第七章植物愈伤组织培养

1、第一节第一节 外植体的制备外植体的制备1.一般植物组织都能诱发愈伤组织。一般植物组织都能诱发愈伤组织。 材料必须完全无菌材料必须完全无菌 外植体的大小外植体的大小 第二节第二节 愈伤组织的愈伤组织的 培养培养一、培养基一、培养基 基本培养基只有部分植物组织能够培养和基本培养基只有部分植物组织能够培养和维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附维持下去，大多数组织需要添加各种各样的附加物，如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细加物，如维生素、氨基酸、糖醇，生长素、细胞分裂素等。胞分裂素等。二、愈伤的培养方式：二、愈伤的培养方式：培养分为固体和液体培养两大类。培养分为固体和液体培养两大类。液体培养又分液

2、体培养又分l三、培养条件三、培养条件l1、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需、光照：愈伤组织的诱导需弱光或不需光，分化需光。继代培养一般需光。光，分化需光。继代培养一般需光。l2、温度：一般采用、温度：一般采用2428的恒温条件的恒温条件进行。进行。l3、湿度：较大，以免引起培养基干缩。、湿度：较大，以免引起培养基干缩。l 第三节第三节 愈伤组织形态的发生愈伤组织形态的发生 愈伤组织培养物在某些条件下，可愈伤组织培养物在某些条件下，可以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至以再分化产生不定芽或根的分生组织甚至是胚状体，这些有结构的组织发育成苗。是胚状体，这些有结构的组织发育成苗。一一 、愈伤组织形态

3、发生的途径、愈伤组织形态发生的途径1.器官的形成器官的形成 在分化时，愈伤组织的表层和内部都可形成分生中在分化时，愈伤组织的表层和内部都可形成分生中心。芽多发生在愈伤组织的表层，属外起源。心。芽多发生在愈伤组织的表层，属外起源。 根发生在组织的深处，与整体植株发生类似，是内根发生在组织的深处，与整体植株发生类似，是内起源。起源。 l2.体细胞胚的发生l愈伤组织愈伤组织 体细胞胚体细胞胚 植株植株二、激素对愈伤组织分化的影响二、激素对愈伤组织分化的影响 植物生长调节物质在分化过程中的作用是植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官极为明显的，合适的植物生长物质配

4、比在器官分化中起着重要的作用。分化中起着重要的作用。器官分化的植物激素控制理论器官分化的植物激素控制理论 大多数植物组织或器官的再生作用符合大多数植物组织或器官的再生作用符合器官分化的植物激素控制理论。器官分化的植物激素控制理论。 生长素与细胞分裂素的比例小时则产生生长素与细胞分裂素的比例小时则产生苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适中时，则产生无结构的愈伤组织。中时，则产生无结构的愈伤组织。外植体形成愈伤组织的时期及特点。外植体形成愈伤组织的时期及特点。l从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三从外植体脱分化形成愈伤组织大致可分为三个时期：起动期个时期：

5、起动期 （诱导期）、分裂期和分（诱导期）、分裂期和分化期。化期。 1. 诱导期诱导期: 诱导期是细胞准备分裂的时期，诱导期是细胞准备分裂的时期，是愈伤组织形成起点。是愈伤组织形成起点。 特点：在诱导期，代谢活化了，细胞内特点：在诱导期，代谢活化了，细胞内合成代谢迅速进行，但是细胞合成代谢迅速进行，但是细胞的大小仍然和外植体时一样，的大小仍然和外植体时一样，没有多大改变。没有多大改变。2.分裂期分裂期：外植体中已分化的活细胞在外源激素的作用下，外植体中已分化的活细胞在外源激素的作用下，外层细胞出现了分裂，细胞的体积缩小，逐渐外层细胞出现了分裂，细胞的体积缩小，逐渐回复到分生组织状态，称为回复变化

6、。在回复回复到分生组织状态，称为回复变化。在回复变化时，细胞通过脱分化的起动期而进入分裂，变化时，细胞通过脱分化的起动期而进入分裂，并开始形成愈伤组织。并开始形成愈伤组织。特征：外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分特征：外层细胞进行分裂，而中间的细胞不分裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞裂。另外还有细胞数目增加，体积变小；细胞核和核仁增到最大等核和核仁增到最大等3.分化期分化期特点：分化结构的形成过程加速，超过了回复特点：分化结构的形成过程加速，超过了回复变化。外层细胞的分裂逐渐减慢，甚至停止，变化。外层细胞的分裂逐渐减慢，甚至停止，为次生生长所代替，大量次生结构出现。在这为次生生长所代替，大量次生结构出现。在这时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的时期中细胞的伸展和分裂处于平衡，故细胞的平均大小往往没有变化。平均大小往往没有变化。它们并不是严格的，特别是分裂期和分化期。它们并不是严格的，特别是分裂期和分化期。一块培养组织的细胞既有分裂的又有分化的。一块培养组织的细胞既有分裂的又有分化的。愈伤组织的质地愈伤组织的质地根据愈伤质根据愈伤质地划分为：地划分为：愈伤组织的质地是有明显差异的愈伤组织的质地是有明显差异的有的坚实，有的脆。脆的愈伤组织是悬浮培养生有的坚实，有的脆。脆的愈伤组织是悬浮培养生长的最合适的材料，容易使组织处于分散状态。长的最合适的材料，容易使