恩诺沙星缓释注射液的研制及在猪体内的药动学研究幻灯片

恩诺沙星缓释注射液的研制及

在猪体内的药动学研究研究生：祝万菊指导教师：邓旭明教授指导小组：高丰副教授阎继业教授Preparationof

EnrofloxacinSustained-releaseInjectionandPharmacokineticsinSwine

前言

缓释制剂系指用药后能在较长时间内持续释放药物以达到长效作用的制剂。抗菌药制成缓释剂后有以下优点：可减少服药次数，提高病患的顺应性；可延长维持有效浓度以上的时间，使杀菌效果更好；有利于降低药物的毒副作用；使血药浓度平稳，避免峰谷现象；可减少用药总剂量，因此可用最小剂量达到最大药效。

恩诺沙星作为第一个畜禽专用的氟喹诺酮类药物，具有抗菌谱广，杀菌活性强，有效浓度低、分布广泛、与其他抗菌药物无交叉耐药性等特点，临床用于预防和治疗禽类、猪、牛及小动物细菌性感染均取得良好效果。

但目前仍普遍使用其常规制剂，给药方案为一日2次连用3天，用药不方便，且浪费人力、时间，若制成长效制剂则可克服上述缺点。

前言

本研究旨在开发一种易于工业化生产，且安全、稳定的注射用溶液型恩诺沙星缓释剂。该缓释剂的研究开发一方面可扩大恩诺沙星的应用范围，提高药效和安全度，减少不良反应；另一方面能够方便养殖户给药，降低饲养成本。因而本研究具有重要的理论意义和实际应用价值。研究的目的和意义主要研究内容1.通过处方筛选、优化，制备恩诺沙星缓释注射液

2.考察制剂的稳定性

3.研究缓释注射液在健康猪体内的药物动力学和生物利用度方法表1三因素三水平表

Tab1ThreeFactorsandthreeLevels

2.处方优化

水平因素A（烟酰胺）B（Na2S2O3）C（EDTA-2Na）1231%2.5%5%0.05%0.1%0.2%0.01%0.025%0.05%表2（L9）33正交表Tab2（L9）33Orthogonaltable处方号A（烟酰胺）B（Na2S2O3）C（EDTA-2Na）①212②313③132④233⑤111⑥221⑦123⑧331⑨322方法结果处方筛选结果

原辅料配伍试验结果：所试9种辅料与恩诺沙星均无明显配伍变化。药液pH值范围预试结果：恩诺沙星在氢氧化钠作用下能溶解，但pH值需达到11.0以上。＊＊延效剂筛选结果：恩诺沙星与PVP配成的溶液颜色、澄明度均较好。

＊

助溶剂筛选结果：加烟酰胺后有较好助溶作用且药液颜色、紫外吸收峰位与未加助溶剂无明显变化。＊结果处方优化结果

表39种处方评分结果Tab3ScoringresultofOptimizingPrescription

处方号pH下降值得分含量下降值得分颜色得分总分①211518②312520③2259④2158⑤28515⑥23510⑦16512⑧2103⑨34512

表4

正交试验的方差分析结果Tab4AnalysisofvarianceforOrthogonalTest

结果

因素自由度均方F值P值主效应A2.111.036.966B291.44429.393.033*C214.7784.750.174交互效应A*B0...B*C0...A*C0...表5B因素各水平间的多重比较Tab5MultipleComparisonsofBetween-LevelsofFactorB结果水平(I)水平(J)均数差值(I-J)P值

差值的95%可信区间下限上限126.333.048*.13712.530

311.000.017*4.80317.19721-6.333.048*-12.530-.137

34.667.083-1.53010.86331-11.000.017*-17.197-4.803

2-4.667.083-10.8631.5301.处方中主药含量的确定依据为保证在减少给药次数后仍能在一定时间维持有效血药浓度，在使用剂量相同时缓释剂一次给药量相当于普通制剂两天给药总剂量，因而本缓释注射液的含量为10%。PVP含量低于10%溶液粘度与水相同，含量过高则有可能导致吸收速度太慢，因此PVP浓度定为10%。讨论讨论2.处方中添加附加成分的理论依据

氟喹诺酮类药物遇金属离子易变色而使药效降低，因此加入金属鏊合剂；恩诺沙星易被氧化变质，且因药液呈碱性，所以加Na2S2O3作抗氧剂。单用氢氧化钠pH值需达到11.0以上恩诺沙星才能完全溶解，碱性太强不符合注射剂要求；而且试验发现在贮存过程中pH值逐渐下降，所以加入烟酰胺既起到助溶作用又能稳定药液的pH值。实验二恩诺沙星缓释注射液的稳定性试验方法

1.初均速法预测有效期

在60、65、70、75、80、85、90℃7个加速稳定性试验温度下，每个加速温度放恩诺沙星缓释注射液样品6支，经12、11、10、9、8、7、6h加速分解后，立即取出于冰浴中终止反应，测定其恩诺沙星含量。

2.稳定性考察试验

方法＊加速试验

将本品三批模拟上市包装，置于温度（40±2）℃、相对湿度（75±5）%的条件下放置六个月，每月取样一次,考查外观性状、澄明度、含量、pH值等项目。＊光加速试验

取本品三批，装入无色透明容器中，放置在光橱内于照度（4500±500）lx的条件下放置10天，于第五、十天取样,考查外观性状、澄明度、含量、pH值等变化情况。＊长期试验取本品三批按上市包装，在温度（25±2）℃，相对湿度（60±5）%的条件下放置12个月。每3个月取样一次，对外观性状、澄明度、含量、pH值等项目进行考查。

结果表不同温度下恩诺沙星分解的初均速组别θ(℃)T/K1/T×103t(h)残存率(c/%)ν0=(100-c%)/tlgν0160333.23.0011299.750.0208-1.6812265338.22.9571199.540.0418-1.3786370343.22.9141099.320.0680-1.1675475348.22.872999.090.1011-0.9952580353.22.831898.840.1450-0.8386685358.22.792798.490.2157-0.6661790363.22.753698.140.3100-0.5086

有效期预测结果

以lgν0对1/T作线性回归，得方程lgν0=12.087-4564.772/T,|r|=0.995。以室温T=298.2K与ν0=（100-90）/t0.9代入回归方程，求得25℃有效期t0.9=23个月。

结果稳定性考查结果

在40℃条件下保存六个月、常温保存一年，恩诺沙星缓释注射液的颜色、澄明度无明显变化，PH值下降幅度不大（<0.3），常温放置含量下降不到1.5%，高温使含量下降速度加快，但仍未超过3%。本品在强光照射下10天颜色即变深，含量下降2-3个百分点。

讨论关于初均速法预测有效期

初均速法取样点在反应初期，可排除反应后期副反应的干扰，且因增加了加速实验的温度数而提高了所推算有效期的精确度；另外采用此法简便，在每个加速稳定性试验温度下，只需在反应初阶段取样分析1次，实验工作量及数据处理均大大减少。应用本方法预测恩诺沙星缓释注射液的有效期为23个月，表明该制剂较稳定，处方合理，质量可靠。关于制剂的稳定性

讨论

本品在室温条件下放置一年各考察指标均十分稳定，由于时间有限没有继续考察至两年，但在高温（40℃）放置六个月的样品色泽、pH值、含量、澄明度等均无明显变化，即相当于本品在室温放置两年内质量稳定。这与有效期预测结果（23个月）是一致的。高温使含量下降速度加快，光照十天颜色明显加深，提示长期贮存应置于阴凉、避光处。实验三恩诺沙星缓释注射液在健康猪体内的药动学研究方法动物分组与给药血样采集血样前处理色谱条件预试样品测定数据处理空白血浆色谱图ChromatigramofblandPlasma

内标色谱图ChromatigramofInternalStandard

结果1.色谱图

结果1.色谱图

药物（恩诺沙星）色谱图ChromatigramofDrug(Enrofloxacin)测定样品色谱图

ChromatigramofDetectedSample结果2.药时曲线图

猪静注、肌注恩诺沙星普通注射液和肌注恩诺沙星缓释注射液的药时曲线图concentration-TimeCurveofenrofloxacinafterintravenousandintrmusculoradministrationtoswines结果参数单位参数值(平均值±标准差，n=6)静注恩诺沙星普通注射液肌注恩诺沙星普通注射液肌注恩诺沙星缓释注射液t1/2Kah

0.415±0.1950.468±0.114t1/2αh0.726±0.1643.036±0.7562.921±0.99t1/2βh9.083±1.1219.460±2.94625.818±6.528﹡﹡Tmaxh

1.347±0.3931.498±0.194Cmaxµg/ml

2.561±0.1522.206±0.555VlL/kg1.795±0.171

VdL/kg4.364±0.565

ClBL·kg-1·h-10.336±0.053

AUCmg·L-1·h30.397±4.89518.397±1.80823.715±3.528﹡﹡F%

60.52±5.9578.02±11.61﹡﹡3.药动学参数

讨论1.恩诺沙星缓释注射液在猪体内的药动学特征

猪肌注恩诺沙星缓释注射液的t1/2Ka为0.468h、Tmax为1.498h，与肌注普通注射液的t1/2Ka0.415h、Tmax1.347h相比无显著性差异；而与国内报道的恩诺沙星混悬液的t1/2Ka1.25h、Tmax5.14h相比则差异显著，说明该缓释剂与普通制剂一样可以迅速达到峰浓度，具速释作用。血药峰值Cmax2.206µg/ml与普通注射液Cmax2.561µg/ml相比也没有显著降低，这是该制剂不同于其它剂型缓释剂的又一特点。

讨论

猪肌注缓释注射液的t1/2β为25.82h，比肌注相同剂量的普通注射液的t1/2β9.46h延长了15h，二者差异极显著，说明缓释注射液的消除速度明显减慢。从药时数据也可以看出，前者在猪体内维持有效浓度的时间显著延长。缓释注射液的AUC和生物利用度与普通注射液相比差异显著，相对生物利用度为128.9%。说明恩诺沙星制成缓释注射液后生物利用度得到提高。

讨论

猪单剂量肌注缓释注射液(10mg/kg)，血药浓度在0.5h即可达到1.42µg/ml，1.5h达高峰。资料显示恩诺沙星对支原体和葡萄球菌的MIC均小于1µg/ml，由此可以推断，肌注本缓释注射液对猪支原体、葡萄球菌感染在0.5h内即可充分发挥治疗效果，具有速效作用。达到峰浓度后缓慢下降，给药后36h血药浓度仍达到0.16µg/ml，可见该缓释剂