病毒的鸡胚培养法专家讲座

病毒鸡胚培养（一）试验目标（二）试验原理（三）试验器材（四）试验方法（五）试验作业病毒的鸡胚培养法专家讲座第1页（一）试验目标1.了解鸡胚培养有哪几个惯用接种方法。2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒操作技术。病毒的鸡胚培养法专家讲座第2页（二）试验原理试验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法，而鸡胚培养更为常见。普通而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，其它动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。病毒的鸡胚培养法专家讲座第3页鸡胚接种技术是养禽业中一个相对新疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期鸡胚接种一些活病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利影响，经过这种方式接种疫苗后孵出雏鸡含有免疫保护力。

病毒的鸡胚培养法专家讲座第4页（三）试验器材1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体鸡胚。从实践看，法氏囊炎病毒反抗体相当敏感，所以要用无母源抗体鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵抗母源抗体作用而得以繁殖致死鸡胚。孵化前鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿度45-60%孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采取9-11日龄活胚接种。病毒的鸡胚培养法专家讲座第5页（四）试验方法1.接种前准备：a.鸡胚准备：选择9-11日龄鸡胚，在照蛋时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管显著区域中，在血管之间间隙划上记号，作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒，再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上竖放于蛋托上。病毒的鸡胚培养法专家讲座第6页鸡胚模式结构1.卵壳2.绒毛尿囊膜3.尿囊腔4.羊水腔5.卵黄囊6.鸡胚胎7.卵白病毒的鸡胚培养法专家讲座第7页b.病毒材料准备：要分离培养病毒材料应是无菌，所以在处理材料过程中，应严格按照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,为到达无菌目标，可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各100-5000IU，置室温中1h处理。病毒的鸡胚培养法专家讲座第8页法氏囊病毒分离取疑似感染病毒法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，重复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准；将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤病毒的鸡胚培养法专家讲座第9页2.接种鸡胚接种方法有几个：绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第10页取10-12日龄鸡胚，照蛋选择血管较少部位做一记号，用磨蛋器磨一于纵轴平行裂痕，小心挑开蛋壳，将白色壳膜用针尖小心挑破，不要伤及血管丰富而透明绒毛尿囊膜，在气室顶端钻一小孔，用滴管贴近小孔，轻轻一吸，绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。绒毛尿囊膜接种绒毛尿囊膜接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜病毒的鸡胚培养法专家讲座第11页

取10-12日龄鸡胚，消毒气室顶上蛋壳，并将气室顶端蛋壳锉一三角形裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕部位蛋壳和壳膜，用灭菌平头镊子刺破尿囊膜，并轻轻夹去羊膜，用小号针头刺进羊膜腔内，注入0.05-0.1ml病毒接种液，以氧化锌胶布封口，滴上溶化固体石蜡。放回孵化器，使蛋直立孵化。羊膜腔接种羊膜腔接种1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜病毒的鸡胚培养法专家讲座第12页选择6-8日龄鸡胚，照蛋检验，划出气室和胎位，并以气室向上竖立在蛋托上，气室端蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔，将注射针头刺过小孔，沿着卵纵轴刺入约3cm，然后注入0.2ml病毒接种液，用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中培养。卵黄囊内接种卵黄囊接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第13页鸡胚各种接种路径1.绒毛尿囊膜接种2.尿囊腔接种3.羊水腔接种4.卵黄囊接种病毒的鸡胚培养法专家讲座第14页绒毛尿囊腔内接种★★绒毛尿囊膜接种羊膜腔接种卵黄囊内接种3.收毒：病毒收毒依据接种路径而定。尿囊液绒毛尿囊膜羊水卵黄液和卵黄