知柏地黄片质量标准研究

1、知柏地黄片质量标准研究     【摘要】  目的 建立知柏地黄片的质量标准。方法 对知柏地黄片中的山药、牡丹皮进行显微鉴别；采用HPLC测定山茱萸中马钱苷的含量及牡丹皮中丹皮酚的含量。结果 显微鉴别能快速检出山药、牡丹皮；马钱苷、丹皮酚的质量浓度在4.6292.32、5.12102.50 g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率分别为99.69%、97.78%，RSD分别为1.70%、1.80%。结论 建立的方法能准确、快速地进行定性、定量检测，可用于知柏地黄片的质量控制。 【关键词】  知柏地黄片；显微鉴别；高效液相色谱法

2、；马钱苷；丹皮酚Abstract:Objective To establish the  quality  standards  of  Zhibaidihuang tablets. Method  Microidentification   was  used to identify  Rhizoma  dioscoreae  and  Cortex  moutan； and  HPLC was used to assay loganin and pae

3、onol.Results  Rhizoma  dioscoreae  and  Cortex  moutan can be identified  by microidentification. Loganin and paeonol showed  good linearities over the ranges of 4.62-92.32 and 5.12-102.50 g/mL  with the  average recoveries of 99.69% (RSD=1.70%) and 97.78

4、%(RSD=1.80%), respectively.  Conclusin  This quality  control  method  can  be used  for qualitative  identification  and  quantitative  assay  of Zhibaidihuang tablets.Key words:Zhibaidehuang tablets; Microidentification; HPLC; loganin; pa

5、eonol知柏地黄片由知母、黄柏、山茱萸、牡丹皮、熟地黄、泽泻、茯苓、山药等八味药材组成，收载于卫生药品标准中，具有滋阴降火的功效，用于治疗阴虚火旺、潮热盗汗、口干咽痛、耳鸣遗精、小便短赤等1。该标准中包括了茯苓、山茱萸的显微鉴别，黄柏与牡丹皮的薄层色谱鉴别。为了提高药品标准而加强药品质量的控制，本文增订了山药、牡丹皮的显微鉴别，并对方中山茱萸中所含有效成分马钱苷及牡丹皮中所含有效成分丹皮酚2进行了含量测定。1  仪器与试药1.1  仪器         OLYMPUS生物显微镜CX31，岛津

6、LC2010A HT高效液相色谱仪， HU10300F2型超声波清洗器。1.2  试药         马钱苷对照品（批号: 111640-200502 ）、丹皮酚对照品（批号：110766-200416）均由中国药品生物制品检定所提供；知柏地黄片（广东益和堂制药有公司，批号：GC001、GC002、GC003），阴性对照（广东益和堂制药有限公司）；乙腈为色谱纯，水为超纯水；其他试剂均为分析纯。2  定性鉴别21  山药的显微特征    显微鉴别方法能快速

7、、准确地检出山药的显微特征：淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径2440 ，脐点短缝状或人字状;草酸钙针晶成束存在于壁细胞中或散在,见图1。2 2  牡丹皮的显微特征    显微鉴别方法能快速、准确地检出牡丹皮的显微特征：草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行，见图2。3  含量测定31  色谱条件       马钱苷：色谱柱为DiamonsilTM(钻石)  C18 （5 m，250 mm×4.6 mm）,柱温：40 ，流动相：四氢呋喃乙腈甲醇0.0

8、5%磷酸溶液（体积比17389），流速：1.0 mL/min，检测波长：236 nm，进样量：10 L。    丹皮酚：色谱柱为DiamonsilTM(钻石)  C18 （ 5 m，250 mm×4.6 mm）,柱温：室温，流动相：甲醇水（体积比7030），流速：1.0 mL/min，检测波长：274 nm，进样量：20 L。32  系统适应性321  对照品溶液的制备 取马钱苷对照品适量，精密称定，加体积分数50%的甲醇制成每1 mL含20 g的溶液，即得。另取丹皮酚对照品适量，精密称定，加体积分数50%的甲醇制

9、成每1 mL含30 g的溶液，即得。322  供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，精密称定，研细，取约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积分数50%的甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用体积分数50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。323  阴性样品溶液的制备 324  干扰试验 精密吸取各对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按上述条件进样分析，记录色谱图。结果阴性样品溶液色谱图均无干扰色谱峰，见图3,4。

10、60;    3.3  线性关系考察    精密量取马钱苷对照品溶液(0.2308 mg/mL)0.4、1、2、3、5、8 mL，分别置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1 mL含马钱苷4.62、11.54、23.08、34.62、57.70、92.32 g的梯度溶液。分别精密吸取10 L进样测定，以对照品质量浓度作为横坐标，测得的峰面积作为纵坐标，进行线性回归，得线性方程Y=1212.5X+7407，r=0.999 5。结果表明马钱苷对照品质量浓度在4.6292.32 g/mL之间与其峰面积呈良好的线性关系。&#

11、160;   精密量取丹皮酚对照品溶液(0.205 mg/mL)0.5、2、3、4、5、10 mL，分别置20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1 mL含丹皮酚5.12、20.50、30.75、41.00、51.25、102.50 g的梯度溶液。分别精密吸取20 L进样测定，以对照品质量浓度作为横坐标，测得的峰面积作为纵坐标，进行线性回归，得线性方程Y=105.15X-3.2071，r=0.999 8。结果表明丹皮酚对照品质量浓度在5.12102.50 g/mL之间与其峰面积呈良好的线性关系。3.4  精密度试验    分别吸取

12、马钱苷对照品、丹皮酚对照品溶液适量，重复进样6次，测定其峰面积，结果平均峰面积分别为36 313.2及4 303.6，RSD分别为0.75%和0.97%(n=6)。3.6  稳定性试验    取同一批号（批号：GC001）制备的供试品溶液，分别在0、1、2、3、4、5及6 h，分别测定马钱苷和丹皮酚的含量，结果RSD分别为1.05%和0.70%。表明供试品溶液在6 h内稳定。3.7  回收率试验    取同一供试品（批号:GC001）分别对马钱苷和丹皮酚进行回收率测定，平均回收率分别为99.69%和97.78%，R

13、SD分别为1.70%和1.80%。结果见表1,2。表1  马钱苷回收率的测定结果（略）表2  丹皮酚回收率的测定结果（略）4  讨  论4.1  由马钱苷和丹皮酚对照品溶液紫外扫描图谱可见，两成分的最大吸收波长分别为236 nm和274 nm，因此本法采用236 nm和274 nm 分别作为马钱苷和丹皮酚的检测波长。 4.2  卫生部药品标准中收载了知柏地黄片的茯苓、山茱萸的显微特征，本文增加了山药和牡丹皮的显微特征，方法简单，显微特征具有代表性，从而可以更有效地控制产品的内在质量。4.3  采用2005年版药典收载的“六味地黄丸”山茱萸含量测定项下的四氢呋喃乙腈甲醇0.05%磷酸溶液（体积比18 487）作为流动相，但是结果分离效果不好，将体积比调整为17389，结果供试品马钱苷峰能达到基线分离，峰形对称，保留时间适中，理论塔板数均大于4 000，故本法采用四氢呋喃乙腈甲醇0.05%磷酸溶液（体积比17389）作为马钱苷含量测定的流动相。4.4  本