花粉的形态观测及生活力测定

本文格式为Word版，下载可任意编辑——花粉的形态观测及生活力测定试验一花粉贮藏及花粉生活力的测定

花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必需对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。因此我们必需把握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术

一、试验目的

把握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。二、试验材料

百合、金鱼草、菊花等花粉。三、仪器及药品

显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。四、试验原理

花粉在低温（0～2℃）、枯燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。

花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）寻常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观测、过

氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的状况作为鉴定花粉生活力高低的标准。

鉴定花粉生活力的方法好多，概括起来主要有如下几种：1．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计厚实状况。此法最确凿，但需时较长，且试验结果易受气候条件的影响。也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发状况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。

2．形态观测法直接在显微镜下观测花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。此法简便易行但确凿性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。

3．染色观测法

1）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（0.3g碘＋1.3g碘化钾溶于100ml蒸馏水）染色后于显微镜下观测，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。

2）TTC染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。在28—30℃的温度下2小时以上(花卉不同染色时间也不同)。

4．培养基发芽法在培养基上进行花粉的人工萌发，鉴定待测花粉萌发率的高低。此法若采用适合的培养基能较确切地测定出花粉的生活力，但不同植物的花粉萌发条件存在较大的差异，所以好多时候测定的结果也只是相对可靠。

五、试验步骤：１．花粉的贮藏：

（１）将采集的花粉进行枯燥（凉干或放入盛有无水氯化钙的枯燥器中枯燥），一般以花粉不相互黏结为度。

（２）将枯燥的花粉装在指形管中（不要太多，一般以五分之一体积或更少为宜），瓶口塞以纱布，瓶外贴以标签，注明花粉种类、采收日期。

（３）将指形管放入无水氯化钙控制一定湿度的枯燥器中，枯燥器置于0～2℃的冰箱内。

２．花粉生活力的测定：

（１）染色观测法——TTC染色法

①配制TTC染色液：称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液（100ml蒸馏水中溶解0.832gNa2HPO4·2H2O和0.273gKH2PO4，pH7.2）中，装入棕色瓶备用。

②制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1～2滴0.5％TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35～40℃条件下净置15～20min。

③观测统计：在显微镜下观测三个不同的视野，凡被染成红色或玫瑰红的都是有生活力的花粉，黄色或不着色者为没有生活力的花粉。

（２）培养基发芽法——固体培养基

①配制培养基：称取1g琼脂，5g蔗糖，量取94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化呈透明状（注意补充水分，以保持培养基的浓度），即配成5%浓度的培养基。同法配制10%、15%、20%浓度的培养基。

②制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片的凹槽内，放置片刻，使其凝固。

③播种花粉：将少量花粉均匀地撒播在培养基上，注意不可过多，否则难以观测。

④培养与观测：将制备好的片子放在垫有潮湿滤纸的培养皿内，于20～22℃的温箱中培养；待花粉萌发后于显微镜下观测并统计发芽率。观测时每片随机取三个视野，统计花粉总数及发芽数，计算平均萌发率（花粉总数不少于100粒）。

六、作业及思考题：１、按下表统计试验结果。

用染色法计算花粉生活力(3-5个视野)。

花粉生活力(％)=有生活力花粉数／观测花粉总数×100

染色法测定结果记载表

各视野中花粉粒数量及生活力平均花其中花粉花其中花其中生活粉