythematosus,systemic;blood,lymphocytes; enke

5、phalin, methionine内源性阿片肽 (endogenous opioid,EOP)参与了免疫反应的调节， - 内啡肽 ( -endophin, -End) 对淋巴细胞增殖反应的影响不能被纳络酮(naloxone,Nal)阻断，此可能是由 -End 特异性的非阿片受体机制所介导1。而甲硫氨酸脑啡肽(methionine-enkephalin,Met-Enk)主要由刀豆蛋白A 或植物血凝素诱导 T 淋巴细胞释放， 通过自分泌、 旁分泌途径对细胞增殖主要表现为调节作用2。然而，系统性红斑狼疮(systemiclupus erythematosus,SLE)患者外周血淋巴细胞(perip

6、heralblood lymphocyte,PBL)异常增殖反应与PBL 产生Met-Enk的关系尚未见报道。1材料1.1SLE 患者来源安徽医科大学第一附属医院内科就诊患者。均符合1982 年美国风湿病学会SLE诊断标准确诊为SLE。1.2人 PBL 的制备无菌取静脉血3 ml 放入肝素抗凝管中。取10 ml离心管，预先加入2.5 ml淋巴细胞分离液，用滴管吸取抗凝血2 ml，离分层液约1 cm处，沿管壁缓慢加入。离心 400×g， 20 min ，吸弃血浆层至淋巴细胞层0.5 cm 处，将淋巴细胞和少许分离液一起移入 10 ml 离心管中，加入 5 倍体积 pH 7.2 无钙、无

7、镁的 Hanks 液中混匀，以 760×g 离心 10 min ，弃上清再反复洗 2 次，计数后用于实验。1.3主要仪器与设备Napco-6100 CO2 培养箱，美国杜邦公司； XSZ倒置显微镜，重庆光学仪器厂；YJ-1450 型医用净化工作台，苏州净化设备公司；TGL-16c 台式高速离心机，上海安亭科学仪器厂； GL20A全自动高速冷冻离心机，湖南仪器仪表总厂离心机厂； FJ-2011 自动 计数仪，西安 262 厂；EL301 Strip reader( 酶标仪 ) ，美国 Bio-Tek 公司。 ODS-硅胶柱 (Se08p-Pak) ，美国 Incstar 公司。1.4试

8、剂与药物RPMI1640培养粉：美国 Gibco 公司产品。完全 RPMI1640培养液加 25 mmol*L-1 Hepes,1 mmol*L-1丙酮酸钠， 2 mmol*L-1 谷氨酰胺， 50 mol*L-1 二巯基乙醇， 1×105 IU*L-1 青霉素 G，100 mg*L-1 链霉素， 10%(体积分数 ) 小牛血清，pH为 7.4 。植物血凝素 (phytohemmaglutinin,PHA) ：美国 Serva 公司产品 ) 。四甲基偶氮唑盐 (MTT)：美国 Sigma 公司产品，用含5 g*L-1 葡萄糖的磷酸缓冲液 (0.02 mol*L-1 pH 7.2) 配

9、成 5 g*L-1 使用液， 4冰箱避光保存。甲硫氨酸脑啡肽 (125I-Met-Enk) 药盒：美国 Incstar 公司产品。2 方法2.1人 PBL增殖反应 3常规制备人PBL悬液，用完全RPMI1640 培养液调成 1× 1010*L-1 。于 96 孔培养板中每孔加入细胞悬液 100 l ，4 mg*L-1 PHA 100 l ，置 0.05 CO2、37培养 48 h。于每孔加入 5 g*L-1 的 MTT液 100 l ，于振荡器上振荡 1 min ，再放入 0.05 CO2、37培养箱中继续培养 2 h 。培养结束后以 760×g 离心 10 min ，吸弃

10、上清后每孔加入酸化异丙醇 120 l ，于振荡器上振荡 30 s ，在酶标仪上于 570 nm 波长处读每孔吸光度 (absorbance,A) ，结果以其 A 的均值表示。2.2PBL的 Met-Enk 放免测定 根据 Incstar 说明书进行。2.3统计分析 本研究数据以± s 表示，以组间 t 检验进行统计处理。3 结果图 1 结果表明， SLE患者 PBL增殖反应异常增高时，其产生Met-Enk 的水平也明显高于正常人PBL产生 Met-Enk 的水平。图1 人外周血淋巴细胞增殖反应及其产生甲硫氨酸脑啡肽的关系( ±s,n=5)与正常人比较： *P 0.014 讨

11、论淋巴细胞在致分裂原的作用下可产生EOP，这些 EOP在体内同样具有生物活性，也起着类似神经内分泌信号分子的作用。Met-Enk 可能是主要作用于免疫细胞的2 受体，在免疫调节中具有特殊功能 4。SLE的病理机制较复杂，涉及的研究面广，目前仍十分不清 5。本研究表明， PHA可诱导正常人 PBL增殖及产生 Met-Enk ，而且发现， SLE患者 PBL异常增殖的同时，其产生 Met-Enk 的水平亦明显升高，提示 PBL产生的内源性 Met-Enk 可能参与了 SLE患者淋巴细胞功能的异常调节，对于进一步研究SLE免疫病理机制尤其是深入探讨EOP与疾病的关系有一定帮助。作者简介：徐星铭，女，

12、37 岁，硕士，副主任医师魏伟，男，博士，教授，博士生导师，副所长，中国药理学会抗炎免疫药理专业委员会副主任委员参考文献1，HazumE,Chang KJ,GuatracasasP. Specificnonopiatereceptors for-endorphins. Science,1979;205(6):1 0331 0352LinnerKM,QuistHE,SharpMet-enkephalin-containingpeptidesencodedproenkephalinamRNA expressedinactivedthymocytesinhibitthymocyteproliferation.BM.bymurineJImmunol,1995;154(6):5 0495 0603，陈敏珠，魏伟，张泓等 .免疫抑制药和增强药实验法.见：徐叔云，卞如濂，陈修主编 . 药理实验方法学.第 2版，北京：人民卫生出版社，1991：1 208 1 2454，吴桐，李晓玉. 免疫细胞