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文档简介

实验二：

核酸的紫外扫描及含量测定实验目的1.了解紫外分光光度计的基本原理并掌握其使用方法。2.掌握使用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和方法。实验原理

核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收。RNA和DNA的紫外吸收峰为260nm。一般在260nm波长下，每毫升含1mgDNA溶液的光吸收值约为0.020，每毫升含1mgRNA溶液的光吸收值为0.022。故测定待测浓度RNA或DNA溶液260nm的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。此法操作简便，迅速。若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质，则测定误差较大，故应设法事先除去。纯净的RNA溶液，其A260/A280≥2；纯净的DNA溶液，其A260/A280≥1.8。

实验器材1.UV-1000型紫外可见分光光度计操作指南：1.打开仪器电源，系统自检，并预热20min。2.选择“光度测量”，按“enter”进入吸光度测量。3.关上暗盒盖，将装参比液的比色皿，推入光路中，按“enter”进入后，系统自动调整投射比为100%和0%。4.关上暗盒盖，将装参比液的比色皿，推入光路中，按“zero”键调使吸光度A为0.000。5.测量样品。将被测溶液推入光路中，待读数稳定后，读取吸光度。6.仪器使用完毕，取出比色皿，洗净、晾干。7.关闭电源开关，拔下电源插头，复原仪器。8.登记《仪器使用记录表》关于比色皿：比色皿的前后有2个光滑面，是用来对准光路的，左右有2个粗糙面，手只能拿比色皿的粗糙面，不能接触光滑面。比色皿的内部的清洗只能用蒸馏水润洗（用洗瓶），不可用卫生纸或其他物品捅进去擦洗，比色皿的2个光滑面一定要保持清洁，如发现有指纹或残液，须用卫生纸轻轻擦拭干净。比色皿是成套发放的，严禁混用，本实验使用的是石英比色皿。使用完毕后先用自来水内外冲洗干净比色皿，再用洗瓶冲洗比色皿的内外表面1次，将其粗糙面朝下斜靠在培养皿中。3.其他器材：试管，试管架、烧杯、卫生纸。实验试剂1.

蒸馏水2.

待测的DNA溶液样品测定：1.取两个比色皿，一个加蒸馏水做空白对照。一个用来加DNA样品。2.取10uL的DNA样品,加入1990uL的蒸馏水稀释200倍

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