细菌噬菌体应该如何检测

1、细菌噬菌体应该如何检测噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒，其个体形态极为微小，用常规微生物”数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引发灵敏细菌裂解，释放出大量子代噬菌体，然后它们再扩散和侵染周围细胞，最终使含有灵敏菌的悬液由混浊慢慢变清，或在含有灵敏细菌的平板上显现肉眼可见的空斑一噬菌斑。了解噬菌体的特性，快速检查、分离，并进行效价测定，对在生产和科研工作中避免噬菌体的污染具有重要作用。检样能够是发酵液、空气、污水、土壤等（至于无法采样而需检查的对象，能够用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品）。为了易于分离可先经增殖培育，使样品中的噬菌体数量增加。采纳微生物测定法进行

2、噬菌体检测，约需12h左右，因此不能及时判定是不是有噬菌体污染。通过快速检测可大致确信是不是有噬菌体污染，以采取必要的防治方法。根据正常发酵（培育）液离心后菌体沉淀，上清液蛋白含量很少，加热后仍然清光;而侵染有噬菌体的发酵（培育）液经离心后其上清液中因含有自裂解菌中逸出的活性蛋白，加热后发生蛋白质变性，因此在光线照射下显现丁达尔效应而不清克。此法简单、快速，对发酵液污染噬菌体的判定亦较准确。但不适于溶源性细菌及温合噬菌体的诊断，对侵染噬菌体较少的一级种子培育液也往往不适用。噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数。效价的测定一样采纳双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，

3、一样一个噬菌体产生一个噬菌斑，故可依照必然体积的噬菌体培育液所显现的噬菌斑数，计算出噬菌体的效价。此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致，且清楚度高，故计数比较准确，因此被普遍应用。检测材料1 .菌种灵敏指示菌（大肠杆菌）、大肠杆菌噬菌体（从阴沟或粪池污水中分离）2 .培育基两倍肉膏蛋白陈培育液，上层肉膏蛋白陈半固体琼脂培育基（含琼脂乐试管分装，每管血），基层肉膏蛋白陈固体琼脂培育基（含琼脂2%）,1%蛋白陈水培育基。3 .仪器耗材无菌的试管、培育皿、三角瓶、移液管（一、5mL）,恒温水浴锅，离心机、721分光光度计等。噬菌体检测方式1 .噬菌体的检测样品搜集将23g土样或5mL水样（如阴沟污水

4、）放入灭菌三角瓶中，加入对数生长期的灵敏指示菌（大肠杆菌）菌液35mL,再加20mL二倍肉汤蛋白陈培育液。增殖培育30c振荡培育1218h,使噬菌体增殖。离心分离将上述培育液以3000rpn）离心1520min,取上清液，用，1%蛋白陈水稀释至10-210-3,用于噬菌体检查及效价测定。生物测定法双层琼脂平板法倒基层琼脂，融化基层培育基，倒平板（约10mL/皿）待用。倒上层琼脂融化上层培育基，待融化的上层培育基冷却至50c左右时，每管中加入灵敏指示菌(大肠杆菌)菌液，待检样品液或上述噬菌体增殖液，混合后当即倒入上层平板摊平。恒温培育：30c恒温培育612h观看结果。观看结果：如有噬菌体，那么在

5、双层培育基的上层显现透亮无菌圆形空斑噬菌斑。单层琼脂平板法省略基层培育基，将上层培育基的琼脂量增加至2%,融化后冷却至45c左右,犹如上法加入指示菌和检样，混合后迅速倒平板。30c恒温培育616h后观看结果。离心分离加热法(快速检查)取大肠杆菌正常培育液和侵染有噬菌体的异样大肠杆菌培育液，4000rpm离心20min,别离取两组发酵液的上清液(Al),一部份于721分光光度计上测定0D650光密度值，另外各取5mL上清液于试管中，置水浴中煮沸2min(A2),检测A2溶液0D650光密度值，记录结果。2 .噬菌体效价的测定倒平板将融化后冷却到45c左右的基层肉膏蛋白陈固体培育基倾倒于11个无菌

6、培育皿中，每如约倾注10mL培育基，平放，待冷凝后在培育皿底部注明噬菌体稀释度。稀释噬菌体按10倍稀释法，吸取大肠杆菌噬菌体，注入一支装有蛋白陈水的试管中，即稀释到10-1,依次稀释到10-6稀释度。3 .噬菌体与菌液混合将11支灭菌空试管别离标记10-4、10-五、10-6和对照。别离从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取于上述编号的无菌试管中，每一个稀释度平行做三个管，在另外两支对照管中加无菌水，并别离于各管中加入大肠杆菌菌悬液，振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀，置37水浴中保温5min,让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。4 .接种上层平板将11支融化并保温于45c的上层肉膏蛋白陈半固体琼脂5mL别离加入到含有噬菌体和灵敏菌液的混合管中，迅速搓匀，当即倒入相应编号的底层培育基平板表面，边倒入