黄芪当归合剂防治肾脏纤维化的有效物质与分子机理研究

1、黄芪当归合剂防治肾脏纤维化的有效物质与分子机理研究项目批准号：303 3 07 1 0 项目组总人数：1 O批准金额：1 3500万元 执行期限：2004O 120071 2项目负责人：李晓玫 教 授 北京大学摘要：在以往确证黄芪当归合剂治疗肾病临床有效、并可在不同实验动物模型中防治肾小球硬化和肾间质纤维化病变的研究工作基础上，采用药物分析方法分离并提取其复方有效物质、分析其化学成分。进一步在肾小球硬化和肾间质纤维化动物模型中研究复方有效物质与黄芪当归合剂防止肾纤维化作用的异同；探讨有效物质对肾脏纤维化相关差异基因表达谱变化的影响，找出疗效相关基因，分析有效物质抗肾脏纤维化作用的关键靶点和主要

2、途径，阐明疗效相关基因的功能意义；综合分析并阐明黄芪当归复方有效物质防止肾纤维化的细胞与分子生物学机理n 各种肾脏疾病的慢性进展最终均导致肾脏纤维化病变，临床表现为慢性肾衰竭直至尿毒症，病人长期丧失劳动能力，需依靠肾脏替代治疗(血液透析、腹膜透析或肾移植)而存活。在我国，一方面，随着经济发展和生活方式的改善，大城市人群中高血压、糖尿病、动脉硬化等疾病继发肾损害的发病率不断升高，另一方面，贫困地区人群中仍然存在着感染相关或免疫介导慢性肾脏病导致的慢性肾衰竭，对医学和社会都造成了沉重负担。由于肾脏纤维化过程具有多途径、多细胞、多环节相互作用的复杂病理生理机制，其防治一直是临床难点，防治措施极为有限

3、。因此，针对肾脏病慢性进展过程寻找具有多途径、多靶点、多环节作用的防治纤维化有效治疗药物一直是国内外肾脏病学者最为关注的问题。 慢性肾脏疾病导致肾脏纤维化的过程符合中医“久病入络"的重要理论。根据中医理论研究，慢性肾脏疾病导致的肾脏纤维化病变属虚、瘀、毒互结，痹阻络脉导致经久难愈、渐成痼疾。传统中药方剂“当归补血汤”中的两味主药中：黄芪具有补气升阳、益气健脾、托毒排脓、利水消肿的功效，其不同成分分别具有提高机体免疫功能、抗氧化、稳定红细胞膜、降血压等作用；当归具有补血活血、调经止痛、润肠通便的功效，其成分具有提高机体的免疫功能、扩张血管、抑制血小板聚集、抗氧化、保护红细胞膜、抗炎等活

4、性。多年来的临床实践和研究表明，以当归补血汤为主的中药复方治疗慢性肾小球肾炎具有肯定疗效，大量临床资料显示其治疗可以明显改善慢性肾炎患者的肾功能。 项目组所在单位多年来的系列研究表明，根据传统中药“当归补血汤”制成的黄芪当归合剂对肾脏疾病的慢性进展具有全身和肾脏局部不同途径的治疗作用，包括改善肾病综合征时的蛋白及脂质代谢，以及在不同类型的慢性肾小球硬化肾间质纤维化动物模型中可减少肾脏局部的促纤维化因子表达、减少炎症细胞浸润和细胞外基质积聚等。这些研究结果提示黄芪当归合剂具有多途径、多靶点、多环节作用的特点，有可能成为抗肾脏纤维化有效药物。根据以往的研究推测，黄芪当归合剂有可能通过影响一组肾脏纤

5、维化相关基因而引起多种细胞的功能或代谢变化，最终产生其多靶点、多环节、多途径治疗作用。由于复方中药是一个有层次和结构的有机整体，其化学成分不是单味荮群贳分的筒学椭，因此其疗效逦常是复方中各成分的综合效果。目前，黄芪当归合剂防治肾脏纤维化病变的药效物质基础尚未明确。 本项目将以药理疗效为指导，采用现代药学手段对黄芪当归合剂进行追踪式分离，在发现黄芪当归合剂中与疗效相关的有效部位(分子群)或有效成分、并对其进行分析、鉴定和作用机理研究的基础上，拟研究黄芪当归合剂及其有效组分抗肾脏纤维化的疗效及其基因表达谱改变之间的关系，结合相关的生物学研究，试图阐明黄芪当归合剂对肾脏纤维化治疗作用的复方药效物质基

6、础和疗效的关键靶点以及主要病理生理环节。拟开展的主要研究内容为： 1寻找并确定黄芪当归合剂的有效物质，即有效组分或有效成分(群)。 应用肾小球硬化或肾间质纤维化模型，采用药理活性追踪分离方法获得A&A不同组分，观察其抗纤维化病变的异同，最终确定A&A抗纤维化作用有效成分群或单体化合物；同时采集动物A&A含药血清，从中分离鉴定化学成分，分别观察其治疗作用特点。 2在肾纤维化动物模型中寻找并确定黄芪当归合剂有效成分(群)的疗效相关基因群。 在对照组、模型组和A&A治疗组中，用基因芯片方法分析不同组间肾组织基因表达谱的变化，筛选出与肾脏纤维化相关的差异表达基因；应用RT-PC R或Northern方法验证上调或下调基因(群)，确定A&A有效组分的疗效相关基因；综合分析疗效相关已知基因作用的主要途径；对疗效相关未知基因进行生物信息学分析。 3在体内、体外实验中探讨并阐明A&A疗效相关基因群的作用及其功能意义。 选择特定肾脏细胞验证疗效相关已知基因在细胞增殖凋亡、细胞外基质合成降解失衡中的