青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒Ⅱ型活性研究

1、青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒型活性研究姜海鸥，黄雪霜，王斌，张峻【摘要】目的体外测定青羊参多糖硫酸酯抗单纯疱疹病毒型的活性。要领接纳TT法检测化合物对疱疹病毒熏染Ver细胞的庇护作用。效果青羊参多糖硫酸酯体外抗HSV-的E50为69.9g/l，治疗指数为103。结论在体外，青羊参多糖硫酸酯有较明显的抗HSV-的作用。【关键词】青羊参多糖硫酸酯；单纯疱疹病毒型；抗病毒活性Abstrat:bjetiveTinvestigatetheAnti-HSV-ativityfsulfatedplysaharidefrynanhutphylluShnEidinvitr.ethdsVerellserein

2、fetedbyHSV-andtheinhibitryeffetsfsulfatedplysaharidefrynanhutphylluShneidereevaluatedbyTT.ResultsFrHSV-,50%effetivenentratin(E50)andtherapeutiindex(TI)fsulfatedplysaharidefrynanhutphylluShneidere69.9g/land103,respetively.nlusinSulfatedplysaharidefrynanhutphylluShneidhasbviusHSV-inhibitryeffietinvitr

3、.Keyrds:SulfatedplysaharidefrynanhutphylluShneid；HSV-;Antiviralativity单纯疱疹病毒HSV是一种常见的熏染性病原体，HSV-可引起外阴疱疹，是宫颈癌的协同诱因。阿昔洛韦AV治疗人类HSV熏染易产生耐药毒株1。因此，继承探求高效、价廉的抗单纯疱疹病毒新药已势在必行。自1987年创造的硫酸酯化多糖具有按捺艾滋病毒HIV活性以来，多糖硫酸化的抗病毒活性研究成为热门2，但关于青羊参多糖硫酸酯的抗病毒实行研究甚少。本文对青羊参多糖硫酸酯体外抗单纯疱疹病毒型的药效举行了实行研究。现报道如下。1质料和要领1.1试剂阿昔洛韦aylvir购自湖

4、北潜江制药股份；待测样品青羊参多糖硫酸酯由本实行室提供。TT(3，4，5diethylthiazl-2-yl-2，5-diphenyltetrazliubride)和十二烷基磺酸钠Sdiuddeylsulfate，SDS均购自Siga公司，N，N-二甲基甲酰胺N，NDiethylfraine，DF购自上海试剂一厂。1.2溶液完全造就基为RPI-1640Invitrgen公司，含有10%的小牛血清Hylne公司，2l/L谷氨酰胺，10l/LHEPES，50l/L2-E，100u/l的青、链霉素。磷酸盐缓冲液PBS，0.01，pH7.4。1.3细胞和病毒Ver为非洲绿猴肾细胞，HSV-均由英国R惠

5、赠。1.4病毒滴度测定将病毒悬液作一连10倍稀释,通例要领熏染单层Ver细胞，37，5%2造就3d，不雅察细胞病变(PE)环境,按Reed-uenh要领盘算TID50。1.5以TT法检测样品对Ver细胞的毒性取对数生恒久的细胞，离心1,000r/in，10in后将细胞重悬，细胞浓度调至2106/l。在96孔细胞造就板大将被检样品2倍倍比稀释，共设6个梯度，每个梯度设3个重复孔，另设阳性比拟组及细胞比拟组。别离加细胞悬液后，置37，5%2造就箱中孵育。于第4天用酶标仪Bi-Rad3550ELISAreader测定各孔的D值测定波长595n，参考波长655n。按以下公式盘算被检样品对细胞生长的按捺

6、率，并盘算I5050%inhibitinnentratin值。细胞生长按捺率%1实行孔D值/比拟孔D值100%1.6TT法检测化合物对疱疹病毒熏染Ver细胞的庇护作用在96孔平底造就板上，将待测化合物用RPI1640造就基举行2倍系列稀释。共6个稀释度，每孔100l,设两个重复孔。同时设置不含化合物的未熏抱病毒的细胞比拟组和熏抱病毒的病毒比拟组；离心Ver细胞1000r/in，10in，用完全造就基重悬细胞，每孔参加75l4104细胞；熏染HSV的每个稀释度中的两孔参加25l病毒，比拟组参加25l造就基。每孔终体积200l；置37，5%2造就箱中造就，第3天补加100l奇怪培基；第6天将96孔

7、细胞造就板低速离心后1000r/in,10in，吸弃250l养上清，再加20lTT溶液5g/l，37,5%2造就箱中孵育4h摆布，参加20%SDS-50%DF(pH4.7),孵育留宿；第7天用酶标仪Bi-Rad3550ELISAreader测定各孔的D值测定波长595n，参考波长655n，按照下面公式盘算出化合物对HSV-熏染细胞的庇护率,并用插入法盘算E5050%Effetivenentratin值和治疗指数TI(Therapeutiindex)值：细胞庇护率%实行孔D值比拟孔HSV+D值比拟孔HSVD值比拟孔HSV+D值100%并进一步盘算出治疗指数(therapeutiindex，TI)

8、(TI=I50/E50)2效果2.1病毒滴度本室保存的HSV-接种在Ver细胞上的滴度为106.0/l。实行用病毒浓度为80TID50。2.2样品青羊参多糖硫酸酯体外对Ver的毒性作用样品青羊参多糖硫酸酯对Ver的I50值为7170g/l，而阳性比拟AV对50%细胞产生毒性的浓度高于15000g/l见表1，由此可见青羊参多糖硫酸酯对Ver的毒性高于AV。2.3样品青羊参多糖硫酸酯体外对HSV-病毒的按捺作用阳性比拟AV表现出有用的庇护HSV-熏染Ver细胞作用，其E50为5.12g/l，治疗指数TI值为2910。青羊参多糖硫酸酯的E50值别离为69.9g/l，治疗指数为103，见表1。与阳性比

9、拟药物AV比拟，它的治疗指数TI固然偏低，但它对HSV-熏染Ver细胞也表现出较强的庇护作用。表1待测化合物对型单纯疱疹病毒略3讨论比年来,多糖的研究引起了国表里很多学者极大的爱好。自然中性多糖经化学修饰后其抗病毒作用明显加强3。多糖举行硫酸化修饰后，成为阴离子聚合体，带负电荷的硫酸多糖可与带正电荷的V3地区结合，使病毒颗粒不克不及与D4细胞结合4；别的，多糖被硫酸化修饰后，带有很高的阴电荷，可作为一种粘性分子粘附在病毒或细胞外貌，从而非特异性地拦阻了病毒和细胞的交融5，6。比方：牛膝多糖自己无抗病毒活性，硫酸化以后有按捺乙肝病毒和单纯疱疹病毒的活性7；金顶侧耳多糖有必然的抗病毒作用，但活性不

10、大，通过硫酸化修饰后有了显着的抗柯萨奇病毒的活性8。这些都说明硫酸化多糖具有必然的抗病毒的普及意义。青羊参多糖是从萝藦科鹅绒藤属药用植物青羊参的枯燥根中提取分散出来的,具有补肾、镇痉、祛风湿、调治免疫成效等作用9。但作为一种抗病毒药研究较少。本研究将其硫酸化修饰后，举行抗HSV-活性研究。本研究效果表白青羊参多糖硫酸酯毒性较小,在7170g/l以上才对Ver细胞产生显着毒性。动物实行和临床用药表白10，药物在动物体内毒性较低,且大剂量没有显着副作用。其抗HSV-作用固然较无环鸟苷AV低，但在样品不产生毒性范畴内，对HSV-熏染Ver细胞表现出较强的按捺作用。关于青羊参多糖硫酸酯抗病毒的作用机制

11、以及体内抗病毒活性有待进一步深化研究。【参考文献】1arthez,etal.idfviruseinaylvirresistantherpesinfetinJ.Annpharather,1997,31(12):1519.2It,Baha,SatA,etal.Inhibitryeffetfdextransulfateandheparinntherepliatinfhuaniunedfienyvirus(HIV)invitrJ.AntiviralRes,1987,7:361.3Baba,ShlsD,FuauusR,etal.SulfatedplysaharidesasptentinhibitrsfH

12、IV-induedsyneytiufratinJ.JAids,1990,3:493.4辛现良，丁华，耿美玉,等.海洋硫酸多糖911抗艾滋病毒作用及其机理研究-体内对猴免疫缺陷病毒SIV增殖的影响J.中国海洋药物杂志，2000，196：4.5蒋岩，陈春英，裴丽健，等.硫酸酯化箬叶抗HIV-1机制的开端研究J.中华实行和临床病毒学杂志，2000,141：56.6PrattRP,PhillipsD.Sulfatedplysaharidesinhibitlyphyte-t-epithelialtransissinfhuaniundefiienyvirus-1J.BilReprd,1996，541:173.7田庚元,李寿桐,宋麦丽，等.牛膝多糖硫酸酯的