罗制精品-31菊花组织培养

1、舞钢市一高舞钢市一高 罗瑞锋罗瑞锋菊花的组织培养菊花的组织培养课题背景课题背景植物细胞或组织，发育成完植物细胞或组织，发育成完整植株，需要什么条件？整植株，需要什么条件？什么叫植物细胞的全能性什么叫植物细胞的全能性？（1 1）概念）概念：具有某种生物全部遗传信息具有某种生物全部遗传信息的的任何一个细胞任何一个细胞，具有发育成完整个体的潜能。具有发育成完整个体的潜能。 . .植物细胞全能性表现的条件：植物细胞全能性表现的条件：离体、适宜营养、一定比例的激素、离体、适宜营养、一定比例的激素、无菌条件、适宜温度、光照无菌条件、适宜温度、光照当植物细胞，脱离了原来所在的植物体的器官或组织，而处当植物细

2、胞，脱离了原来所在的植物体的器官或组织，而处于于离体状态离体状态时，在一定的时，在一定的营养物质营养物质、激素激素和和其它外界条件其它外界条件的作的作用下，就可能表现出全能性，发育成用下，就可能表现出全能性，发育成完整植株完整植株。. .植物细胞具有全能性植物细胞具有全能性（3 3）（2 2）原因）原因：细胞内，含有：细胞内，含有某种生物全部遗传信息某种生物全部遗传信息植物细胞全能性的表现为什植物细胞全能性的表现为什么一定需要离体条件？么一定需要离体条件？（一）植物组织培养的过程：（一）植物组织培养的过程：生物的全部遗传信息，仍具有发生物的全部遗传信息，仍具有发育成完整新个体的育成完整新个体的

3、。离体的植物离体的植物组织或细胞组织或细胞外植体外植体有丝分裂有丝分裂脱分化脱分化愈伤愈伤组织组织长出丛芽长出丛芽生根生根移栽成活移栽成活长成植株长成植株再分化再分化（二）影响植物组织培养的因素：（二）影响植物组织培养的因素：菊花组织培养的实验操作程序1.1.配制各种母液配制各种母液大量元素：浓缩大量元素：浓缩1010倍；倍；微量元素：浓缩微量元素：浓缩100100倍；倍；二者均常温保存二者均常温保存激素、维生素类激素、维生素类用量少的有机物用量少的有机物按按1mg/mL1mg/mL配成母液配成母液（1 1）一般要求）一般要求（2 2）配制母液的意义：）配制母液的意义： 减少工作量；减少工作量

4、； 减少微量试剂称量所减少微量试剂称量所造成的误差造成的误差 （3 3）配制母液流程：）配制母液流程：称量称量溶解溶解混合混合定容定容标记标记保存（保存（4 4O OC C）（2 2）配制母液的意义：）配制母液的意义： 减少工作量；减少工作量； 减少微量试剂称量所造成的误差减少微量试剂称量所造成的误差 微量元素微量元素 大量元素大量元素有机物有机物铁盐铁盐2.2.配制培养基，高压蒸汽灭菌配制培养基，高压蒸汽灭菌 依次加入大量元素、微量元素、有机物、激素依次加入大量元素、微量元素、有机物、激素母液母液根据各种母液的浓缩倍数，根据各种母液的浓缩倍数，计算计算用量用量将称好的将称好的琼脂琼脂加入加入

5、800mL800mL蒸馏水，加热，蒸馏水，加热，熔化熔化琼脂琼脂加入加入30g30g蔗糖蔗糖，搅拌均匀，搅拌均匀加蒸馏水加蒸馏水定容定容到到1000mL1000mL调节调节pHpH 分装分装到锥形瓶中到锥形瓶中（每瓶（每瓶50mL50mL100mL100mL）高压蒸汽高压蒸汽灭菌灭菌立式高压灭菌锅立式高压灭菌锅要兼顾要兼顾药剂的消毒效果和外植物体的耐受力药剂的消毒效果和外植物体的耐受力幼叶、幼茎（枝）、花瓣、嫩芽等生长旺盛的幼幼叶、幼茎（枝）、花瓣、嫩芽等生长旺盛的幼嫩组织嫩组织 花药（花粉）花药（花粉）进行消毒进行消毒外植体外植体消毒液要完全消毒液要完全浸没外植体浸没外植体 消毒液：消毒液：

6、75%75%酒精、酒精、0.1%HgCl0.1%HgCl、 10%10%次氯酸钠次氯酸钠消毒时间依消毒时间依据材料而定据材料而定外植体外植体启动超净工作启动超净工作台台，如打开吹风和照明灯，如打开吹风和照明灯开关等等。开关等等。做好接种准备工作做好接种准备工作在等待外植体消毒的同时，做好接种准备工作：在等待外植体消毒的同时，做好接种准备工作：用酒精进行用酒精进行桌面消毒。桌面消毒。用酒精棉球对用酒精棉球对培养基和培养培养基和培养基瓶口进行消基瓶口进行消毒。毒。准备无菌纸准备无菌纸点燃酒精灯点燃酒精灯灼烧接种工具时，要注意安全灼烧接种工具时，要注意安全瓶外壁贴上标签：植物名称、接种日期、姓名等瓶

7、外壁贴上标签：植物名称、接种日期、姓名等接种后，在酒精灯火焰上转动灼烧瓶口，加盖接种后，在酒精灯火焰上转动灼烧瓶口，加盖贴标签：贴标签：植物名称植物名称接种日期接种日期姓名等姓名等珍珠岩珍珠岩：是一种火山喷发的酸性熔岩，是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。是一种天然、无毒，在高温作用下会膨是一种天然、无毒，在高温作用下会膨胀比较少见的矿物质。属于硅酸盐。胀比较少见的矿物质。属于硅酸盐。 蛭蛭 石：石：六、炼苗、移栽六、炼苗、移栽移栽前打开封口膜，

8、让试管苗在培养间生长一段时间后再移栽移栽前打开封口膜，让试管苗在培养间生长一段时间后再移栽愈伤组织开始分化愈伤组织开始分化愈伤组织愈伤组织四、放在培养室培养四、放在培养室培养1、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）2、外植体的消毒（酒精、氯化汞）、外植体的消毒（酒精、氯化汞）3、接种的无菌操作（酒精、酒精灯、接种的无菌操作（酒精、酒精灯灼烧）灼烧）4、无菌箱中的培养；、无菌箱中的培养；5、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。、移栽到消过毒的环境中生存一段时间。在整个操作过程中，在整个操作过程中， 是如何来实现是如何来实现无菌无菌环境的？环境的？2.外植体的生理状态外植体的生

9、理状态是成功进行组织培养的重要条是成功进行组织培养的重要条件之一。件之一。 生长旺盛的嫩枝生理状况好生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导，容易诱导脱分化和再分化。脱分化和再分化。1. 1. 植物组织培养所利用的植物材料，植物组织培养所利用的植物材料，体积小、抗体积小、抗性差，对培养条件的要求性差，对培养条件的要求较高较高。用于植物组织培养。用于植物组织培养的培养基，同样的培养基，同样适合于某些微生物的生长适合于某些微生物的生长，如一些，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的污染，就会导致实验前功尽

10、弃，因此要进行严格的无菌操作。无菌操作。因为，花卉组织培养是在实验室中进行，因为，花卉组织培养是在实验室中进行，条件是可控的。条件是可控的。此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境此时的组织或细胞为离体的，即细胞所生活的环境为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物为液体有机物营养环境，而不是能体现其整个植物体的光能自养体的光能自养在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽在培养过程中，是脱分化、再分化的过程，随着芽和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一和根的形成，就具有了自养的能力，是由细胞到一个个体的演变过程个个体的演变过程1、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组、高等植物是光能自养型生物，为什么在植物组织培养过程中还需要提供有机物培养基？织培养过程中还需要提供有机物培养基？2、培养过程中为什么需要进行光照、培养