免疫球蛋白检测

关于免疫球蛋白检测第1页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三概念免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：是由浆细胞合成和

分泌的一组具有抗体活性、化学结构与抗体相似的蛋白质Ig主要存在于血液中，约占血浆蛋白总量的20%，也可存

在于尿液，脑脊液等体液及外分泌液中Ig含量：血清IgG、IgA、IgM：g/L，IgD、IgE：mg/L

体液IgG、IgA、IgM：mg/L检测意义：反应机体的免疫功能、免疫缺陷病、自身免疫病、免疫增殖性疾病的诊断和治疗第2页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三一、免疫球蛋白的异质性（一）免疫球蛋白的类型（二）免疫球蛋白的多样性（三）免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的功能第一节免疫球蛋白的生物学功能第3页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三免疫球蛋白的基本结构

四肽链分子，即由两条相同的重链和两条相同的轻链通过链间二硫键连接而成的免疫球蛋白单体，呈“Y”字形。第4页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三可变区和恒定区：氨基酸序列变化第5页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三可变区（variableregion，V区）：位于免疫球蛋白分子N端的氨基酸组成和排列有较大差异（占轻链1/2和重链1/4或1/5），决定抗体与抗原结合的特异性。恒定区（constantregion，C区)：位于免疫球蛋白分子的C端的氨基酸组成和排列比较恒定（占轻链1/2和重链3/4或4/5），介导免疫球蛋白多种生物学功能。铰链区：位于CH1和CH2之间，含丰富的脯氨酸，易伸展弯曲，有利于免疫球蛋白V区与抗原互补性结合，有利于暴露补体结合位点；连接免疫球蛋白Fab段和Fc段，易被木瓜蛋白酶和胃蛋白酶水解。第6页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三高变区（hypervariableregion,HVR）：在VL和VH中各有三个区域的氨基酸组成和排列顺序特别易变化，分别用HVR1，HVR2，HVR3表示。互补决定区（complementarity-determiningregion,CDR）：高变区是抗体与抗原（表位）特异性结合的位置，所以又称为CDR。高变区=互补决定区骨架区（frameworkregion,FR）：V区中非HVR部位的氨基酸组成和排列相对保守，此为FR。VH和VL各有4个FR。第7页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!恒定区可变区高变区骨架区第8页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!第9页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三类（class）：根据CH不同Ig分5类：

IgG(γ)、IgA(α)、IgM(μ)、IgD(δ)、IgE(ε)

亚类：IgG1-G4；IgA1-A2；IgM1-M2。型（type）：根据CL不同Ig分为两个型：

κ型和λ型

亚型：λ型有λ1、λ2、λ3、λ4四个亚型

一、免疫球蛋白的异质性

（一）免疫球蛋白的类型第10页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第11页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（二）免疫球蛋白的多样性第12页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三多样性抗原的存在是导致免疫球蛋白异质性（即特异性）的外源因素，是免疫球蛋白异质性的物质基础。抗体的这种异质性，反应机体对抗原精细结构的识别和应答。第13页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（三）免疫球蛋白的血清型——内源性因素所致免疫球蛋白异质性免疫球蛋白既可与相应的抗原发生特异性结合，本身又可作为抗原，激发机体产生特异性免疫应答。免疫球蛋白有3种不同的血清型(1)同种型(2)同种异型(3)独特型第14页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三免疫球蛋白的双重身份第15页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三同种型（isotype）指同一种属所有个体的免疫球蛋白分子共有的抗原特异性标志，位于免疫球蛋白C区。为种属标志（颜色不一样）第16页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三同种异型（allotype）指同一种属但不同个体来源的免疫球蛋白C区分子所具有的不同的抗原特异性标志。为个体标志

（花纹不一样）第17页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三独特型（idiotype）

即使是同一种属、同一个体来源的免疫球蛋白分子，其免疫原性亦不尽相同，称为独特型，其决定簇又称为独特位，主要存在于免疫球蛋白V区。第18页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第19页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三二、免疫球蛋白的功能免疫球蛋白V区的功能：特异性识别结合抗原（主要功能）

抗原结合价：免疫球蛋白结合抗原表位的个数

单体免疫球蛋白可结合2个抗原表位，为双价；分泌型IgA为4价五聚体IgM由于立体构型的空间位阻，一般只能结合五个抗原表位，为5价

第20页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三免疫球蛋白的V区特异性识别结合抗原后，在体内可结合病原微生物及其产物，发挥以下作用：（1）中和毒素

（2）阻断病原体入侵

（3）清除病原微生物（4）构成B细胞的抗原识别受体AgAb特异性识别结合抗原第21页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!中和毒素第22页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!阻止病毒入侵第23页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!阻止细菌入侵第24页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三免疫球蛋白C区的功能：（1）激活补体

IgM、IgG1~3激活补体经典途径

凝聚的IgA或IgG4激活补体旁路途径（2）细胞亲嗜性(与细胞表面FcR结合)①调理作用（opsonization)；IgFc段与吞噬细胞表面FcR结合促吞噬；②抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（Ab-dependentcell-mediatedcytotoxicity,ADCC)③介导I型超敏反应（3）IgG穿过胎盘——被动免疫、（4）sIgA通过呼吸道和消化道粘膜——粘膜局部免疫第25页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第26页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用第27页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第28页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，是血液和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。出生后3个月开始合成，3-5岁接近成人水平，是唯一能通过胎盘的Ig

IgM为五聚体，是分子量最大的免疫球蛋白，称为巨球蛋白（macroglobulin）；是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体；主要存在于血液中，是血管内抗感染的主要抗体。各类免疫球蛋白的特性和功能第29页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三各类免疫球蛋白的特性和功能IgA分为血清型和分泌型，是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。初乳中的sIgA可对婴幼儿发挥自然被动免疫作用正常人血清中IgD含量很低，膜结合型IgD(mIgD)构成BCR，是B细胞分化发育成熟的标志。

IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起I型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。第30页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三单克隆抗体和多克隆抗体多克隆抗体（polyclonalantibody）：用含多种抗原决定簇的抗原物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清（含多种抗体的混合物），此为多克隆抗体。

来源广泛，制备容易；特异性不高。单克隆抗体（monoclonalantibody,mAb）由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体

纯度高、特异性强、可大量生产。第31页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第二节IgG、IgA、IgM测定方法及临床意义一、血液IgG、IgA、IgM测定方法及临床意义二、血液IgG亚类测定方法及临床意义三、尿液免疫球蛋白测定方法及临床意义四、脑脊液免疫球蛋白测定方法及临床意义第32页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（一）、测定方法单向免疫扩散试验

（凝胶内免疫沉淀反应）酶联免疫吸附试验（ELISA）：时间长、批量检测放射免疫试验（RIA）：放射性核素污染免疫透射比浊试验（液相免疫沉淀反应）免疫散射比浊试验（液相免疫沉淀反应）免疫固定电泳（IFE）：M蛋白测定一、血液IgG、IgA、IgM测定方法及临床意义第33页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三

优点：操作简便、不需特殊耗材缺点：耗时长、灵敏度低、免疫球蛋白分子量大、沉淀

环不明显、导致结果不准确，临床应用少单向免疫扩散试验第34页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三免疫比浊试验原理：第六章免疫沉淀试验和第十四章免疫浊度测定的自动化分析常见分类：透射免疫比浊试验：临床基层单位使用散射免疫比浊试验（BNP特种蛋白仪)

评价：散射免疫比浊试验具有检测范围宽、时间短、

测定结果准确、精密度高、敏感性高、稳定

性好等优点，临床应用广泛。第35页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（二）、临床意义1、年龄第36页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三2、高Ig血症：

1）多克隆高Ig血症（

IgG、IgA、IgM均升高）；

eg：肝脏疾病，三种均升高

慢性细菌感染，

IgG升高

宫内感染脐血或新生儿，

IgM升高

自身免疫性疾病，三种均升高；SLE、RF

2）单克隆Ig升高（单一Ig升高）

单克隆蛋白即M蛋白，主要是指患者血清中某一类免疫球蛋

白含量显著增多，大多在30g/L以上，这种异常增多的免疫

球蛋白理化性质十分均一。又称副蛋白（无免疫活性）

eg：免疫增殖病第37页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三3、低Ig血症：

1）先天性低Ig血症（体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病）

aIg全缺：Bruton型无Ig血症

b缺一种或缺两种Ig：缺IgA，反复呼吸道感染缺IgM，革兰阴性细菌败血症缺IgG，化脓性感染

2）获得性低Ig血症：大量蛋白丢失（IgG<5g/L)淋巴系统肿瘤重症传染病感染性疾病长期使用免疫抑制剂第38页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三Ig亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4，其含量依次下降（一）、测定方法：

单向免疫扩散试验：灵敏度低、检测时间长酶联免疫吸附试验：抗原特异性较差、检测时间长免疫散射比浊试验：检测速度快、灵敏度高、准确性好、自动化程度高、应用广泛二、血液IgG亚类测定方法及临床意义第39页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（二）临床意义：

1、

IgG亚类的含量随年龄的不同而变化（下表）第40页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三临床意义：

2、

IgG亚类缺陷：

定义：当某一IgG亚类含量低于年龄对应的参考值区间时

表现：呼吸道感染、腹泻、中耳炎、支气管扩张及哮喘等

男女比例：儿童期3:1,IgG2缺陷常见；成人4;2IgG1、

IgG3缺陷常见

典型病例：IgA缺乏症、病毒感染、肾病综合症、糖尿病

（注：有些患者IgG亚类异常，但总IgG正常甚至偏高，因此测定IgG亚类更有价值）

3、

IgG亚类异常增高：I型变态反应第41页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三临床意义：

4、

IgG4相关性疾病：

1）定义：是一组以血清IgG4水平升高、受累组织IgG4阳性浆细胞浸润及纤维化为特征的疾病；

2）该病累及全身多个组织器官，受累器官出现相应的压迫症状和功能障碍，其中胰腺、泪腺、涎腺的受累最为常见；

3）类风湿关节炎、系统性红斑狼疮：IgG4自身抗体、IgG4阳性浆细胞浸润。

第42页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三三、尿液免疫球蛋白测定方法及临床意义（一）、测定方法单向免疫扩散试验：灵敏度低、检测时间长酶联免疫吸附试验：抗原特异性较差、检测时间长免疫散射比浊试验：检测速度快、灵敏度高、准确性好、自动化程度高、应用广泛第43页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三

（二）、临床意义：1、免疫球蛋白的检测选择性蛋白尿指数（SPI)：

评价肾小球滤膜受损程度及观察治疗效果和预后的指标通过测定尿液及血液中转铁蛋白（TF）及IgG的含量计算计算公式：

SPI=（尿IgG/血清IgG）/（尿TRF/血清TRF)SPI≤0.1肾脏高选择性排泌分子量较小的蛋白质

微小病变型肾病

SPI≥0.2肾脏非选择性排泌分子量较大的蛋白质膜性肾病、膜增殖性肾炎、肾病综合征第44页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三

根据尿内Ig增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类原发性肾小球肾炎慢性肾炎慢性肾炎高血压型及普通型隐匿性肾炎急性肾炎IgA最高最高轻度增高很少IgG较高较高轻度增高轻度增高IgM甚微出现甚微甚微2、游离轻链的检测用于诊断轻链病多发性骨髓瘤等疾病的分型鉴定及预后判断第45页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三四、脑脊液免疫球蛋白测定及临床意义（一）测定方法免疫散射比浊试验：脑脊液免疫球蛋白含量低，灵敏度高血脑屏障（BBB)：是指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障。生理情况下，脑脊液（CSF）中免疫球蛋白的含量：IgG>IgA>IgM第46页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三（二）、临床意义脑脊液免疫球蛋白含量的测定有助于神经系统疾病的诊断、疗效观察、预后判断。通过测定CSF和血液中的白蛋白计算以下临床指标：白蛋白商值（QAlb）=（Albcsf/Albs)×1000（1）监测血脑屏障损伤的程度（2）提示神经系统发生疾病的类型IgG生成指数=（

IgGcsf×Albs）/（

IgGs×Albcsf）

区分鞘内免疫球蛋白的来源：鞘内合成，

通过BBB进入鞘内

第47页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第三节血液IgE和IgD测定方法及临床意义一、

血液IgE测定方法及临床意义包括总IgE（tIgE）和特异IgE（sIgE）测定方法：

酶联免疫吸附法（ELISA）荧光酶免疫试验(FEIA)化学发光免疫试验(CLIA)临床意义

1、IgE升高：I型变态反应性疾病

婴儿寄生虫感染非变态反应性疾病：病毒感染、自身免疫性疾病等。

第48页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三临床意义

2、IgE降低：原发性无丙种球蛋白血症肿瘤及化疗药物应用后3、影响IgE水平的因素年龄性别种族第49页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三二、

IgD测定方法及临床意义测定方法：放射免疫分析法乳胶颗粒免疫比浊分析法酶联免疫吸附法临床意义

IgD升高：妊娠末期、

IgD型骨髓瘤、

甲状腺炎、

大量吸烟者

IgD降低：原发性无丙种球蛋白血症肺硅沉着病

细胞毒药物治疗后第50页，讲稿共55页，2023年5月2日，星期三第四节冷球蛋白测定及临床意义冷球蛋白（CG)，又称冷免疫球蛋白，是血清中的一种病