体外诊断试剂稳定性审评要点-朴澜第二次反馈

1、体外诊断试剂稳定性审评要点体外诊断试剂研发中一个重要的方面就是要初始设计产品的稳定性，然后确定并验证投放市场的产品的有效期。稳定性的研究影响了体外诊断试剂产品组成、生产工艺和产品外包装材料的选择等环节，同时也影响了体外诊断试剂产品技术要求中各性能指标的确定。2014年 9月5日，国家药品监督管理局发布了关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告（2014年第44号），公告的附件3中规定“稳定性研究资料包括至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的实时稳定性研究资料，并应当充分考虑产品在储存、运输和使用过程中的不利条件，进行相应的稳定性研究。应当详细说明稳定性研究方法的确

2、定依据及具体试验方法、过程”。2018年2月24日，国家药品监督管理局发布YY/T 15792018/ISO23640:2011 体外诊断医疗器械体外诊断试剂稳定性评价 ，上述标准作为体外诊断试剂产品注册资料中稳定性研究部分的审评依据，规定了对稳定性评价的通用要求，以及对实时稳定性和加速稳定性的具体要求，但并未就具体研究内容进行详细规定。现参考生物制品稳定性研究技术指导原则（试行）和美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute， CLSI）发布的指南性文件EP25-A，介绍体外诊断试剂产品稳定性研究的基本内容及注意事项，主要

3、应从以下几个方面来进行研究。 1、实时或效期稳定性 实时或效期稳定性是检测体外诊断试剂稳定性的首要指标，体外诊断试剂制造商在进行诊断试剂实时稳定性检测时，应提供 3 个批次的诊断试剂产品，按照温度或湿度等条件考察至有效期后，进行全性能检测（批间性能除外）。在进行诊断试剂的考察过程中，根据诊断试剂产品的具体情况设置检测时间点，充分的考虑试剂对温度的要求，针对特殊的诊断试剂以及对外界因素较为敏感的试剂合理的增加时间点，进而了解试剂的性能，实际考察时间可较拟定的有效期稍长。如果体外诊断试剂保存期延长，也应提供3个批次的产品进行研究。以下均以有效期1年为例。举例1:试剂盒28效期稳定性研究方案，将3个

4、批次的试剂盒放置于28条件下保存，分别于第0、3、6、9、12、13个月按照产品技术要求检测，检测结果均应符合要求。举例2：试纸类项目（230），将3个批次的产品于230条件下分别密封避光保存，储存温度应在230范围内合理分布，根据实时温度记录对温度的分布情况进行分析统计，应能代表产品预期的实际储存情况，分别于第0、3、6、9、12、13个月进行全性能检测（批间性能除外），检测结果均应符合要求。举例3：校准品、质控品28效期稳定性研究方案，将3个批次的校准品放置于28密闭避光条件下保存，分别于第0、3、6、9、12个月进行测量，每个时间点测量3次，至少选择5个检测时间点，按照t检验/F检验方法

5、进行趋势显著性检验，结果变化趋势应不显著。注：对于质控品或校准品而言，上述用t检验的方法有一定的局限性。对于重复性很好的产品，通过t检验很容易检出趋势显著性。例如以下两组数据，数据组1比数据组2重复性更好，到15个月的时候，测值仅降低了5%，但是按照t检验的方法反而会得出差异显著的结论。时间数据组1数据组20个月10103个月1096个月10109个月109.512个月9.5915个月9.58.5数据b1SS(b1)t0.95,4S(b1)*t0.95,4结论数据组10.03810.16180.01292.1320.0275差异显著数据组20.07620.47930.03822.1320.08

6、14差异不显著举例4：试剂盒内配套非生化分析仪用校准品28效期稳定性研究方案，可与配套试剂盒稳定性研究同时开展，将3个批次的校准品与配套试剂盒同时放置于28条件下保存，分别于第0、3、6、9、12、13个月使用校准品进行校准后使用配套试剂盒进行准确度试验，试验结果均应符合要求。b.质控品及生化分析仪用校准品稳定性（含效期稳定性、使用稳定性及复溶稳定性等）试验方法应参照YY/T1652-2019体外诊断试剂用质控物通用技术要求、YYT 1662-2019 生化分析仪用质控物、YYT 1549-2017生化分析仪用校准物等相关标准及指导原则，其余不适用上述标准的校准品及质控品可参照执行或选择其它科

7、学合理的方法。2、加速稳定性 体外诊断试剂的加速稳定性主要是指通过设计剧烈环境条件（温度、湿度、光或振动的极端条件）增加化学和（或）物理降解、变化的速率，从而去预测体外诊断试剂保存期的研究。根据行业惯例及阿伦尼乌斯方程的推导，试剂盒在37环境中放置7天相当于在2-8环境中放置1年，加速稳定性可以作为产品说明书的最初有效期的基础。加速稳定性的检测主要基于诊断试剂在运输过程、储存过程以及使用过程中的不稳定因素，在诊断试剂产品的稳定性研究实验中仍具有一定的意义，可将加速稳定性作为注册检验中稳定性的试验方法，但实时稳定性研究仍是试剂稳定性结论的首要研究依据，而加速稳定性作为辅助稳定性检测实验指标，可不

8、在稳定性研究资料中提交。3、使用稳定性（开瓶或开封稳定性） 使用稳定性（开瓶或开封稳定性）主要体现体外诊断试剂在使用过程中试剂受外界因素影响时的变化，是诊断试剂稳定性的重要指标之一，需按照试剂说明书的操作指导，合理的设置检测时间点，按照检测技术指标以确定试剂的使用有效期，一般提供1个批次产品的研究资料。以下均以使用有效期30天为例。举例1：试剂为瓶装液体试剂，密闭保存方式，使用环境是将试剂开盖后放置在仪器试剂仓内，因此其使用稳定性为开瓶稳定性：将1个批次试剂开瓶上机28避光保存，在第0天、14天、21天、28天、30天、32天按照产品技术要求进行全性能检测，检测结果均应符合要求。举例2：筒装类

9、型的试纸类项目（230），将1个批次的产品开封后，于230条件下保存，储存温度应在230范围内合理分布，根据实时温度记录对温度的分布情况进行分析统计，应能代表产品预期的实际储存情况，在第0天、14天、21天、28天、30天、32天按照产品技术要求进行全性能检测，检测结果均应符合要求。4、复溶稳定性干粉试剂常见于校准品及质控品，复溶稳定性主要是检测干粉试剂在溶解后，试剂的性能是否受到影响。一般提供1个批次产品的研究资料。以下均以复溶稳定性30天为例。举例1：校准品28复溶稳定性研究方案，将1个批次的校准品复溶后放置于说明书规定的储存条件下，分别于第7、14、21、28、29、30天进行测量，每个

10、时间点测量3次，至少选择5个检测时间点，按照t检验/F检验方法进行趋势显著性检验，结果变化趋势应不显著。举例2：质控品28复溶稳定性研究方案，将1个批次的质控品复溶后放置于说明书规定的储存条件下，分别于第7、14、21、28、29、30天进行测量，每个时间点测量3次，至少选择5个检测时间点，按照t检验/F检验方法进行趋势显著性检验，要求结果的变化趋势应不显著。注：a.对于质控品或校准品而言，上述用t检验/F检验的方法有一定的局限性，对于重复性很好的产品，通过t检验/F检验很容易检出趋势显著性。例如表格下述两组数据，平均值和偏差是一致的，但是第二组数据的重复性更好，反而无法通过t检验。试剂批号：

11、 QC1稳定期末稳定期初第1瓶9.0008.000第1瓶9.0008.000第2瓶10.0009.000第2瓶10.0009.000第3瓶11.00010.000第3瓶12.00011.000mean10.179.17std1.1690451941.169045194t1.481594395t(0.05,10)2.228138852偏差10.91%试剂批号： QC1稳定期末稳定期初第1瓶10.0009.000第1瓶10.0009.000第2瓶10.0009.000第2瓶10.0009.000第3瓶10.0009.000第3瓶11.00010.000mean10.179.17std0.40824

12、8290.40824829t4.242640687t(0.05,10)2.228138852偏差10.91%因此，建议按照行标（YY/T 1652-2019 体外诊断试剂用质控物通用技术要求）要求，增加测稳定期前后相对偏差的方法。如下图：若校准品、质控品复溶后在0以下储存的，其研究方法同上，储存温度应在说明书规定的温度范围内合理分布，应能代表产品预期的实际储存情况，并充分考虑冻融次数。举例3：校准品、质控品冻融次数研究方案（以可反复冻融3次为例），取1个批次的校准品、质控品，分别于冻融前和冻融1次、2次、第3次、第4次时进行测定，每次测定后将校准品、质控品放回至说明书规定的储存条件下保存，最后

13、计算每次测定的均值和首次复溶时均值结果的相对偏差，要求相对偏差在10.0%/15.0%（不高于试剂盒准确度指标）范围内。5、样本稳定性 目前体外诊断常见的检测对象常为蛋白质类物质，蛋白质易受温度条件的影响，同时微生物污染也常常影响蛋白质类物质的准确性，易出现蛋白质沉淀、蛋白质变性以及降解等情况。选择样本稳定性研究试验的样本例数及时间节点由企业决定，合理设置，一般提供1个批次的产品进行研究，通常以偏差形式考察，应包含所有储存条件。举例1：样本28稳定性研究方案，以样本稳定性30天为例。取10份血清样本，分别测定刚收集及在28条件下保存3、7、14、20、28、30、32天样本的含量，计算3、7、

14、14、20、28、30、32天样本的测定值与初次收集时测定值的相对偏差，要求相对偏差应在10.0%/15.0%（不高于试剂盒准确度指标）范围内。举例2：样本冻融次数研究方案，以可反复冻融3次为例，取10份样本，分别于冻融前和冻融1次、2次、第3次、第4次时进行测定，计算每次测定值与冻融前样本测定值的相对偏差，要求相对偏差应在10.0%/15.0%（不高于试剂盒准确度指标）范围内。6、运输稳定性 体外诊断试剂的运输稳定性检测主要是针对体外诊断试剂在运输过程中各种因素对试剂的影响。目前，运输稳定性检测试验分为实际运输方式和模拟运输方式，充分考虑了运输时温度的变化、气候的影响、相对湿度的改变以及运输时限等各种参数。一般提供1个批次产品的研究资料。举例：将1批产品通过模拟运输、实际运输后，按照技术要求指标对运输前、运输后、运输后至效期末的产品进行检测，应能满足产品技术要求相应指标要求。为充分考虑试剂在实际储存使用过程中的不利因素，更好地验证试剂在实际储存使用过程中的实际情况，同时减少研究所需试剂样品量，建议稳定性研究可将运输稳定性、效期稳定性、使用稳定性等研究整合进