化学物质与酶的相互作用

1、第七章第七章化学物质与酶的相互作用化学物质与酶的相互作用自然界中发现的酶已达自然界中发现的酶已达30003000多种，而且这个数多种，而且这个数目随着基因工程和蛋白质工程方面研究的发展目随着基因工程和蛋白质工程方面研究的发展而大大增加。而大大增加。酶可以直接作为药物用于医药工业，如溶菌酶酶可以直接作为药物用于医药工业，如溶菌酶可治疗各类炎症，如咽喉炎、口腔溃疡、慢性可治疗各类炎症，如咽喉炎、口腔溃疡、慢性鼻炎、带状疤疹及各种刀伤引起的发炎等，天鼻炎、带状疤疹及各种刀伤引起的发炎等，天冬酞胺酶治疗癌症，治疗血栓的尿激酶等。冬酞胺酶治疗癌症，治疗血栓的尿激酶等。酶也广泛应用于食品工业、化学工业、医

2、药工酶也广泛应用于食品工业、化学工业、医药工业、环保工业等，在临床检验、生物分析等领业、环保工业等，在临床检验、生物分析等领域也广泛使用。域也广泛使用。另外，每种酶都有一定的抑制剂，这类抑制剂另外，每种酶都有一定的抑制剂，这类抑制剂可以参与生物代谢过程的化学调控，因此有些可以参与生物代谢过程的化学调控，因此有些酶抑制剂可能属于毒物，而有些抑制剂可以作酶抑制剂可能属于毒物，而有些抑制剂可以作为药物使用。为药物使用。酶抑制剂作为新药寻找与开发，在近一、二十酶抑制剂作为新药寻找与开发，在近一、二十年来分子生物学发展的基础上得以实用化。年来分子生物学发展的基础上得以实用化。化学物质（无机物质、有机物质

3、和高分子物质）化学物质（无机物质、有机物质和高分子物质）与酶的相互作用包括化学物质对酶的激活作用、与酶的相互作用包括化学物质对酶的激活作用、抑制作用、改性作用和酶对化学物质的催化作抑制作用、改性作用和酶对化学物质的催化作用等。用等。第一节第一节 化学物质对酶的抑制作用化学物质对酶的抑制作用凡能降低酶促反应速度的作用，称为酶的抑制作用。凡能降低酶促反应速度的作用，称为酶的抑制作用。能使酶活性受抑制的物质，称为酶的抑制剂。近年能使酶活性受抑制的物质，称为酶的抑制剂。近年来对酶抑制作用的研究进展迅速。来对酶抑制作用的研究进展迅速。由于通过酶抑制作用的研究，不仅对了解酶的专由于通过酶抑制作用的研究，不

4、仅对了解酶的专性，酶活性部位的物理和化学结构，酶的动力学性性，酶活性部位的物理和化学结构，酶的动力学性质以及酶的作用机制等；而且对了解药物和毒物作质以及酶的作用机制等；而且对了解药物和毒物作用于机体的方式及机理等也有重要意义；对代谢途用于机体的方式及机理等也有重要意义；对代谢途径中酶的调节也能提供信息。径中酶的调节也能提供信息。抑制剂之所以能抑制酶促反应，主要是由于它们能抑制剂之所以能抑制酶促反应，主要是由于它们能使酶的必需基因或活性部位的性质和结构发生改变，使酶的必需基因或活性部位的性质和结构发生改变，从而导致酶活性降低或丧失。从而导致酶活性降低或丧失。按抑制剂作用的方式不同，酶的抑制作用可

5、分为可按抑制剂作用的方式不同，酶的抑制作用可分为可逆和不可逆两种类型。逆和不可逆两种类型。 一、可逆抑制作用一、可逆抑制作用按可逆抑制剂对酶按可逆抑制剂对酶底结合的影响不同，可分底结合的影响不同，可分为许多类型，它们的反应历程可用一通式表示为许多类型，它们的反应历程可用一通式表示： E + S KsESkpE + P+ +IIEIEISSKiKiKs速度方程通式速度方程通式根据此反应历程根据此反应历程, ,根据快速平衡学说或恒态学说根据快速平衡学说或恒态学说推导，得到其总速度方程通式如下推导，得到其总速度方程通式如下在不同的抑制作用中，仅在于在不同的抑制作用中，仅在于K Ki i和和K Ki

6、i两个数值两个数值的不同的不同，一般可分为，一般可分为4 4种类型：即竞争性抑制、非种类型：即竞争性抑制、非竞争性抑制、反竞争性抑制和混合性抑制。竞争性抑制、反竞争性抑制和混合性抑制。 max (1) (1)VSvIIKsSKiKimax (1) (1)VSvIIKmSKiKi将该方程作双倒数处理，可得将该方程作双倒数处理，可得1 11 (1)(1)max maxkmIIvVKiSVKi1 1，竞争性抑制作用，竞争性抑制作用竞争性抑制作用中竞争性抑制作用中I I只与自由酶结合，因而阻止只与自由酶结合，因而阻止S S与酶结合。而与酶结合。而S S又不能与又不能与EIEI结合，结合，I I也不能与

7、也不能与ESES结合，所以结合，所以EISEIS不存在；不存在；EIEI亦不能分解成产物。亦不能分解成产物。 个竞争性抑制剂只增加酶个竞争性抑制剂只增加酶底结合的表现底结合的表现Km(KmappKm(Kmapp) )，即，即I I浓度增加，浓度增加，KmappKmapp就增加；而就增加；而VmaxVmax则保持不变。在竞争性抑制剂存在下则保持不变。在竞争性抑制剂存在下, , 要达要达到最大反应速度到最大反应速度VmaxVmax，必须加入更高的底物浓度。，必须加入更高的底物浓度。如如SS100Km100Km时，时，VmaxiVmaxi可达可达VmaxVmax。竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度，决

8、定于竞争性抑制剂对酶促反应的抑制程度，决定于II，SS，K Km m和和K Ki i的大小。的大小。II一定，增加一定，增加S, S, 减少抑制程度；减少抑制程度；SS一定，增加一定，增加II，增加抑制程，增加抑制程度，度，K Ki i值较低时，任何给定值较低时，任何给定II和和SS，抑制程度，抑制程度都较大；都较大；K Km m值越低，在一定值越低，在一定SS、II下，抑制程下，抑制程度越小。度越小。 竞争性抑制作用的双倒数图竞争性抑制作用的双倒数图 11 1(1)max maxKmIvVSKiV竞争性抑制作用竞争性抑制作用KiKi的求解的求解 从双倒数图计算出表观米氏常数从双倒数图计算出表

9、观米氏常数K Kmappmapp，然，然后代入后代入K Kmappmapp= =K Km(1+I/m(1+I/K Ki)i)可计算出可计算出KiKi。从双倒数图求得各从双倒数图求得各I I浓度下的浓度下的K Kmappmapp值对相应值对相应II再作图，从再制图的纵截距可直接测得再作图，从再制图的纵截距可直接测得K Km m，从其横截距可直接测得从其横截距可直接测得K Ki i。从不同固定从不同固定II下所作一簇直线的斜率下所作一簇直线的斜率1/S1/S对对相应相应II再制图，其纵截距为再制图，其纵截距为K Km/Vmaxm/Vmax, , 斜率为斜率为Km/VmaxKiKm/VmaxKi，横

10、截距即为，横截距即为- -K Ki i。 DixonDixon作图法求作图法求K Ki i 11 (1)max max KmKmIvVKi SVS竞争性抑制剂的竞争性抑制剂的ICIC5050值值 取决于实验所用的酶和底物浓度，当酶取决于实验所用的酶和底物浓度，当酶的浓度固定时，的浓度固定时，ICIC5050值与值与K Ki i、K Km m和底物浓和底物浓度度SS呈如下关系：呈如下关系：根据该方程式，当底物浓度大于根据该方程式，当底物浓度大于K Km m值时，值时，ICIC5050值高于值高于K Ki i值，尤其当底物浓度较高时，值，尤其当底物浓度较高时，K Ki i值偏低更加明显。值偏低更加

11、明显。 50 (1)SICKiKm竞争性抑制剂的结构特征竞争性抑制剂的结构特征 底物类似物底物类似物由于人们对一个酶所催化的底物性质了由于人们对一个酶所催化的底物性质了解的比较多，因此，常常利用酶的底物解的比较多，因此，常常利用酶的底物类似物作为竞争性抑制剂研究一些三维类似物作为竞争性抑制剂研究一些三维结构不清楚的酶活性中心的结构。另外，结构不清楚的酶活性中心的结构。另外，也可以根据底物的结构特点设计一些临也可以根据底物的结构特点设计一些临床上使用的药物。床上使用的药物。 例如，例如， - -葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖葡糖苷酶抑制剂如阿卡波糖(acarbose(acarbose) )、伏格列波糖

12、（伏格列波糖（voglibosevoglibose）和米格列醇（）和米格列醇（MiglitolMiglitol）黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤，进黄嘌呤氧化酶催化次黄嘌呤氧化成黄嘌呤，进而被氧化成尿酸，黄嘌呤氧化酶抑制剂而被氧化成尿酸，黄嘌呤氧化酶抑制剂- -别嘌别嘌呤醇治疗痛风病就是通过抑制黄嘌呤氧化酶，呤醇治疗痛风病就是通过抑制黄嘌呤氧化酶，降低尿酸的生物合成。降低尿酸的生物合成。 过渡态类似物过渡态类似物酶催化化学反应效率高的原因在于酶能与高能酶催化化学反应效率高的原因在于酶能与高能态的过渡态相结合，从而大大降低了化学反应态的过渡态相结合，从而大大降低了化学反应的活化能。的活化能。

13、如果对催化某一特定生物化学反应的酶的三维如果对催化某一特定生物化学反应的酶的三维结构尚不清楚，可以根据其生化反应的过程，结构尚不清楚，可以根据其生化反应的过程，设计合成具有特定结构、疏水性匹配、电子和设计合成具有特定结构、疏水性匹配、电子和空间因素与过渡态类似的稳定化合物，作为该空间因素与过渡态类似的稳定化合物，作为该酶特异的抑制剂，这无疑为药物合理分子设计酶特异的抑制剂，这无疑为药物合理分子设计提供了另一强有力的手段。提供了另一强有力的手段。 例如，乙酰胆碱酯酶例如，乙酰胆碱酯酶(AChE(AChE) )的羟基与酯酶的酯解的羟基与酯酶的酯解部位形成共价键，其四价氮上的强正电荷与酯酶部位形成共

14、价键，其四价氮上的强正电荷与酯酶的阴离子部位呈静电联接。酶的乙酰化很快导致的阴离子部位呈静电联接。酶的乙酰化很快导致酯键断裂和胆碱的消除，乙酰化酶随即与水反应酯键断裂和胆碱的消除，乙酰化酶随即与水反应而使酶再生并放出乙酸。而使酶再生并放出乙酸。氨基甲酸酯杀虫剂是乙酰胆碱酯酶水解过渡态的氨基甲酸酯杀虫剂是乙酰胆碱酯酶水解过渡态的稳定类似物，能与乙酰胆碱酯酶结合部位紧密结稳定类似物，能与乙酰胆碱酯酶结合部位紧密结合而抑制乙酰胆碱酯酶。合而抑制乙酰胆碱酯酶。 R3OCONR2R1氨基甲酸酯的基本结构NNCH3OCONCH3H毒扁豆碱OCONCH3CH3N+H3CH3CH3C新斯的明又如苯甲酰丙氨醛是

15、胰凝乳蛋白酶的过渡又如苯甲酰丙氨醛是胰凝乳蛋白酶的过渡态抑制剂，其结构类似底物苯甲酰苯丙氨态抑制剂，其结构类似底物苯甲酰苯丙氨酰化合物与酶形成的共价中间物中的底物酰化合物与酶形成的共价中间物中的底物酰基部分，比底物中的肽键羰基更易受到酰基部分，比底物中的肽键羰基更易受到酶活性中心羟基的亲核进攻，但不能形成酶活性中心羟基的亲核进攻，但不能形成酰化酶共价中间物。酰化酶共价中间物。 其它化合物其它化合物 有些化合物的平面结构与有些化合物的平面结构与底物并不相似，但立体构底物并不相似，但立体构象十分相近，也可以成为象十分相近，也可以成为竞争性抑制剂。竞争性抑制剂。非甾体抗炎药是一类具有非甾体抗炎药是一

16、类具有不同结构类型的化合物，不同结构类型的化合物，由于选择性地抑制环氧合由于选择性地抑制环氧合酶的活性，用作抗炎止痛酶的活性，用作抗炎止痛药。环氧合酶抑制剂消炎药。环氧合酶抑制剂消炎痛和底物花生四烯酸的三痛和底物花生四烯酸的三维结构，整个分子的立体维结构，整个分子的立体构象中，羧基和双键的配构象中，羧基和双键的配置有某种相似性，因而竞置有某种相似性，因而竞争性地与环氧合酶结合。争性地与环氧合酶结合。塞来克西塞来克西(Celebrex(Celebrex) )作为环氧合酶（作为环氧合酶（COX2COX2，炎症细胞产生的酶）的特异性抑制剂，难炎症细胞产生的酶）的特异性抑制剂，难以进入开口较小的以进入

17、开口较小的COX1COX1活性中心的通道，活性中心的通道，故而不能对其产生抑制作用，但仍能进入故而不能对其产生抑制作用，但仍能进入口径稍大，后段略有柔性的口径稍大，后段略有柔性的COX2COX2通道，而通道，而能对能对COX2COX2产生抑制作用。产生抑制作用。某些竞争性抑制剂的化学结构与底物的结构没有某些竞争性抑制剂的化学结构与底物的结构没有任何关系，其抑制作用的原理是抑制剂与一些酶任何关系，其抑制作用的原理是抑制剂与一些酶活性中心的金属离子络合，妨碍了底物的进入，活性中心的金属离子络合，妨碍了底物的进入，从而起到抑制酶活性的目的。从而起到抑制酶活性的目的。例如例如5-5-脂氧合酶脂氧合酶(

18、LOX)(LOX)的活性中心含有一个非血红的活性中心含有一个非血红素铁原子，通过素铁原子，通过FeFe2+2+与与FeFe3+3+的循环实现其催化功能。的循环实现其催化功能。该酶的某些抑制剂（该酶的某些抑制剂（CGS-23885,A-76745CGS-23885,A-76745）就是通）就是通过铁的螯合而与底物竞争性地与酶活性中心结合。过铁的螯合而与底物竞争性地与酶活性中心结合。 2 2，非竞争性抑制作用，非竞争性抑制作用 典型的非竞争性抑典型的非竞争性抑制剂不影响酶制剂不影响酶- -底底物结合；底物也不物结合；底物也不影响酶影响酶-I-I的结合；的结合；S S和和I I都可可逆独立都可可逆独

19、立地结合于酶的不同地结合于酶的不同部位上；并且部位上；并且ESIESI为端点复合物。为端点复合物。 非竞争性抑制作用的双倒数方程非竞争性抑制作用的双倒数方程1 11 (1)(1)max maxKmIIvVKiSVKi非竞争性抑制作用非竞争性抑制作用KiKi 的求解的求解 从从II0 0和和II为某一固定浓度所作为某一固定浓度所作1/1/ 对对1/S1/S双倒数图的纵截距可直接测双倒数图的纵截距可直接测得得1/Vmax1/Vmax和和(1/Vmax)(1/Vmax)(1+I/Ki)(1+I/Ki)，从而，从而计算出计算出KiKi。从不同固定从不同固定II所作双倒数图的斜率所作双倒数图的斜率1/S

20、1/S对对II再制图可求得再制图可求得KiKi。从不同固定从不同固定II所作双曲数图的纵截距所作双曲数图的纵截距对对II再制图，从其横截距可直接到得再制图，从其横截距可直接到得K Ki i。 DixonDixon作图法求作图法求KiKi 11(1) (1)max max KmKmKmIvVKiSVS非竞争性抑制剂非竞争性抑制剂的的ICIC5050值值 非竞争性抑制剂的非竞争性抑制剂的ICIC5050值与底物浓度的关值与底物浓度的关系如下：系如下：根据该式，当底物浓度较高时，根据该式，当底物浓度较高时，ICIC5050值接值接近于近于KiKi值；当底物浓度较低时，值；当底物浓度较低时，ICIC5

21、050值明值明显低于显低于KiKi值。值。 50(1) KmICKiS非竞争性抑制剂的结构特征非竞争性抑制剂的结构特征 由于非竞争性抑制剂并非结合于酶活性中心的由于非竞争性抑制剂并非结合于酶活性中心的底物结合位点，而是活性中心附近的某些区域底物结合位点，而是活性中心附近的某些区域或基团，不影响酶与底物的亲和力。或基团，不影响酶与底物的亲和力。而非竞争性抑制剂的作用部位不是十分清楚，而非竞争性抑制剂的作用部位不是十分清楚，所以，不能根据酶的底物及酶活性中心的结构所以，不能根据酶的底物及酶活性中心的结构设计非竞争性抑制剂。设计非竞争性抑制剂。目前所发现的一些酶的非竞争性抑制剂大多数目前所发现的一些

22、酶的非竞争性抑制剂大多数都是随机筛选得到的化合物。都是随机筛选得到的化合物。 例如，染料木素（例如，染料木素（genisteingenistein）对于）对于 - -葡萄糖葡萄糖苷酶的抑制作用就是非竞争性抑制作用。他克苷酶的抑制作用就是非竞争性抑制作用。他克林林(tacrine(tacrine) )是治疗老年痴呆症的乙酰胆碱酯是治疗老年痴呆症的乙酰胆碱酯酶的非竞争性抑制剂。酶的非竞争性抑制剂。 3 3，反竞争性抑制作用，反竞争性抑制作用反竞争性抑制剂反竞争性抑制剂I I不不能与自由酶结合，能与自由酶结合，而只能与而只能与ESES可逆结可逆结合生成不能分解成合生成不能分解成产物的产物的EISEI

23、S。这一点。这一点与竞争性抑制相反，与竞争性抑制相反，K Ki i值为值为，EISEIS只能只能解离成解离成ES + IES + I，而，而不能解离成不能解离成EI + SEI + S。 反竞争性抑制程度取决于反竞争性抑制程度取决于II、SS、K Ki i和和K Km m等。等。它的抑制程度随底物浓度的增加而增加。它的抑制程度随底物浓度的增加而增加。反竞争性抑制剂使酶的反竞争性抑制剂使酶的KmKm值降低，即值降低，即KmappKmappKmKm。从这点看，反竞争性抑制剂不是一个抑制剂，从这点看，反竞争性抑制剂不是一个抑制剂，而像是一个激活剂。它之所以造成对酶促反应而像是一个激活剂。它之所以造成

24、对酶促反应的抑制作用，完全是由于它使的抑制作用，完全是由于它使VmaxVmax降低而引起。降低而引起。所以如果所以如果SS很小，反应主要为一级反应，则很小，反应主要为一级反应，则抑制剂对抑制剂对VmaxVmax的影响几乎完全被对的影响几乎完全被对KmKm的相反影的相反影响所抵消。这时几乎看不到抑制作用。响所抵消。这时几乎看不到抑制作用。 反竞争性抑制作用的双倒数方程反竞争性抑制作用的双倒数方程 111 (1)max maxKmIvVSVKi反竞争性抑制剂的结构特征反竞争性抑制剂的结构特征 反竞争性抑制在单底物酶催化反应中比反竞争性抑制在单底物酶催化反应中比较少见较少见胎盘碱性磷酸酯酶以葡萄糖胎

25、盘碱性磷酸酯酶以葡萄糖-6-6-磷酸或磷酸或 - -萘酚磷酸酯为底物时，萘酚磷酸酯为底物时，L-L-苯丙氨酸为反苯丙氨酸为反竞争性抑制剂；竞争性抑制剂；顺铂对乙酰胆碱酯酶的抑制作用也是属顺铂对乙酰胆碱酯酶的抑制作用也是属于反竞争类型。于反竞争类型。 在双底物反应中，反竞争性抑制比较多在双底物反应中，反竞争性抑制比较多见，如乒乓机制的酶促反应时，因为见，如乒乓机制的酶促反应时，因为I I可可以与以与EBEB复合物结合，对一个底物（复合物结合，对一个底物（A A）表）表现竞争性抑制的化合物（现竞争性抑制的化合物（I I）对另一个底）对另一个底物（物（B B）呈现反竞争性抑制。）呈现反竞争性抑制。如

26、抗坏血酸对兔肌乳酸脱氢酶的抑制作如抗坏血酸对兔肌乳酸脱氢酶的抑制作用，抗坏血酸相对于用，抗坏血酸相对于NADHNADH表现为乳酸脱表现为乳酸脱氢酶的反竞争抑制，相对于丙酮酸为乳氢酶的反竞争抑制，相对于丙酮酸为乳酸脱氢酶的竞争性抑制剂。酸脱氢酶的竞争性抑制剂。 4 4，混合性抑制作用，混合性抑制作用混合性抑制作用中混合性抑制作用中S S和和E E或或EIEI都能够结合，都能够结合，I I也可和也可和E E或或ESES结合，但亲和力都不相等，结合，但亲和力都不相等，表明表明S S和和I I对酶的结合互有影响，对酶的结合互有影响， K Ki i和和K Ki i两者既不等于无穷大，又互不相等，两者既不

27、等于无穷大，又互不相等，KsKsi i和和K Kss也不相等。有关可逆抑制作用的也不相等。有关可逆抑制作用的通式就是混合性抑制作用的公式。通式就是混合性抑制作用的公式。 1 11 (1)(1)max maxkmIIvVKiSVKi当用双倒数方程作图时，有抑制剂和无抑制剂当用双倒数方程作图时，有抑制剂和无抑制剂的直线既不平行，又不相交于纵轴或横轴，而的直线既不平行，又不相交于纵轴或横轴，而是相交于横轴负侧的上方（第二象限）或下方是相交于横轴负侧的上方（第二象限）或下方（第三象限）（第三象限） 二、不可逆抑制作用二、不可逆抑制作用这类抑制作用的抑制剂与酶分子上的某这类抑制作用的抑制剂与酶分子上的某

28、基团以牢固的共价健结合使酶失活。不基团以牢固的共价健结合使酶失活。不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而使酶复活。而使酶复活。不可逆抑制作用的特点是随时间的延长不可逆抑制作用的特点是随时间的延长会逐渐地增加抑制，最后达到完全抑制会逐渐地增加抑制，最后达到完全抑制。 1 1，非专一性不可逆抑制作用，非专一性不可逆抑制作用(1)(1)酰化剂酰化剂 可用通式表示为可用通式表示为RCOXRCOX。例如，。例如，醋酸酐、三氟乙酸硫醇酯、乙酰咪唑等。醋酸酐、三氟乙酸硫醇酯、乙酰咪唑等。它们对酶的酰化反应如下式它们对酶的酰化反应如下式： 磷酰化剂亦属此类，如二异丙氟磷酸酯磷

29、酰化剂亦属此类，如二异丙氟磷酸酯(DFP)(DFP)以及以及16051605、10591059等有机磷酸农药以等有机磷酸农药以及神经毒剂。及神经毒剂。DFPDFP能使乙酰胆碱酯酶分子能使乙酰胆碱酯酶分子中的一个丝氨酸侧链中的一个丝氨酸侧链(Ser-CH(Ser-CH2 2OH)OH)磷酸化磷酸化而使酶失活。而使酶失活。 (2)(2)烃基化剂烃基化剂可用通式可用通式R-XR-X表示。如卤烃衍生物，由于卤原表示。如卤烃衍生物，由于卤原子的强电负性，使烃基带部分正电荷，有利于子的强电负性，使烃基带部分正电荷，有利于酶上一些亲核基团的攻击，反应如下式：酶上一些亲核基团的攻击，反应如下式： (3)(3)

30、含活泼双键的试剂含活泼双键的试剂含活泼双键的试剂，如含活泼双键的试剂，如N-N-乙基顺丁烯二酰亚胺、乙基顺丁烯二酰亚胺、丙烯氰等，它们可与酶分子上的丙烯氰等，它们可与酶分子上的-SH-SH、-NH2-NH2等基等基团起加成反应，如下式：团起加成反应，如下式： (4)(4)亲电试剂亲电试剂常见的有四硝基甲烷，它可使酶分子上常见的有四硝基甲烷，它可使酶分子上的酪氨酸侧链硝基化。产物具有特殊光的酪氨酸侧链硝基化。产物具有特殊光谱性质，易于被检测。反应如下式：谱性质，易于被检测。反应如下式： 2 2，指向活性部位抑制剂，指向活性部位抑制剂 指向活性部位抑制剂的作用特征是指向活性部位抑制剂的作用特征是,

31、 , 抑制剂抑制剂分子中含有化学活泼的功能基，它与酶的活性分子中含有化学活泼的功能基，它与酶的活性部位处的基团或原子发生共价结合，使酶失活。部位处的基团或原子发生共价结合，使酶失活。这类抑制剂通常是在物物分子所特有的识别基这类抑制剂通常是在物物分子所特有的识别基团上连接或修饰有反应活性的化学基团或原子，团上连接或修饰有反应活性的化学基团或原子，当抑制剂与酶形成初始的可逆性的复合物后，当抑制剂与酶形成初始的可逆性的复合物后，该反应活性功能基与酶活性中心发生化学反应，该反应活性功能基与酶活性中心发生化学反应，形成共价键，以致改变了酶的氨基酸的残基的形成共价键，以致改变了酶的氨基酸的残基的排布排布(

32、 (构象构象) )而失活而失活 引入的化学活性基团有卤代酰基，卤代酮、偶引入的化学活性基团有卤代酰基，卤代酮、偶氮岭甲基酮、环氧基、亚磺酰氟、不饱和键、氮岭甲基酮、环氧基、亚磺酰氟、不饱和键、二硫键、光敏基团等。二硫键、光敏基团等。这类抑制剂与酶的反应速率应比类似的非酶性这类抑制剂与酶的反应速率应比类似的非酶性反应快，例如，具有较好离去基团的有机磷化反应快，例如，具有较好离去基团的有机磷化合物对丝氨酸蛋白酶的不可逆抑制作用是由于合物对丝氨酸蛋白酶的不可逆抑制作用是由于在活性部位的丝氨酸处发生磷酰化，生成磷酰在活性部位的丝氨酸处发生磷酰化，生成磷酰化酶。化酶。这些抑制剂并非单纯的活泼的磷酰化试剂

33、，因这些抑制剂并非单纯的活泼的磷酰化试剂，因为它们对于亲核试剂的反应活性并不高。例如，为它们对于亲核试剂的反应活性并不高。例如，对丝氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶的磷酰化速率对丝氨酸蛋白酶和乙酰胆碱酯酶的磷酰化速率比与水反应的速率快比与水反应的速率快10108 8-10-101212倍倍。 3 3，酶自杀性底物的抑制作用，酶自杀性底物的抑制作用 这类抑制剂呈现其活性是在酶的催化过程实现的。这类抑制剂呈现其活性是在酶的催化过程实现的。这类抑制剂的结构与底物有很大相似性，与酶分这类抑制剂的结构与底物有很大相似性，与酶分子有较高的亲和力，它本身无化学活性或者没子有较高的亲和力，它本身无化学活性或者没 有化

34、学活性基团，有化学活性基团， 但在酶的催化作用但在酶的催化作用 下，产生了化学活下，产生了化学活 性的亲电性基团，性的亲电性基团， 从而与酶的活性部位从而与酶的活性部位 处的亲核性基团发生处的亲核性基团发生 不可逆的结合反应，不可逆的结合反应， 使酶失活。使酶失活。 自杀性底物具有以下的结构特征和性能自杀性底物具有以下的结构特征和性能(1)同正常底物的化学结构具有相似性；同正常底物的化学结构具有相似性；(2)(2)可以同酶结合成复合物，有较大的亲和力；可以同酶结合成复合物，有较大的亲和力；(3)(3)在通常状态下，有低反应性能或化学惰性在通常状态下，有低反应性能或化学惰性的基团或结构片断；的基

35、团或结构片断；(4)(4)在酶的催化阶段，可将惰性基团转化为反在酶的催化阶段，可将惰性基团转化为反应性能强的中间体；应性能强的中间体；(5)(5)与酶的活性部位发生化学反应，特别是共与酶的活性部位发生化学反应，特别是共价键合，使酶不可逆失活。价键合，使酶不可逆失活。 酶自杀性底物的功能基团类型酶自杀性底物的功能基团类型 酶的自杀性底物的特异性是基于它与正常底物酶的自杀性底物的特异性是基于它与正常底物的结构相似性、这是酶与该抑制剂结合成复合的结构相似性、这是酶与该抑制剂结合成复合物并经催化反应暴露出活性基团的前提。物并经催化反应暴露出活性基团的前提。所暴露出的反应活性基团大多是亲电基团。所暴露出

36、的反应活性基团大多是亲电基团。例如例如 , , 不饱和羰基不饱和羰基( (醛、酮、亚胺或酯等醛、酮、亚胺或酯等) )，与酶分子的亲核基团发生迈克尔加成反应与酶分子的亲核基团发生迈克尔加成反应 , , 不饱和羰基的产生是酶催化的反迈克不饱和羰基的产生是酶催化的反迈克尔加成，生成的负碳型中间体被负电性尔加成，生成的负碳型中间体被负电性的羰基共振稳定化，使邻位碳发生消去的羰基共振稳定化，使邻位碳发生消去反应或去质子化，生成邻位不饱和键。反应或去质子化，生成邻位不饱和键。 四种类型可逆抑制的比较四种类型可逆抑制的比较 不同类型的可逆抑制作用可以利用双倒不同类型的可逆抑制作用可以利用双倒数作图法来区别，

37、根据图中有无抑制剂数作图法来区别，根据图中有无抑制剂时的直线是否相交于时的直线是否相交于1/S1/S轴，还是轴，还是1/V1/V轴就可以区别。轴就可以区别。 表表7-1 7-1 四类可逆抑制剂的动力学比较四类可逆抑制剂的动力学比较抑制类型抑制类型速率方程速率方程表观表观K Km m表观表观 VmaxVmax无抑制无抑制K Km mV Vmaxmax竞争性竞争性增大增大不变不变非竞争性非竞争性不变不变减小减小反竞争性反竞争性减小减小减小减小混合性混合性减小或增大减小或增大减小减小max VSvKmSmax (1) VSvIKmSKimax ( )(1)VSvIKmSKimax (1)VSvIKm

38、SKimax (1) (1)VSvIIKmSKiKi第二节第二节 化学物质对酶的激活作用化学物质对酶的激活作用 有些化学物质的作用与抑制剂的作用相反，对有些化学物质的作用与抑制剂的作用相反，对酶起着激活作用，加强酶作用的效果。酶起着激活作用，加强酶作用的效果。在某些情况下，只有在激活剂的存在下，酶催在某些情况下，只有在激活剂的存在下，酶催化反应才能进行，或者说只有在激活剂的存在化反应才能进行，或者说只有在激活剂的存在下催化反应速度才能测得出来。下催化反应速度才能测得出来。凡是能提高酶活性的物质，都称为激活剂，激凡是能提高酶活性的物质，都称为激活剂，激活剂一般是无机离子活简单的有机化合物，而活剂

39、一般是无机离子活简单的有机化合物，而高分子物质较少。高分子物质较少。激活剂的激活机制激活剂的激活机制激活剂之所以能够提高酶的催化活性，其主要激活剂之所以能够提高酶的催化活性，其主要原因有两种：原因有两种：一是激活剂与酶分子结合，改变了酶活性中心一是激活剂与酶分子结合，改变了酶活性中心及其附近的构象，从而增强了酶与底物的亲合及其附近的构象，从而增强了酶与底物的亲合能力，或者是增加了产物的离去速度，进而提能力，或者是增加了产物的离去速度，进而提高酶的催化活力；高酶的催化活力；二是激活剂与底物分子结合再与酶分子结合，二是激活剂与底物分子结合再与酶分子结合，使底物分子的电子密度或分子张力发生变化，使底

40、物分子的电子密度或分子张力发生变化，有利于产物的形成，从而提高酶催化活力。有利于产物的形成，从而提高酶催化活力。一、激活剂的类型一、激活剂的类型 激活剂的类型除了在生物体内起激活作激活剂的类型除了在生物体内起激活作用的蛋白质分子（如酶原激活）以外，用的蛋白质分子（如酶原激活）以外，按照分子的大小可以分为三种类型。按照分子的大小可以分为三种类型。即：无机离子、有机分子和高分子物质。即：无机离子、有机分子和高分子物质。1 1，具有巯基的还原剂，具有巯基的还原剂 半胱氨酸、半胱氨酸、2-2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等都巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等都含有巯基，可以使酶分子中被氧化的含有巯基，可以使酶分子

41、中被氧化的-SH-SH基还基还原，从而提高酶的催化活力。原，从而提高酶的催化活力。如半胱氨酸、如半胱氨酸、2-2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、木瓜蛋白酶、对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、木瓜蛋白酶、蜡样芽胞杆菌蛋白酶、蜡样芽胞杆菌蛋白酶、D-D-甘油醛甘油醛-3-3-磷酸脱氢磷酸脱氢酶等均具有激活作用。酶等均具有激活作用。半胱氨酸半胱氨酸 (20mM)(20mM)、2-2-巯基乙醇巯基乙醇(10mM)(10mM)和谷胱和谷胱甘肽甘肽 (10mM)(10mM)分别使未活化的腺苷二磷酸葡萄分别使未活化的腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性提高糖焦磷酸

42、化酶的活性提高1.31.3、3.53.5和和2.82.8倍。倍。 巯基的配位作用巯基的配位作用这些含有巯基的化合物还可以作为金属酶活性中这些含有巯基的化合物还可以作为金属酶活性中心的轴向配体从而激活酶的催化作用，如巯基苯心的轴向配体从而激活酶的催化作用，如巯基苯甲酸、巯基乙酸、半胱氨酸对细胞色素甲酸、巯基乙酸、半胱氨酸对细胞色素 P450P450、过氧化氢酶的激活作用。过氧化氢酶的激活作用。过氧化氢酶被巯基乙酸激活后，其过氧化氢酶被巯基乙酸激活后，其kmkm值减小、值减小、kcatkcat/km/km增大，即巯基乙酸能够提高过氧化氢酶增大，即巯基乙酸能够提高过氧化氢酶对底物的亲和力及底物专一性

43、。对底物的亲和力及底物专一性。巯基乙酸同样能够引起过氧化氢酶的可见光谱的巯基乙酸同样能够引起过氧化氢酶的可见光谱的蓝移及酶分子的色氨酸残基的荧光强度减小，从蓝移及酶分子的色氨酸残基的荧光强度减小，从而使过氧化氢酶活性中心铁卟啉周围环境发生变而使过氧化氢酶活性中心铁卟啉周围环境发生变化，以达到提高酶活力之目的。化，以达到提高酶活力之目的。2 2，多羟基化合物，多羟基化合物 多羟基化合物如甘油、乙二醇、糖类物质等不但可多羟基化合物如甘油、乙二醇、糖类物质等不但可以作为酶的稳定剂使用，而且它们对许多酶具有激以作为酶的稳定剂使用，而且它们对许多酶具有激活作用。活作用。例如，在例如，在 MgMg2+ 2

44、+ 或或 MnMn2+ 2+ 存在的情况下，蔗糖对天冬存在的情况下，蔗糖对天冬氨酸酶具有较强的激活作用，天冬氨酸酶的催化活氨酸酶具有较强的激活作用，天冬氨酸酶的催化活力同不加蔗糖时的相比可提高力同不加蔗糖时的相比可提高5.185.18倍，同样当甘油倍，同样当甘油加入含酶体系，酶活力有一定程度提高。加入含酶体系，酶活力有一定程度提高。这种激活作用可能与甘油和蔗糖的羟基有关，且这这种激活作用可能与甘油和蔗糖的羟基有关，且这种激活作用必须与种激活作用必须与MgMg2+2+或或 MnMn2+2+离子结合起来才能发离子结合起来才能发挥作用。挥作用。 另外，对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶起激活作用的物另外，

45、对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶起激活作用的物质除了半胱氨酸、质除了半胱氨酸、2-2-巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等以外，巯基乙醇和还原型谷胱甘肽等以外，3-3-磷酸甘油是其最有效的激活剂。磷酸甘油是其最有效的激活剂。用用0.1mol/L 3-0.1mol/L 3-磷酸甘油作为激活剂可使腺苷二磷酸葡萄磷酸甘油作为激活剂可使腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的糖焦磷酸化酶的VmaxVmax提高近提高近4 4倍。倍。3-3-磷酸甘油对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶激活取决于磷酸甘油对腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶激活取决于3-3-磷酸甘油与腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的巯基结合磷酸甘油与腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的巯基结合

46、和环境值。和环境值。氧化或除去巯基，腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性氧化或除去巯基，腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的活性显著下降；在只有显著下降；在只有3-3-磷酸甘油作为腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸甘油作为腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶的激活因子情况下磷酸化酶的激活因子情况下, ,对对3-3-磷酸甘油有很大影磷酸甘油有很大影响，在响，在pHpH值为值为7.57.5、8.08.0、8.58.5和和9.09.0时时, , 腺苷二磷酸葡萄腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶活性分别提高了糖焦磷酸化酶活性分别提高了3.13.1、2.92.9、4.84.8和和9.59.5倍。倍。乙二醇在乙二醇在0.30.33mol/L3mo

47、l/L的浓度范围内对的浓度范围内对 - -葡萄糖醛酸苷酶具有激活作用，其最适葡萄糖醛酸苷酶具有激活作用，其最适浓度为浓度为1.5mol/L1.5mol/L。其激活机理可能是由于乙二醇与底物的其激活机理可能是由于乙二醇与底物的水解产物水解产物 - -葡萄糖醛酸形成苷式结合，葡萄糖醛酸形成苷式结合，降低了产物抑制效应，从而提高了酶促降低了产物抑制效应，从而提高了酶促反应，使酶的活性升高。反应，使酶的活性升高。 3 3，变性剂，变性剂 某些变性剂如脲、盐酸胍等可以完全破某些变性剂如脲、盐酸胍等可以完全破坏酶蛋白的空间构象，使酶失去活性。坏酶蛋白的空间构象，使酶失去活性。但是当变性剂的浓度较低时，酶蛋

48、白仅但是当变性剂的浓度较低时，酶蛋白仅仅发生了部分变性。仅发生了部分变性。由于酶活性中心附近的多肽链的柔性，由于酶活性中心附近的多肽链的柔性，部分变性使活性中心的空间构象发生的部分变性使活性中心的空间构象发生的改变，有利于底物的结合以及产物的离改变，有利于底物的结合以及产物的离去，从而使酶的催化活性提高。去，从而使酶的催化活性提高。例如，在例如，在5 5 C C、2020 C C、3030 C C，鸡肝二氢叶酸还，鸡肝二氢叶酸还原酶随着盐酸胍的浓度原酶随着盐酸胍的浓度增加而增高，线经历一增加而增高，线经历一个激活过程后，再开始个激活过程后，再开始失活。失活。2mol/L2mol/L的脲可使的脲

49、可使二氢叶酸还原酶活力提二氢叶酸还原酶活力提高高3.63.6倍，而且酶活力倍，而且酶活力可以稳定可以稳定1212小时。小时。4mol/L4mol/L的脲可使二氢叶的脲可使二氢叶酸还原酶的催化活力提酸还原酶的催化活力提高大约高大约5 5倍，但激活后倍，但激活后的酶很快失去活力。的酶很快失去活力。 曲线曲线1 1和和2 2是在脲加入后立即检测，是在脲加入后立即检测，曲线曲线3 3和和4 4是在脲加入是在脲加入1212小时后检测小时后检测 同样不同浓度的脲和同样不同浓度的脲和盐酸胍也可以激活腺盐酸胍也可以激活腺苷酸激酶，当脲的浓苷酸激酶，当脲的浓度低于度低于1.8mol/L1.8mol/L时，时，腺

50、苷酸激酶的二级和腺苷酸激酶的二级和三级结构没有特别明三级结构没有特别明显的变化，但是酶的显的变化，但是酶的催化活力却明显提高，催化活力却明显提高，在脲的浓度达到在脲的浓度达到1mol/L1mol/L时，提高了时，提高了1.6 1.6 倍。而随着脲的倍。而随着脲的浓度增加，酶的催化浓度增加，酶的催化活力没有继续提高，活力没有继续提高，反而开始下降。反而开始下降。 -278nm-278nm处的光吸收变化；处的光吸收变化；-222nm-222nm处的处的CDCD光光谱变化；谱变化； - -酶的相对活性酶的相对活性 -ANS-ANS荧光标记的相对强度；荧光标记的相对强度；- ANS- ANS荧光标荧光

51、标记的慢相速度常数的相对值记的慢相速度常数的相对值 不同浓度下不同浓度下ANSANS与腺苷酸结合的慢相速率常数与腺苷酸结合的慢相速率常数 4 4，有机溶剂和表面活性剂，有机溶剂和表面活性剂 在某些情况下，低浓度的有机溶剂和表在某些情况下，低浓度的有机溶剂和表面活性剂可以有助于底物的溶解，同时面活性剂可以有助于底物的溶解，同时也可以使酶分子部分变性，从而提高酶也可以使酶分子部分变性，从而提高酶分子的催化活性。分子的催化活性。如在如在5%-10%5%-10%的乙醇的乙醇- -磷酸盐缓冲溶液中，磷酸盐缓冲溶液中，酪氨酸酶和漆酶的催化活力可以提高酪氨酸酶和漆酶的催化活力可以提高30-30-50%50%

52、。 而甲醇、乙醇、丙醇和丁醇对青霉素而甲醇、乙醇、丙醇和丁醇对青霉素V V酰化酶的诱导激酰化酶的诱导激活过程中，醇分子是以有机分子形式起作用。其激活活过程中，醇分子是以有机分子形式起作用。其激活机制如图所示。机制如图所示。 表面活性剂表面活性剂如如TweenTween 80 80处理处理Bacillus megateriumBacillus megaterium酯酶，可酯酶，可使酶催化对硝基苯酚己酯的使酶催化对硝基苯酚己酯的KmKm值降低，而值降低，而KcatKcat/Km/Km值提高值提高1414倍。倍。非离子表面活性剂浓度在非离子表面活性剂浓度在0.1%0.1%0.8%0.8%时，吐温时，

53、吐温8080、聚乙二醇等作为纤维素酶的激活剂，可使、聚乙二醇等作为纤维素酶的激活剂，可使纤维素酶活力提高纤维素酶活力提高20%-50%20%-50%。而阴离子表面活性剂浓度在而阴离子表面活性剂浓度在0.1%0.1%0.8%0.8%时，如时，如十二烷基磺酸钠也可作为纤维素酶的激活剂。十二烷基磺酸钠也可作为纤维素酶的激活剂。5 5，小分子有机化合物，小分子有机化合物 在有机胺类化合物（二乙胺、二异丙胺、三乙在有机胺类化合物（二乙胺、二异丙胺、三乙胺、吡啶等）的存在下，磷酸三酯酶的催化活胺、吡啶等）的存在下，磷酸三酯酶的催化活性随着有机胺的浓度改变而变化；性随着有机胺的浓度改变而变化；当有机胺浓度较

54、低时，磷酸三酯酶的催化活性当有机胺浓度较低时，磷酸三酯酶的催化活性明显提高，显示出有机胺化合物对磷酸三酯酶明显提高，显示出有机胺化合物对磷酸三酯酶的激活作用，但当有机胺的浓度增大时的激活作用，但当有机胺的浓度增大时（0.1mol/L0.1mol/L），则表现出较强的抑制作用。），则表现出较强的抑制作用。 6 6，高分子化合物，高分子化合物 高分子化合物如聚乙烯亚胺、聚精氨酸、聚赖高分子化合物如聚乙烯亚胺、聚精氨酸、聚赖氨酸等聚电解质，在低浓度的溶液中可以与酶氨酸等聚电解质，在低浓度的溶液中可以与酶蛋白分子表面的相反电荷相互作用，多点的静蛋白分子表面的相反电荷相互作用，多点的静电引力结合可能使酶

55、活性中心附近的空间构象电引力结合可能使酶活性中心附近的空间构象发生变化，从而提高酶的催化活力。发生变化，从而提高酶的催化活力。如聚乙烯亚胺，聚丁基亚胺分别使乳酸脱氢酶如聚乙烯亚胺，聚丁基亚胺分别使乳酸脱氢酶活力提高活力提高3.03.0和和 5.05.0倍。倍。聚乙烯吡咯烷酮聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(PVP)对烟草硝酸还原酶也具有对烟草硝酸还原酶也具有较强的激活作用。较强的激活作用。 二、激活作用的动力学二、激活作用的动力学 某些激活剂的激活作用主要是由于激活某些激活剂的激活作用主要是由于激活剂与游离酶相结合形成活性酶复合物，剂与游离酶相结合形成活性酶复合物，激活剂与底物相结合形成复合的活性底激

56、活剂与底物相结合形成复合的活性底物；或者和物；或者和E E、ESES都能结合形成三元复合都能结合形成三元复合物等多种情况。物等多种情况。因激活作用和抑制作用类同，在此仅就因激活作用和抑制作用类同，在此仅就二种类型的激活作用简述如下。二种类型的激活作用简述如下。 1 1，激活剂，激活剂A A与酶形成与酶形成EAEA活性复合物活性复合物 激活动力学模型与抑制动力学模型采取激活动力学模型与抑制动力学模型采取一致的符号，可表示如下一致的符号，可表示如下: : +AEA + SEASEA + PKsKAE以稳态法处理可得到如下反应速度方程式以稳态法处理可得到如下反应速度方程式: : max1(1) AV

57、vKmKSA显而易见，此类型的激活剂只影响反应的显而易见，此类型的激活剂只影响反应的KmKm值，并不影响值，并不影响VmaxVmax。若和抑制剂的类型。若和抑制剂的类型相类比，应属于竞争性活化。其倒数方程相类比，应属于竞争性活化。其倒数方程可表示如下：可表示如下： 111(1)maxmax AKmKvVVASAA加大，斜率降低，反应速度加大，斜率降低，反应速度 增大，增大，AA降低，斜率增大，反应速度降低，斜率增大，反应速度 降低；降低；AA0, 0, 0 0。另外，当。另外，当S= (S= (在在A A存存在的前提下在的前提下) )时时, , VmaxVmax。若固定。若固定SS，以以1/1

58、/ 1/A1/A作图可求出作图可求出K KA A：111()maxmax max AKmKmKvVVSVSA对对SS1 1和和SS2 2不同底物浓度下所得到的不同底物浓度下所得到的1/1/ 1/A1/A两直线相交于一点：两直线相交于一点：1/A=-1/K1/A=-1/KA A。如果激活剂如果激活剂A A与底物结合，其模型可表示如下：与底物结合，其模型可表示如下： +AEASEA + PKsKAE + S E + AS2 2，激活剂与游离酶、酶，激活剂与游离酶、酶- -底物复合物结合底物复合物结合 +AEA + SEASEA + PKsKAE + S ES +AKAKs激活剂和酶结合不影响底物与

59、酶结合，同样底物激活剂和酶结合不影响底物与酶结合，同样底物结合也不影响激活剂与酶的结合。激活剂的作用结合也不影响激活剂与酶的结合。激活剂的作用只对酶的活性有影响，也就是说，末结合激活剂只对酶的活性有影响，也就是说，末结合激活剂的的ESES复合物是无活性的，只有复合物是无活性的，只有ESAESA三元复合物才有三元复合物才有活性。以迅速平衡法得到如下方程：活性。以迅速平衡法得到如下方程：max(1)(1) AVvKKmAS显然此种类型的激活剂只影响显然此种类型的激活剂只影响VmaxVmax而不而不影响及影响及KmKm，属于非竞争性活化作用。其，属于非竞争性活化作用。其倒数方程如下：倒数方程如下：

60、1(1)11 maxmax AAKKKmAAvVVS直线的斜率为（直线的斜率为（1+K1+KA A/A/A）Ks/VmaxKs/Vmax，纵轴截，纵轴截距为（距为（1+K1+KA A/A/A）/Vmax/Vmax。横轴截距为。横轴截距为- - 1/Ks(1/1/Ks(1/ =0, 1/S= -1/Ks)=0, 1/S= -1/Ks)。若已知。若已知激活激活剂剂AA的浓度和的浓度和VmaxVmax就可以计算出就可以计算出K KA A。以以DixonDixon作图法也可以得到作图法也可以得到K KA A。当当SS为常数时，为常数时，1/1/ 1/A1/A作图是直线，而且作图是直线，而且SS1 1和