布病实验室技术培训安

布病病原学及实验室诊断

陕西省CDC鼠布生防科·安翠红布鲁氏菌病布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起传染－变态反应性的人畜共患传染病。

布鲁氏菌病简称布病。布鲁氏菌简称为布氏菌。

布病病原学及实验室检验123布氏菌的生物学特性布氏菌的抗原及毒力布病实验室检验发现和分类位置31.1抵抗力31.3形态和培养特征1.2布鲁氏菌菌的生物学特性1

1.1

布氏菌的发现

1887年英国军医Bruce首先从死于“马耳他热”的英国士兵的脾脏中分离出羊种布氏菌。

1.1布鲁氏菌的分类学位置

微生物分类学家将布氏菌归为布鲁氏菌属（Brucella），下分6个种19个生物型。分类羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型；牛种布氏菌（Br.abortus）1，2，3，4，5，6，7，9型；猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型；沙漠森林鼠种布氏菌（Br.neotemae）；绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）；犬种布氏菌（Br.canis）。陕西省布鲁氏菌病病原学调查分析自1952年起，在人畜间共分离出3个种233株布鲁氏菌，其中羊种菌227株，占总数的97.4%。牛种3株、犬种3株。1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型。陕西省是以羊型菌为主、牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区。流行优势种随时间推移发生了变化。1.2形态和培养特征布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的革兰氏染色阴性菌。柯氏染色，布氏菌染成红色，其他菌染成绿色或蓝色。宽0.3～0.6µm，长0.6～1.5µm。无芽孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。一般说来，羊种菌最小，牛种菌次之，猪种菌最大。1.2培养特性营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。1.3抵抗力对物理因子的抵抗力对化学因子的抵抗力不同环境中的抵抗能力对抗生素的敏感性不同温度对布鲁氏菌影响对物理因子的抵抗力布鲁氏菌对消毒剂的抵抗能力对化学因子的抵抗力不同环境中的抵抗能力

现已荒证明受，布见鲁氏患菌对撕四环捷素最县敏感厉，其绞次是某链霉征素，毫而对衰枯草袋杆菌波肽、多孩黏菌烘素B、多宾黏菌爬素M素等晶有很戚强的箭抵抗撑力。对抗股生素辅的敏鼻感性布氏搭菌的弃抗原栽、毒防力布氏菌的抗原、内毒素32.1布氏菌的毒力2.22布氏舰菌的毒抗原扩成分倦十分巩复杂害，存勉在A、M、G成分网。A对牛站种布骡氏菌甚有特咱异性绑，M对羊祥种布长氏菌不有特吵异性馒，G为两使种菌免共有谨。还葵与多缎种细积菌存搭在共宜同抗漂原，仗因而贸有血钞清交便叉反贩应。忘布氏恩菌不遭产生妈外毒既素，正只产士生内林毒素顿，有糟致热唇、致塑炎作我用，善可导索致休基克。布氏菌的抗原及内毒素32.1.1从种辞上来竖说，娱羊种喘毒力杆最强或，猪贸种和忽牛种突次之资，犬译种的赤毒力期很弱市，几顺乎不铅引起腔人致胁病。布氏菌的毒力32.1.2由于盗菌种桂毒力湾等因茄素的唐不同访，患蚀病后方的临返床表佣现也自不完帐全一臭样。羊往种布醉鲁氏抬菌的六毒力窗最强,患者轧中毒牲症状荷严重柄，多挂有典鹅型的幼发烧裁、多店汗、依头痛捡、虚驳弱、面关节兼痛、腰肝脾顿及睾养丸肿羞大等朗急性伴症状棉。猪种妖、牛稿种次傅之。犬种按的毒授力很亡弱，大几乎壳不引酒起人车致病留。布氏乖菌实蜡验室党检验3细菌学检验33.1血清学检验3.2诊断害布病晕的金食标准诵。3.门1.默1实验剧室要通求布氏罪菌的技分离夺培养斩要在催生物踪蝶安全医二级裙以上拒实验证室中提进行潜。布氏抓菌是乐高致爹病性范病原由微生亚物，屡从危蔽害程狡度来咸说为采第二涝类病淘原微陷生物龟。细菌学检验33.13.威1.摆2方法采样当（采系血）双相猎培养母基菌株庙鉴定真（拣菌落楚形态丑观察矛、涂册片、纹染色遥、镜窜检布欠氏菌吃诊断熊血清俘玻片剃凝集劈燕试验撞）种型饮鉴定组（CO2需要值与否傻、H2S的产桨生的尽测定科、染蠢料抑烘菌试匹验、可单项略因子烈血清赢凝集暗试验蔬、噬旦菌体奴裂解茅试验特等等狗）细菌学检验33.13.敌1.香3布氏恭菌培银养特径性布氏界菌是吉需氧稻或微驶需氧副菌生长览缓慢亿，尤染其初厚代分任离牛种艇部分懂型别古、绵饶羊附惹睾种匪布氏维菌需宏在5-府10启%备CO2环境便中培敢养新长左出的图菌落课无色馆透明号，光妹滑圆通形，预突起线，均拥质，集直径1-驼2m辆m液体要培养盘均匀扑混浊帮，无占菌膜粗糙闭型菌歪落较里大，赠生长需快布鲁培氏菌芝培养饿材料3.闭1.东4布氏希菌培爽养检鹊查材需料人或辫动物夸的全志血、动物州流产庆胎儿唇（胎暴儿的些肝脏全、肺况、胃胡内容创物）动物史脏器垄、动驶物胎卖盘、防关节膜液、作阴道卫分泌佳物等新鲜乖乳汁布鲁旁氏菌屋的培墙养3.扩1.趟5样品畅的采辣集血培寺养：崭急性表期、蛇体温军反应骄明显稠和血搂清滴沉度高垒的病搏人，堡血培暖养阳健性率饱高血培枯养阳送性率倘与病甘期、欣体温生反应剧、临夕床表堤现以鲁及血烫清滴幼度等赵有关威系骨髓蜡培养饰：慢魂性期否病人酒骨髓抖培养良的阳厕性率拣比血环液高从胸凉腔积运液、陵脓肿膨和关因节液级、痰费、乳叛、阴绝道分暗泌物流产举胎盘纽奉中分吨离到顶布氏亮菌新鲜叼乳汁布氏宜菌特重异的减油滴敌样菌无落布氏图琼脂蚊布鲁规氏菌比菌落血平环皿据布氏思菌菌乒落布氏沾菌革看兰染市色3.撕1.轿6布氏址菌鉴中定程杂序分离醉培养纯分黄离传铁代玻片宾凝集挪初步狼鉴定弃，阳薯性血夸清、虚因子压血清订凝集H2资S产生互试验成，CO木2培养赵依赖葬试验噬菌琴体裂束解试娱验染料歪抑菌淹试验PC狠R检测其他债方法建检测拳生亲化测钥定域脂肪沉酸分跟析PF地GE等布氏否菌噬械菌体我国19种81年起煤从国照外引奏进布踪蝶氏菌脾分型绘噬菌烘体，盘对鉴锦定布拒氏菌鉴有良洁好使确用价券值，猴可以推将布影氏菌箩鉴定孩到种目前烦使用袖的噬阻菌体僵有TbFiBK2WbR姻R/逮O靠R盘/C噬菌荡体对盒布氏岩菌的霜裂解羊种射布氏片菌噬椒菌体警裂解分离半培养互基商用概培养吗基布氏办琼脂住布逼氏肉鞭汤制备航培养川基肝浸辛液琼础脂血琼杜脂培套养基胰蛋毁白眎裁琼脂袍培养洗基半固吐体培居养基选择择性培汗养基均添加权剂（陈多种剧抗生绕素）商品轧添加掩剂多粘辣菌素B杆菌角肽得放颤线菌花酮穿制也霉菌蜘素注意幸：PH岁7楚.2，琼胶脂适恨量，充适当免容器布氏玩菌培谅养鉴守定新方京法的驴应用细菌正生化括鉴线定系脂统PC夕R鉴定OM屯P3舅1AM阶OS卧-P墙CR双向悼血培俱养瓶血清学检验3.23.酒2.袖1血清塔学诊淘断的棒意义3.鞋2.营2针对壶布病思进行测的检聋验3.柜2.稍3血清称样本邻的采胳集和跑保存3.慰2.吵1血清苏学诊恨断的置意义人的笼布病挥诊断旅方法开：综鲜合性联诊断番（1）流遥行病诸学接翠触史霸：密槐切接档触家似畜、缺野生单动物垂（观血赏动捧物）掏、畜扇产品燃、布定氏菌洪培养降物等跳或生插活在额疫区砖内的迎居民（2）临平床症达状和桥体征（3）实跨验室检检查苍：病飞原菌吊分离辟、试吗管凝骗集试头验、贝补体根结合听试验愤、抗仪人球者蛋白童试验具备动（1）、旦（2）和想（3）项期中的艇任何政一项贝检查在阳性凡即可夫确定优为布这病病似人3.衰2.哗2针对专布病票进行扮的检波验实验大室检白查阳货性判菌定标渡准屿（1）病酬原菌畜分离围：检研出布巧鲁氏粮菌侵（2）试绢管凝目集试允验：1：10捡0（++）及桂以上技（3）补惰体结峡合试孩验：1：10（++）及纯以上域（4）抗邀人球趴蛋白趋试验壮：1：40吵0（++）及舒以上伯（5）虎法红、去平板唉凝集亲试验搬：出寇现可刃见凝岛集有（6）皮烛内变话态反层应：陡皮试剂后24、48小时质分别现各观愤察一辅次,皮肤腾红肿猾范围昂有一劫次在2.０×2罪.０厘服米及填以上庄（或冷４.０平垃方厘轿米及蓄以上蹲）虎红呼、平污板凝类集试共验和糟皮内韵变态港反应叶供初魔筛试询验用对已吐确诊稼的慢悲性病漠人和昆接种段过菌吴苗的透人，窗应以枝临床戚症状历为主聚要依浸据，王血清泪学试递验效若价高茧低，京皮内库变态林反应聋强弱运供参汇考布氏很菌的杯血清敞学诊膨断方猫法试管颜凝集退试验(S对AT寻)虎红阻玻片予凝集着试验(R顽BP债T)含巯物基化铃物处配理血拳清后斜的凝坐集试最验（2M毒E试验唤）抗球烦蛋白委试验(Co洒om婆b`厨s试验)补体相结合秆试验(C配FT肃)乳环婆凝集稳试验(M番RT纽奉)酶联润免疫始吸附敌试验(E贴LI倍SA霉)金标差法荧光踏偏振养方法（FP党A）3.伏2.推2.暗1、虎派红玻毅片凝舟集实涂验原理全：利标用酸惩性带绩色的动抗原星与被竖检血污清作键用时音能抑谈制血窗清中呜的Ig品M类抗定体的种凝集检活性临，主搭要检记查血茶清中搁的Ig拒G类抗抢体。纪评毕价：抛简便旧快速窗、容稼易操亭作，洪适用以于基碗层大骄面积陈检疫董，容子易出鼠现假跑阳性房诚，结表果仅歌供参脉考，停不能疼作为犯确诊弓依据之。布病弹虎红联玻片析凝集妙试剂试剂贯与器雁材虎红酒平板液凝集慕抗原钥、被拍检血桑清、毛清洁币脱脂茂玻片扰、微偷量移进液器酬、枪剧头。方法林：在音玻片质上加0.旁03监ml被检汉血清简，然盐后加握入虎阶红平尽板抗借原0.很03湾ml，充义分混怨匀，5m哨in之内贴观察右结果廉。结果于判定骡：出驾现可另见的淹凝集晴反应识就判逢为阳膨性；歌否则武就为茄阴性烦。评价辽：简孔便快享速、剃容易咐操作安，漏挎检率模极低卖，适草用于峡基层文大面肯积检墓疫；施容易毕出现答假阳励性，裕临床挖上需副要借影助SA夺T来确忆认。注意族事项血清壮静止负的温晴度和叼时间励对实捕验结穿果有途很大纪的影仁响，阴在一聋定的慎时间相和温蛾度范岂围内鬼，防屈治时旬间越爱长，歇温度换越高就，假生阳性谊率越睬低；患者闪空腹吩血清蹄出现攻假阳册性少鼓；凡是燃试验次中凝储集颗糠粒不稻规则仿，大零小不猫匀，申片状辰或絮疑状，似凝集日不清货澈者块，一蝴般为难假阳挑性，茧否则葡凝集轿颗粒上规则镰，大我小均滴匀，积凝集浇清澈惕者，影一般沿与SA锦T结果纯相符随，为提阳性妇。原理吐：布锯氏菌栗侵入色机体厨后，书就会腹刺激俯机体辆产生解特异雨性抗梨体，港这种姿抗体区可与罪相应锐的布掌氏菌乒抗原扇发生挑特异态性结伙合，洋在电慨解质劳的作暖用下诱，就追会形姜成肉卫眼可梁见的尾凝集膀反应奶，也岔就是贡用已状知抗疤原查检未知跳抗体耽。3.稻2.脉2.浊2、彩试管铺凝集糟试验3.耳2.番2.向2、法试管容凝集敬试验试管鹊凝集影试验阴性布氏大菌试已管凝售集阳性布氏臂菌试正管凝醋集抗滤原器材鞋与试律剂实验壳凝集通抗原热、被野检血换清、漆生理刊盐水移液泽器、堵吸管搭、凝壤集管共、试梁管架毁、稀落释抗贼原用奇的玻度璃杯屈、37度温后箱。方法为：每膨份血携清取9支小废试管膝，放方于试归管架嘉上。血清胀稀释稀释敌抗原恰后；冰加入比抗原温育18赖-2侨2小时室温呢放置2小时樱后观考察结夜果比浊防管配逼置0.钥2m搞l血清2.陕3m竭l盐水0.料5m员l抗原05削ml弃去2.30.50.50.50.50.50.50.50.50.5ml盐水1:听16挎00比浊管的制备

—++++++++++生理盐水（ml）0.000.250.500.751.00稀释抗原（ml）1.000.750.500.250.001.000.750.500.250.250.500.751.001.001.001.001.00结果莲判定袜：根据切各管丽中上勺层液辰体的抖清亮穿度记嫩录凝凝集反渗应程头度（告滴度均），浊特别习是50破%清亮茎度（++）对凭判定橡结果纸关系闷较大珍，一微定要便与比酿浊管惯对比萌判定顺。++止++液体踢完全允透明贪，菌顿体成摔伞状剖沉淀缝或块躬状颗煌粒状野沉淀模，呈10面0%凝集产。++唇+液体顷近于凡完全搜透明蛋，菌采体成情伞状则沉淀蚊，呈75蚊%凝集般。++液体坊略微刚透明抵，菌接体呈图较薄剂伞状飘沉淀后，呈50男%凝集蓬。+液体丝式不透栽明，葛管底蹈有很施不明父显的宿伞状霉沉淀炼，呈25视%凝集际。—液体侮不透饺明，伶无伞聋状沉贯淀。效价决以产坛生50融%凝集强的血最清最必高稀环释倍腿数为洪受检未血清猪的效代价。血清脚对照掩为清润亮透组明无融沉淀乒，抗离原对游照为溪均匀片浑浊战，两计种对烧照管吊成立学，才质可判己定试怠验管聋，否厦则重明做。人的回诊断姨标准各：1:气10露0+效+为阳依性，1:丧50赏++为可削疑。试管舒凝集摊实验蛇的评捐价实验碧室诊镜断标周准之粱一滴度1︰坚10孙0及以膏上或驶病程毯一年转以上求者滴袍度为1︰煮50及以独上为鹿阳性特异查好，远实用侵性、帝敏感制性强主要鸦检查脱血清渡中的Ig浙G和Ig败M，适蝴合于甘急性哭期病税人的躁诊断蚀。缺点胞：有胶前带饺现象杜，有扮时出衡现假显阴性芦结果钢；长窃生一驼定的父交叉探反应奸；出撕结果氏慢，介需要番两天注意喷事项受检洲血清细应新避鲜、夜无溶单血、呈无污握染，登存放束血清玩处温矩度不千能超梁过10庙℃，采匠血后殿应于3-桑4日内刮进行态检查滋，因测放置武时间蜓过长异可能丘会导亮致血择清效钢价降印低。每份酿血清怪和抗贺原要街有对扑照。个别纯血清狡会出车现前绩带现艇象，详建议胁多做膛几个参管，馋多采运用几犬个稀葛释度韵。3.浩2.麻2.郑3、抗再人球概蛋白蛇实验也（Co柄om踢b’拣s）原理腐：机幅体受早布氏炒菌抗闲原刺到激后拨可产痒生“载完全则抗体群”和拌“不乎完全略抗体壳”。屿不完根全抗畅体可捡与相胳应抗留原结妄合，昼但不冶出现毯可见戚反应凳。若幻玉将预饿测不扎完全北抗体到的人仍血清无球蛋屠白作酒为抗等原，聚注射足于另钞一种讲动物阵（常斤用家参兔）桑制成损抗球劫蛋白供（抗Ig乔G、Ig昆A、Ig乳M）的趋抗体炭，再撕将此押球蛋丢白抗渴体加阻入到卸抗原轰与不担完全危抗体钥复合服体中谷，即营可出遵现可院见反吼应。腊分为诉两个睛阶段:①不完著全抗浅体与缴相应具抗原尝结合冷为不性可见粱阶段②抗原蒜抗体烈复合躁物有速抗球铺蛋白馆抗体翅凝集桌而形针成可谷见反吃应评价麦：所暖查抗惹体主雪要是Ig替G、Ig懂A；可悲以作则为早漏期和芒追溯鞭诊断吉；适僻用于铃亚急份性和吹慢性友病人约；操姐作复砖杂，拢耗时寸长，众一般铃不作牌为常妄规检执查项框目。器材腾及试苦剂试剂山：试哲管凝湾集抗伤原、刘被检仆血清指、抗忆被检智对象悬的血楼清球炼蛋白签抗体额、生贪理盐巡寿水器材伐：普由通离息心机垄、温孤箱、1m凤l及10拿ml吸管晌。方法傅：试毙管凝敞集试唐验阶昂段抗球全蛋白扑反应萌阶段邮吸梢取上咽项试肉验的肯可疑次管和牧全部杜阴性圆管，40勉00转/分离题心15分钟遗，反艳复洗达涤3次。波向各具管中伤加入碎生理氧盐水0.捏5m创l，混售匀，斗再向福各管趟中加0.墙5m牵l一定慈稀释讲度的滩抗球支蛋白视血清食，将宴反应委管置37悟℃温箱同中20笼-2爪2小时哪，取已出室琴温放缝置2小时把后判脆定结陷果。判定贯标准捏同试扔管凝复集试绢验对照被检粉血清碎对照拒（被包检血增清+盐水燥）试管兆凝集蚀抗原夕对照俩（试际管抗端原+盐水谋）抗球秀蛋白平血清矩加生芬理盐燥水对观照抗球家蛋白光血清隆加试太管凝旋集抗罪原对赚照抗球尘蛋白墙血清钥加被排检血清清对道照对照搭全部贸为阴储性时沉，实泥验才补有意晨义我国友试行摆的用算于诊诸断人劝布病还标准1:馋40析0及以于上滴地度。注意躲事项在进低行Co勤om陡b’篮s试验跳时，黎洗涤缓抗原障很重灯要，挤如不沈认真拨洗涤奏，在狸抗原闹表面督上吸物附血衬清中拍的某辈些其结他蛋回白物巨质，桐会干槐扰下虫一步现加入徐抗球叶蛋白袜血清酒的反唐应，样掩盖绣真正仁结果图。一般秘采用汤加入袭抗球膏蛋白蛮血清1:牲20蹄-1孙:5煮0之间誓的稀民释度生。评价（1）布早氏菌售感染赢后，标约在15天出限现不咽完全舒抗体跃，3个月框左右窄达到拌高峰耍。可独持续谣一年导左右骄。该塞实验纯可作株为早辱期和茅追溯但诊断薄。（2）该胆试验往特异订性较刺强，锤尤其酱适用废于诊畅断亚掏急性债和慢添性病背人，肥所查匙抗体怕主要誓为Ig棋G、Ig算A类。（3）一仇般不筝作为羽常规扑项目吓，在量试管刷凝集跌试验恰为可倡疑，岗患者己又处屠于慢娱性期环时，忘可考挨虑抗册球蛋拒白试自验予生以诊郊断。3.花2.迫2.畜4、布度氏菌桐补体霜结合时试验原理产：绵铜羊红企细胞呼和溶施血素亮可以幅形成迈结合折物，搜在补挠体的诱作用冲下，堆发生狂溶血爽。在兆反应帆体系促中，纯他们减作为顶指示播系统垂，与皮布氏厅菌的汉特异士性抗哨原、眠抗体淋复合你物竞送争结骆合补改体。瞒如果垫发生脾溶血瓣，说扒明血闯清中汁没有紧特异抵性抗坏体，杯判为彼阴性凯，即醋不是东布病跳患者姻。评价背：主登要检弱查Ig亚G类抗粗体，直特异扫性强殃，适错用于隐各型波各期