糖基分离方法介绍

糖基分离方法介绍第1页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本第2页，课件共12页，创作于2023年2月聚糖的分离、检测原理操作步骤、仪器方法沿革第3页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本方法沿革几乎所有的分离糖基的方法都是化学方法，因为尚无适用于所有O链接糖蛋白的酶最常用的化学方法是β消化法，但是这会导致糖基被还原，生成糖醇，无法进行定量检测其它方法还有乙二胺、氨、氢氧化锂法，但是分离的量非常少1.RadoslawP.Kozak.ImprovednonreductiveO-glycanreleasebyhydrazinolysiswithethylenediaminetetraaceticacidaddition.AnalyticalBiochemistry,2014,453:29-57第4页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本分离原理：肼解作用2.RadoslawP.Kozak.SuppressionofpeelingduringthereleaseofO-glycansbyhydrazinolysis.AnalyticalBiochemistry,2012,423:119-1281.RadoslawP.Kozak.ImprovednonreductiveO-glycanreleasebyhydrazinolysiswithethylenediaminetetraaceticacidaddition.AnalyticalBiochemistry,2014,453:29-57第5页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本缺点：退化（peeling）指每一步中残端减少一个单糖结构改进方法：肼化前去除水分子并加入低浓度的已二酸已二胺，可以有效降低peeling第6页，课件共12页，创作于2023年2月试剂准备样品准备TIMESHEET实验步骤第7页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本试剂准备主要试剂：Ludger公司LL-HYDRAZ-A2试剂盒其它试剂：纯水、PD10色谱柱、离心机、惰性气体（氮气或氩气）、烘干箱或者通风橱、注射器、加热装置、蒸发装置、移液器主要仪器：高效液相色谱仪、离子肼质谱第8页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本样品纯化：透析膜透析或离心，然后用清洗液清洗样品转移：加到反应瓶中（50ug到1mg）样品烘干添加无水肼肼解孵化N、O糖基具体步骤未附，见说明书样品制备第9页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本TIMESHEET1.转移至反应瓶并彻底烘干24h2.添加无水肼15min3.孵化6-16h4.肼洗脱2-24h5.乙酰化2h6.纯化分离出的糖基2h第10页，课件共12页，创作于2023年2月添加文本点击添加文本点击添加文本点击添加文本离子肼质谱检测进样HPLC分离