杜仲对去势大鼠股骨重、矿物含量、胫骨抗弯力及血清碱性磷酸酶的影响

杜仲对去势大鼠股骨重、矿物含量、胫骨抗弯力及血清碱性磷酸酶的影响【摘要】目的观察中药杜仲对去势大鼠股骨重、矿物含量、胫骨抗弯力及血清ALP的影响。方法80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组：假手术组、模型组(阴性对照组)、阿尔法骨化醇组(阳性对照组)和杜仲组(实验组)。除假手术组打开腹腔，暴露卵巢后即缝合外，其他3组均摘除双侧卵巢。手术后饲喂10d，阳性对照组和实验组分别用ALF软胶囊或盐杜仲冲剂灌胃，1次/d，另外2组正常饲养。3个月后，取各组股骨测定股骨重、矿物含量，取胫骨测定抗弯力，取血清测定碱性磷酸酶(ALP)活性。结果与假手术组比较，模型组的股骨重显着降低()，而阳性对照组和实验组股骨重无明显变化()；实验组股骨矿物含量、ALP活性和胫骨抗弯力显着高于模型组()，阳性对照组ALP活性显着低于模型组()和假手术组()。结论盐杜仲可抑制骨吸收，提高骨的强度，对去势大鼠骨质疏松具有一定的防治作用。

【关键词】去势大鼠杜仲抗弯力碱性磷酸酶

Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofEucommiaBarkonwghtoffemur,mineralcontent,anti-bendstrengthoftibiaeandserumALPinovariectomized(ovx)rats.Methods80femalSDratsweredividedinto4groups:sham,negatire,positive,andexperimentalgroups.Theratsineachgroupwereovariectomizedexceptshamoperationgroup.10daysafteroperation,intragastricadministrationwasusedtoratsinpositiveandexperimentalgroupswithAlfacalcidol(ALF)andEucommiaBarkrespectivelyonceaday.After3months,femurswereseparatedandwghtandmineralcontentweredetermined,andanti-bendstrengthoftibiaeandserumalkalinephosphatase(ALP)weremeasuredineachgroup.ResultsTheweightoffemurinexperimentalgroupwasdecreasedobviously(),andpositiveandexperimentalgroupshadnosignificantchange()ascomparedwithshamgroup.Inexperimentalgroup,mineralcontent，activityofserumALPandanti-bendstrengthoftibiaewereincreasedcomparedtonegativegroup(),meanwhileactivityofALPinpositivegroupwaslowerthannegative()andshamgroups().ConclusionEucommiaBarkcaninhibitboneabsorptionandelevatethebonestrength,andhasprotetiveandtherapeuticeffectsonosteoporosisofovariectomizedrats.

Keywords：Ovxrat;EucommiaBark;Anti-bendstrength;ALP

骨质疏松是一个世界范围的、日趋严重的影响健康的重要问题。因骨质疏松引起的严重后果——骨折和巨额的医疗费用受到了的高度重视［1］。十多年来，国内外开展了中医中药及中西医结合防治骨质疏松症的研究，取得了一定的进展，但大多数研究是成方及复方对骨质疏松症的防治作用，单味中药对骨质疏松症的研究不多。本实验通过观察补肾中药杜仲对去势大鼠骨质疏松部分指标的影响，探讨目前防治骨质疏松症最常用中药杜仲对骨质疏松的防治作用。

1材料

动物健康4月龄SD雌性大鼠，体重250～290g，由南通大学实验动物中心提供［实验动物使用许可证号：SYXK(苏)2007-0021］。

药物阿尔法骨化醇(Alfacalcidol，ALF)软胶囊(江苏南通华山药业有限公司出品，μg/粒，生产批号：070403)，盐杜仲。

试剂与仪器血清碱性磷酸酶(ALP)活力测定试剂盒。IMADA型数显推拉力计；UV1200紫外/可见光分光光度计；台式离心机。

2方法

动物分组SD大鼠随机分成4组，每组20只，即假手术组、模型组(阴性对照组)、阿尔法骨化醇组(阳性对照组)和杜仲组(实验组)。

动物手术处理腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠，阴性对照、阳性对照和实验组大鼠在无菌下打开腹腔，摘除卵巢，腹腔分层缝合，肌注青霉素(2万单位/只)。假手术组大鼠除不摘除卵巢外，手术操作均与其他组相同。

药物灌胃手术大鼠饲喂10d后，阳性对照和实验组开始进行药物灌胃。阳性对照组行ALF灌胃，按照每3粒灌10只大鼠的计量，蒸馏水加热融化后灌胃；实验组行盐杜仲灌胃，按照每包灌10只大鼠的计量，蒸馏水冲溶灌胃，两组大鼠灌胃均1次/d，连续3个月，其他组大鼠正常饲养。

股骨重测定各组大鼠称重，然后取左侧股骨，剔除骨表面软，称重。

骨矿物含量测定取各组大鼠股骨，剔除骨表面软组织，于三氯甲烷∶甲醇=2∶1溶液中脱脂72h，置Muffer炉中600℃加热30min，冷却至200℃时取出，置干燥器中冷却至室温，精密称重直至恒重。再次置Muffer炉中700～800℃下灰化12h，降温后取出置干燥器中30min，称重，重复灰化至恒重，记灰分重。

抗弯力测定取各组大鼠胫骨，剔除骨表面软组织，置推拉力计模具上，模具支架间距3cm，自中点处下压，记录胫骨断裂时压力。

血清碱性磷酸酶(ALP)活力测定取各组大鼠外周血，凝固后10000r/min离心分离血清。ALP测定采用试剂盒进行，具体步骤：血清10μl，加入试剂一(缓冲液)100μl，试剂二(基质液)100μl，混匀，37℃水浴15min，加入试剂三(显色液)300μl，混匀后520nm比色，得ALP活性单位值(金氏单位)。

采用Excelt检验方法分析统计，所有数据均以±s表示，检验水准α=。

3结果

杜仲对股骨重及矿物含量的影响与假手术组大鼠比较，模型组大鼠的股骨重显着下降，说明骨量丧失较为明显，而阳性对照组大鼠和实验组大鼠的股骨重与假手术组没有显着差别。矿物含量的数据显示模型组大鼠与假手术组无显着区别，而实验组与模型组比较，矿物含量显着上升，而阳性对照组的变化则不显着。

杜仲对胫骨抗弯力的影响测定数据表明，杜仲对实验组大鼠胫骨抗弯力具有显着增强作用，这种增强作用甚至超过了假手术组，说明杜仲对骨强度具有显着影响。

杜仲对血清ALP的影响测定数据显示，实验组大鼠血清ALP活性明显高于模型组，而阳性对照组则明显低于模型组和假手术组，模型组与假手术组无显着差别。表1各组大鼠测定值与模型组比较，*P；与假手术组比较，△,△△

4讨论

使用去势大鼠模拟人类中女性卵巢功能降低所引起的骨质疏松症已成为学术界最多的动物模型［2］。利用模型动物，不仅有助于研究OP发生的分子机理，还有助于进行药物干预和治疗的机理探讨［3］。因此本实验选择了去势大鼠动物模型，以上治疗骨质疏松的药物阿尔法骨化醇(ALF)为阳性对照组［4，5］，观察了杜仲对OP的干预效果。

从测定的几项指标来看，杜仲对骨质疏松具有一定的防治作用，但与ALF的作用比较，有几点不同：①数据显示，去势大鼠体重明显高于假手术组()，这一点与田茂友等［6］报道有所不同而与YinJ等［3］报道相同，说明雌激素变化对体重的影响较大。比较ALF和杜仲，ALF对去势大鼠体重增加的作用有较为明显的抑制作用，但盐杜仲却没有显着影响。②研究发现，去势动物股骨重显着降低，而骨矿物含量没有显着差异，说明去势大鼠的骨量丧失主要为有机物的丧失，丧失的有机物为何种物质有待于进一步分析研究。杜仲对骨矿物含量的提升具有较明显的作用，而ALF却没有。③骨生物力学中的抗弯力是一项客观反映骨强度的综合指标，是评价各种抗骨丢失措施的重要指标之一［7］。大多数学者认为对骨质疏松的干预不但要重视骨量，更应该关注骨的质量，因为骨质疏松最终的后果是因为骨的脆性增加而导致骨折。本文研究发现，假手术组和模型组的抗弯力无差别，ALF对抗弯力的影响也无显着性，而杜仲制剂却能够显着提高骨抗弯力,这不仅表现在与模型组的比较上，也表现在与假手术组的比较上。由于本文杜仲实验是在去势大鼠组进行的，因此该结果暗示杜仲对非去势大鼠骨强度可能具有更为显着的增强作用，当然这还有待于进一步实验加以证实。④大量研究证实，碱性磷酸酶由成骨细胞产生,富含于胞浆中,部分ALP分泌至血液中使血清ALP明显增加。ALP是骨重建活跃性和成骨细胞活动性的指征，它既可做为成骨细胞的功能标记物,又可反映其分化成熟程度［8，9］。本文实验观察到，ALF明显降低了模型组的血清ALP，而杜仲却显着提高了血清ALP活性。

上述4点提示，杜仲对去势大鼠骨质疏松的作用机理与ALF存在着差异。作为单味中药，杜仲对机体骨代谢的调节作用可能仅仅作用于某些环节，因此对防治骨质疏松症仍有局限性。杜仲发挥作用的有效组分或部位，及对骨代谢调节的分子机制还有待于进一步研究。

【参考文献】

［1］邱明才.骨质疏松研究的现状与展望［J］.中华杂志，2001,81(14):833.

［2］RussellTT,AvudaiappanM,SutadaL,etal.JeanDS.Animalmodelsforosteoporosis［J］.ReviewsinEndocrine&MetabolicDisorders2001，2:117.

［3］YinJ,TezukaY,KoudaK,etal.AntiosteoporoticactivityofthewaterextractofDioscoreaspongiosa［J］.Biol.Pharm.Bull.2004,27(4):583.

［4］ShiraishiA,ItoM,HayakawaN,KubotaN,KuboderaN,OgataE.CalciumsupplementationdoesnotreproducethepharmacologicalefficacyofAlfacalcidolforthetreatmentofosteoporosisinrats［J］.CalcifTissueInt，2006,78:152.

［5］IwamotoJ,SekiA,TakedaT,etal.CompaarativeeffectsofAlendronateandAlfacalcidoloncancellousandcorticalbonemassandbonemechanicalpropertiesinovariectomizedrats［J］.Exp.Anim.2006,55(4):357.

［6］田茂友，李洪洋.去卵巢大鼠骨质疏松模型研究［J］.预防医学，2007，34(12):2239.

［7］王成学，谷贵山，陈塑寰，等.去卵巢所致骨质疏松大鼠骨压缩与冲击力学性能实验研究［J］.中国老年学杂志，2007，27(14):1347.