环境微生物学实验学习教案

1、会计学1环境微生物学实验环境微生物学实验第一页，编辑于星期二：八点 五十八分。第1页/共26页第二页，编辑于星期二：八点 五十八分。第2页/共26页第三页，编辑于星期二：八点 五十八分。第3页/共26页第四页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验一实验一 光学显微镜的使用及微生物形态观察、大小测定和计数光学显微镜的使用及微生物形态观察、大小测定和计数实验二实验二 培养基的配置和灭菌培养基的配置和灭菌实验三实验三 纯种微生物的分离、培养及接种技术纯种微生物的分离、培养及接种技术第4页/共26页第五页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验一实验一 光学显微镜的使用及微生物形态观察、大小测定和计光学显微

2、镜的使用及微生物形态观察、大小测定和计数数1、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片，学会绘制生物图3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法4、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法实验目的实验目的第5页/共26页第六页，编辑于星期二：八点 五十八分。显微镜的构造显微镜的构造现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器：光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。第6页/共26

3、页第七页，编辑于星期二：八点 五十八分。显微镜的显微镜的使用使用 1、低倍镜观察、低倍镜观察 将标本波片用标本夹夹住，移动到物镜的正下方。下降10物镜，使其接近标本，用粗调节器慢慢升起镜简，使标本在视野中初步聚焦，再使用微调调节图像清晰。移动标本，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。2、高倍镜观察、高倍镜观察 在低倍镜下找到合适的观察目标并将其移至视野中心后，轻轻转动物镜转换器将高倍镜移至工作位置。对聚光器光圈及视野亮度进行适当调节后微调细调节器使物象清晰，移动标本，仔细观察并记录所观察到的结果。3、油镜观察、油镜观察 在标本的盖玻片上滴少量香柏油，将物镜转换到油镜，从侧面注视，用

4、粗调节器将镜筒小心降下，使镜头侵入香柏油中。开足光圈，旋转细调节器至标本显出，清晰为止。第7页/共26页第八页，编辑于星期二：八点 五十八分。微生物大小的测量微生物大小的测量标定目镜测微尺标定目镜测微尺 装在目镜上的目测微尺中央刻有等分为100格或更多格的标尺，使用前要用物测微尺标定。物测微尺中央刻有1mm长的标尺，等分为100格，10m格。将物测微尺的刻度朝上放在载物台上，用低倍镜找出物测微尺的刻度，移动物测微尺使其第一条线与目测微尺的第一条线重合，顺着刻度线找出另一条重合线。算出低倍镜下目测微尺每格的长度。换高倍镜用同样方法标定出高倍镜下目测微尺每格的长度。镜台测微尺及其中央部分的放大目镜

5、测微尺校正目镜测微尺第8页/共26页第九页，编辑于星期二：八点 五十八分。微生物大小的测量微生物大小的测量微生物大小的测量微生物大小的测量 将物测微尺取下，换上标本片，选择适当物镜测量微生物的长度和宽度占目测微尺的格数，再按目测微尺1格的长度算出微生物的长度和宽度。10 10 1010 颤藻颤藻第9页/共26页第十页，编辑于星期二：八点 五十八分。硝化细菌硝化细菌大肠杆菌大肠杆菌酵母菌酵母菌第10页/共26页第十一页，编辑于星期二：八点 五十八分。记录实验结果完成下列任务并提交一份实验报告。1、绘制所观察的一种或两种微生物的形态，并测量其大小。2、将菌液浓度的实验结果填入下表：计数次数每个中方

6、格菌数稀释倍数原菌液浓度（个/ml）平均值（个/ml）第一次第二次第11页/共26页第十二页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验二实验二 培养基的配置和灭菌培养基的配置和灭菌1、明确培养基配置的原理2、掌握配制培养基的一般方法和步骤3、掌握灭菌锅的使用方法实验目的实验目的第12页/共26页第十三页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验基本原理实验基本原理本次需要配制的培养基是为下次从土壤或活性污泥中分离细菌用的，所以选择配制适合细菌生长的牛肉膏蛋白胨培养基。这是一种应用最广泛最普遍的细菌基本培养基，牛肉膏提供碳原和能源，蛋白胨主要提供氮源，NaCI提供无机盐，用HCI和NaOH调节pH，还要加入

7、一定量的琼脂最为凝固剂。琼脂在大于96时融化，小于40时凝固，通常不被微生物利用。培养基配方如下：（调节 ）牛肉膏蛋白胨NaCI琼脂水5 g10 g5 g 25 g1000ml第13页/共26页第十四页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验内容和步骤实验内容和步骤1.配制溶液：取一定容最的烧杯或搪瓷杯盛入适量蒸馏水，按培养基配方逐一称取各种成分，依次加入水中溶解。牛肉膏、蛋白胨可加热促进溶解，待全部溶解后，加水补足所需容量。2.调节pH：用精密pH试纸测量培养基原始pH值。若偏酸，逐滴加入1molL的NaOH 溶液，边加边搅拌，随时测pH值，直至达约。若偏碱，同法用1molL的HCI溶液调节。3

8、.分装：将配制好的培养基装入三角瓶和试管中，三角瓶装量不要超过容积的1/2，试管装量不要超过试管高度的1/3，约为5ml。5、加塞：分装完毕后，在试管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入并保证良好的通气性能。4. 加塞：分装完毕后，在试管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入并保证良好的通气性能。第14页/共26页第十五页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验内容和步骤实验内容和步骤5. 包扎：加塞后，三角瓶外包一层牛皮纸或两层旧报纸，用麻绳以活结形式扎好：试管先用橡皮筋全部捆好，再在棉塞外包牛皮纸或旧报纸，防止灭菌时冷凝水润湿棉塞。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。 6. 灭菌

9、：将包扎好的培养基放进高压蒸汽灭菌锅内，121，20min，高压蒸汽灭菌。7. 搁置斜面：将灭菌的试管培荞基冷却至50左右，将试管口端搁在玻璃棒或其它合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。8. 无菌检套：将灭菌的培养基放入37的培养箱中培养2448h，检查灭菌是否彻底。第15页/共26页第十六页，编辑于星期二：八点 五十八分。第16页/共26页第十七页，编辑于星期二：八点 五十八分。第17页/共26页第十八页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验三实验三 纯种微生物的分离、培养及接种技术纯种微生物的分离、培养及接种技术l、掌握梯度稀释平板法分离纯种微生物的原理、方法2、掌握

10、常规接种技术3、建立无菌操作意识实验目的实验目的第18页/共26页第十九页，编辑于星期二：八点 五十八分。实验基本原理实验基本原理土样或活性污泥中含有的微生物数量很多，而且聚集在一起，经过无菌水的梯度稀释可以将微生物充分分散，成单个细胞，涂布到固体平板上，长成单菌落，一个单菌落对应于原土样（或活性污泥）中的一个微生物，乘以相应的稀释倍数可以计算出土样的微生物浓度；将单菌落进一步划线纯化可分离到纯种微生物。第19页/共26页第二十页，编辑于星期二：八点 五十八分。（一）梯度稀释平板法（一）梯度稀释平板法1、 制备土壤（或活性污泥）稀释液制备土壤（或活性污泥）稀释液准确称取土样10g或活性污泥10

11、ml，加入装有90ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡约20min，使土样与水充分混匀，将细胞分散。用一支无菌吸管从中吸取1ml土壤或活性污泥悬液加入装有9ml无菌水的试管中，吹吸（深吸浅吹）3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液：再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml移入装有9ml无菌水的诚管中，也吹吸三次，即成10-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、等一系列稀释菌液。第20页/共26页第二十一页，编辑于星期二：八点 五十八分。（一）梯度稀释平板法（一）梯度稀释平板法 2、加菌、加菌将无菌平板编上10-4、10-5、10-6

12、号码，每一号码设置三个重复，用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-6稀释液各1ml放入编号10-6的3个平板中，同法吸取10-5稀释液各1ml放入编号10-5的3个平板中，再吸取10-4稀释液各1rnl放入编号10-4的3个平板中（图3-1）（由低浓度向高浓度时，吸管可不必更换）。3、倒平板、倒平板上述操作的同时，将培养基加热融化，再冷却到4050，倾注1015ml培养基入已含有菌液的培养皿内（约23mm厚）。迅速盖上皿盖，平放在工作台上，轻轻转动，是培养基和稀释的菌液充分混合均匀，冷却后，即制成平板。4、培养、培养将培养皿倒置，放于30恒温培养箱中培养2436h，观察结果。第21页/共26页第二

13、十二页，编辑于星期二：八点 五十八分。（二）平板划线（二）平板划线平板划线的主要目的是长出单菌落，得到纯培养。将融化的培养基无菌操作倒入无菌的空培养皿中。接种环在火焰上彻底杀菌并冷却后，蘸取少量菌种，在平板表面轻轻地划线（如图），使得初始聚集在一起的细胞渐渐稀释，最后有单个分散的细胞，长出单菌落，达到分离纯化的目的。将划好线的培养皿倒置于30恒温培养箱中培养2436h，观察结果。第22页/共26页第二十三页，编辑于星期二：八点 五十八分。（三）斜面接种（三）斜面接种1、在待接种的斜面培养基的试管上部，贴上标签，写上菌名、接种日期等。2、将一支斜面菌种和一支待接的斜面培养基放在左手上，拇指压住两只试管，中指位于两只试管之间，斜面向上，管口齐平。3、右手先将棉塞拧松动，以便接种时拔出。右手拿接种环，将接种环可能进入试管的部分在火焰上灼烧灭菌。4、在火焰旁，用右手小指、无名指和手掌央住棉塞将它拔出。试管口在火焰上微