(完整版)Agilent1260液相色谱系统操作规程

1、1目的标准Agilent1260系列高效液相色谱的日常使用和维护保养,保证仪器的正常运转,保证检测工作的顺利进行.2适用范围适用于Agilent1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护.3责任实验室分析人员负责Agilent1260系列高效液相色谱系统的日常使用和维护.4系统组成4.1 Agilent1260系列四元泵G1311c刖脱气机；4.2 可变波长紫外检测器VWDG1314F;4.3 ChemstationA.01.04色谱工作站4.4 国产柱温箱AT-550色谱柱；4.5 电脑、打印机等辅助设备.5定义无6操作程序6.1 开机前的准备6.1.1 检查仪器校验标识,确认仪器处于校验

2、周期内.6.1.2 检查上次?实验室仪器设备使用记录表?和仪器状态,确认仪器处于正常状态；6.1.3 流动相的制备：6.1.3.1 按?高效液相色谱法流动相配制标准操作规程?配制需要的流动相.6.1.3.2 用前超声脱气一般1020min.6.1.4 更换流动相：6.1.4.1 将泵的吸滤器从旧流动相中取出,用新流动相冲洗后放入新流动相的储液瓶中,并盖好瓶盖；6.1.4.2 将排液管的出口端放入废液瓶中,并盖好瓶盖.6.1.5 供试溶液的配制：6.1.5.1 供试品用规定溶剂配制成供试品溶液.6.1.5.2 定量测定时,对照品溶液和供试品溶液均应分别配制2份.6.1.5.3 如有必要,样品需预

3、处理,如过滤等,以免对色谱系统产生污染和色谱干扰.6.1.6 选择色谱柱：6.1.6.1 根据待检供试品的检测方法确定所需的色谱柱；6.1.6.2 检查仪器上安装的色谱柱是否与其相同,假设不同那么需进行更换.6.1.7 更换色谱柱6.1.7.1 拆卸原色谱柱：先握住色谱柱,再松动色谱柱出口端螺帽,取下出口端的管线；松动色谱柱入口端螺帽,取下入口端的管线；用止动塞将色谱柱的进出口塞住拧紧后,将色谱柱放回原专用包装盒内6.1.7.2 安装新色谱柱：从专用包装盒内取出色谱柱,松动并取下色谱柱出入口的止动塞；将与进样器相连的管线一端插入色谱柱入口端,拧紧螺帽；注意:安装时色谱柱上的流向标志应与管路的流

4、动相流向一致.将与检测器相连的管线一端插入色谱柱出口端,拧紧螺帽.6.2 开机6.2.1 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常,6.2.2 接通电源,翻开计算机和打印机开关Windows桌面图标进入化学工作站画面6.2.3 等待计算机自检完毕后,进入Windows桌面,依次翻开泵、进样器、检测器各模块电源.翻开柱温箱开关.6.2.4 待各模块自检完成后,点击6.2.5 确定仪器与工作站已连接,假设未连接,需关闭工作站,重新连接.注意必须先翻开检测器,再连接工作站.6.2.6 从“视图菜单中选择“方法和运行限制画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行限制项,进入方法和

5、运行限制窗口.6.3 操作6.3.1 泵的开启和设置6.3.1.1 翻开Purge阀逆时针,右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法选项,进入泵编辑画面.6.3.1.2 设流速：0ml/min,点击“确定.右键点击四元泵下面的空白处,选择“限制选项,选中“启动,点击“确定,泵开始启动.6.3.1.3 待泵启动完毕,泵的图标变绿色后,右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法选项,进入泵编辑画面.设“流量逐步增大流速至5ml/min,A通道设到100%单击“确定.那么系统开始冲洗,直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止一般需要5min左右.6.3.1.4 注

6、意：为保护泵,不宜直接设置过高流速或直接将高流速降为低流速,宜缓慢梯度提升或降低流速；6.3.1.5 看柱前压力,假设大于10Bar,那么应更换排气阀内滤芯/过滤白头.6.3.1.6 右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法选项,进入泵编辑画面,将流速设为0ml/min,点击“确定,关闭Purge阀顺时针.6.3.1.7 右键点击四元泵下面的空白处,选择“方法选项,进入泵编辑画面,设置使用的流动相比例和流速或选择已有方法开始系统平衡.6.3.1.8 点击四元泵下面的瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积.也可输入停泵的体积,点击“确定.6.3.2 方法编辑假设已创立方法,可在“方法菜单项选择择“调用

7、方法,选择相应的方法.假设无,需按下面步骤建立：6.3.2.1 从“方法菜单中选择“编辑完整方法,钩选“方法信息、“仪器/采集、“运行时选项表三项,点击确定；6.3.2.2 出现“方法信息对话框,如有需要可将方法的描述信息输入,也可选择不输入任何信息,点击确定；6.3.2.3 泵参数设定在“流量处输入流量,如1ml/min,在“溶剂B处输入80QA=100-B-C-D,也可“插入一行“时间表,编辑梯度.在“压力限处输入柱子的最大耐高压,如300bar,以保护柱子.点击“确定进入下一参数设定.6.3.2.4 柱温箱参数设定在柱温箱上手动输入规定的温度即可.6.3.2.5 紫外检测器VWDG131

8、4F参数设定在“波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽响应时间下方点击下拉式箭头,选择适宜的响应时间,如0.1min2s.在“时间表中可以“插入一行,输入随时间切换的波长,如1min,波长=300nm点击“确定,进入下一参数设定6.3.2.6 在“运行时选项表中选中“数据采集,点击“确定6.3.2.7 完整方法编辑完毕.点击“方法菜单,选中“方法另存为,输入一方法名称,点6.3.3 运行样品6.3.3.1 从菜单“视图中选中“在线信号,选中“信号窗口1,然后点击“改变钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定6.3.3.2 从“运行限制菜单中选择“样品信息选项,输入操作

9、者名称；在“数据文件中选择“手动或“前缀/计数器.区别：手动-每次做样之前必须给出新名字,否那么仪器会将上次的数据覆盖掉.Pr在前缀/计数器-“前缀框中输入前缀,在“计数器框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据00026.3.3.3 点击“确定,从“仪器菜单项选择择“系统开启6.3.3.4 手动进样6.3.4数据处理双击电脑桌面的图标,进入脱机工作站,从“视图菜单中选择“数据分析,或点击屏幕左下方的“数据分析,进行数据处理6.3.4.1 调用需要处理的数据：从“文件菜单中选择“调用信号,或者点击屏幕左上方的图,跳出一个对话框,选择相应文件夹里的数据文件名称,单

10、击“确定即可.6.3.4.2 调用方法：从“方法菜单里选择“调用方法,或者点击屏幕左上方的图标“跳出一个对话框,选择相应的方法名称,单击“确定即可6.3.4.3 积分:6.3.4.3.1 从“积分菜单中选择“积分,当前数据被积分.假设积分不是很理想,那么从“积分菜单中选择“积分事件,选择适宜的“斜率灵敏度、“最小峰面积、“最小峰高等.6.3.432从“积分菜单中选择“积分,那么当前数据被重新积分.6.3.4.3.3 如积分不理想,那么重复6.3.4.3.1和6.3.4.3.2,直到满意为止,此时点击图标进行积分参数的保存并退出积分参数设定界面6.3.4.3.4 如果局部谱峰自动积分不是很理想,

11、也可选择手动积分.点击图标“*过,爷制峰基线并积分；点击图标“"",切线撇去一个峰并积分适合拖曼峰的处理；点击图标“三二,手动分裂已积分的峰适合未基线别离的峰的处理；点击“三三,删除已积分的峰；点击图标“型土,将当前手动积分事件保存到数据文件中.其他数据处理方式详见工作站说明书.6.3.5打印报告6.3.5.1 翻开打印机电源开关,从“报告菜单中选择“设定报告,或点击屏幕中间的图标“一匕跳出一对话框,选择相应的定量方法和报告格式,单击确定后退出.6.3.5.2 从“报告菜单中选择“打印报告,或点击屏幕中间的图标“二,那么可预览到报告.假设报告中显示的时间范围及响应范围不适宜

12、,那么可点击“关闭退出预览.进入“报告版面设计界面,选择相应的报告格式,双击图谱,点“自定义量程,输入适宜的时间范围和响应范围,并选择“全部使用相同量程,点击“确定并保存当前模版后退出,再重新进入“数据分析界面,重新预览报告,假设时间范围和响应范围均适宜,单击“打印报告,即可.6.4宏命令的使用6.4.1 在“视图下拉单中调出“化学工作站工作日程表；6.4.2 输入日期时间、命令并选好执行命令的模式,点击保存图标；6.4.3 各宏命令代表意思及输入方法：开泵：pumpallon关泵：pumpalloff开灯：lampallon关灯：lampalloff载入一个方法：loadmethodxxx.

13、M开始一个方法：startmethodxxx.M停止一个方法：stopmethodxxx.M关闭整个系统：standby.6.5.4考前须知：日程表编辑完毕后,一定要保存,并且不能关闭；宏命令不区分大小写.6.6 关机6.6.1 样品测试完毕后,关机前,先关灯,用相应的溶剂充分冲洗系统.5叱月青/甲醇-水冲洗大约20min;假设使用了无机盐流动体系,那么冲洗约30-60min.50叱月青/甲醇-水冲洗大约20min;80叱月青/甲醇-水冲洗大约20min.6.6.2 退出化学工作站,依次提示关泵及其它窗口,关闭计算机.关闭Agilent1260各模块电源开关.6.6.3 做好仪器使用登记,并填

14、写?实验室仪器设备使用记录表?6.7 系统日常维护和保养6.7.1 色谱柱使用前仔细阅读色谱柱的说明书,注意适用范围,如pH值范围、压力范围、温度范围、流动相类型等.6.7.2 流动相：5叱月青/甲醇-水应用棕色玻璃瓶存放,预防光照,预防长菌.6.7.3 试样配制尽量用流动相配制试样.必要时使用超声波处理试样,保证试样完全溶解并混合均匀.假设试样中有肉眼可见的机械杂质,那么必须用针头过滤器对试样进行过滤根据试样的性质选择有机相或水相针头过滤器.对含有颗粒的固体样品,经研磨均匀前方可取样.手动进样针：取样前应用试样润洗3次以上,使用后应用甲醇/乙月青清洗3次以上.废液处理：及时清理废液瓶,以防废

15、液溢出.6.8 仪器平安保证6.8.1 每天使用仪器之前,要翻开Purge阀将各个通道冲洗45min左右；6.8.2 及时更换PurgeValve内的过滤芯当翻开PurgeValve,流速为5ml/min压力高于10bar时.Purge阀在关闭状态时,不宜过紧.6.8.3 当仪器使用缓冲溶液作业时,要用水进行过渡并将柱塞杆清洗开关翻开.6.8.4 仪器暂停两天以上不使用包括两天,过滤板最好选用甲醇浸泡.6.8.5 预防使用不相溶的溶剂作流动相,预防水和缓冲液、酸、碱和含氯溶液在泵内长时间的停留.6.8.6 每次使用前后,应检查泵头、并清洗除去污染物或析出的固体盐.6.8.7 预防在泵压过高的状

16、态下长时间工作,如果流速较大且压力较高,关闭泵以前需将流速逐渐降低以预防压力波动过大,损坏色谱柱.6.8.8 无压力显示或压力波动较大时,不能进行分析,应检查排气阀是否关闭,泵中气泡是否已排除,排除故障前方能进行操作.如压力升高,甚至自动停泵,应检查柱端有无污染、堵塞.6.8.9 每次使用、维护完毕后,应当详细填写使用记录,包括柱子类型,遇到的问题、维护方法等.对实验中仪器的出错,应当详细填写具体的发生情况以及处理方法.未能处理的,应向他人求证,并对下位使用者提出问题所在.每次使用仪器之前,应当查看使用记录,确定有没有尚未解决的仪器故障.6.8.10 仪器的移动,安装,更新或升级应当由仪器负责