基因操作的工具酶学习教案

1、会计学1基因操作基因操作(cozu)的工具酶的工具酶第一页，共79页。第1页/共78页第二页，共79页。第2页/共78页第三页，共79页。 第3页/共78页第四页，共79页。第4页/共78页第五页，共79页。第5页/共78页第六页，共79页。第6页/共78页第七页，共79页。第7页/共78页第八页，共79页。第8页/共78页第九页，共79页。第9页/共78页第十页，共79页。第10页/共78页第十一页，共79页。第11页/共78页第十二页，共79页。 因为(yn wi)几乎所有的限制性内切核酸酶都要和能识别而且甲基化相同DNA位点的甲基化酶共同作用这两个酶：限制性内切核酸酶和甲基化酶一起称为限

2、制修饰系统。 宿主细胞中甲基化的DNA位点被保护起来，不会被限制性核酸内切酶消化第12页/共78页第十三页，共79页。第13页/共78页第十四页，共79页。 根据结构和功能的特异性，即其识别(shbi)和切割序列的特性、催化条件及修饰活性等，可将已发现的内切核酸酶分为三类：即I型、II型、III型酶 I型和III型酶在同一蛋白酶分子中兼有甲基化酶及限制性内切核酸酶活性，又因其识别(shbi)位点与切割位点不固定，所以价值不大II型酶切割DNA片断活性和甲基化作用是分开的，且核酸内切作用又具有序列特异性，在基因克隆中广泛使用通常所用的限制性内切核酸酶是指II型的 第14页/共78页第十五页，共7

3、9页。第15页/共78页第十六页，共79页。第16页/共78页第十七页，共79页。第17页/共78页第十八页，共79页。 名 属 种 株 序 来源(liyun) 称 名 名 名 号 菌株EcoR E co R Escherichia coli R Hind H in d Haemophilus influenzae d Hind H in d Haemophilus influenzae d Hpa H pa / Haemophilus parainfluenzae a 第18页/共78页第十九页，共79页。酶失活，商品酶均含有50甘油，使用时添加相应(xingyng)的缓冲液稀释，降低反应液

4、中甘油的浓度第19页/共78页第二十页，共79页。第20页/共78页第二十一页，共79页。第21页/共78页第二十二页，共79页。 不同酶识别的碱基数目(shm)也不同，一般为4、5或6个碱基对识别序列碱基对越多，则这种酶在DNA上出现的频率越低不同生物其碱基含量不同，酶识别位点的分布及频率也不同第22页/共78页第二十三页，共79页。第23页/共78页第二十四页，共79页。第24页/共78页第二十五页，共79页。 第25页/共78页第二十六页，共79页。5-CCC GGG-33-GGG CCC-5第26页/共78页第二十七页，共79页。第27页/共78页第二十八页，共79页。第28页/共78

5、页第二十九页，共79页。第29页/共78页第三十页，共79页。 第30页/共78页第三十一页，共79页。第31页/共78页第三十二页，共79页。第32页/共78页第三十三页，共79页。第33页/共78页第三十四页，共79页。(y ngxi ng)度和完全程度酶切的底物一般为双链DNA，DNA的甲基化位置会影响(yngxing)酶切反应第34页/共78页第三十五页，共79页。第35页/共78页第三十六页，共79页。第36页/共78页第三十七页，共79页。第37页/共78页第三十八页，共79页。第38页/共78页第三十九页，共79页。第39页/共78页第四十页，共79页。第40页/共78页第四十一

6、页，共79页。第41页/共78页第四十二页，共79页。二者都能连接平末端和黏性末端T4 DNA连接酶应用更广泛一些第42页/共78页第四十三页，共79页。第43页/共78页第四十四页，共79页。第44页/共78页第四十五页，共79页。第45页/共78页第四十六页，共79页。第46页/共78页第四十七页，共79页。第47页/共78页第四十八页，共79页。第48页/共78页第四十九页，共79页。第49页/共78页第五十页，共79页。第50页/共78页第五十一页，共79页。第51页/共78页第五十二页，共79页。第52页/共78页第五十三页，共79页。第53页/共78页第五十四页，共79页。第54页

7、/共78页第五十五页，共79页。第55页/共78页第五十六页，共79页。第56页/共78页第五十七页，共79页。第57页/共78页第五十八页，共79页。第58页/共78页第五十九页，共79页。DNA序列分析3-端的末端标记(bioj)随机引物标记(bioj)核酸探针第59页/共78页第六十页，共79页。第60页/共78页第六十一页，共79页。第61页/共78页第六十二页，共79页。第62页/共78页第六十三页，共79页。第63页/共78页第六十四页，共79页。第64页/共78页第六十五页，共79页。第65页/共78页第六十六页，共79页。第66页/共78页第六十七页，共79页。第67页/共78

8、页第六十八页，共79页。第68页/共78页第六十九页，共79页。第69页/共78页第七十页，共79页。第70页/共78页第七十一页，共79页。第71页/共78页第七十二页，共79页。第72页/共78页第七十三页，共79页。第73页/共78页第七十四页，共79页。第74页/共78页第七十五页，共79页。细胞的限制一修饰系统中的修饰作用是由甲基化酶（methylase）来完成的。甲基化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序真核生物中目前只发现5甲基胞嘧啶(M5C) 第75页/共78页第七十六页，共79页。第76页/共78页第七十七页，共79页。第77页/共78页第七十八页，共79页。NoImage内容(nirng)总结会计学。这种现象称为“限制(xinzh)现象”。宿主细胞中甲基化的DNA位点被保护起来，不会被限制(xinzh)性核酸内切酶消化。第二、三字母小写，来源细菌种名的头2个字母。“