乙醇胺致突变性研究

乙醇胺致突变性研究

乙醇胺具有氨基和氨基酸两个功能基团。这是氨基醇中最重要的产品之一。不仅自身用途广泛,还是很多重要有机衍生物的前体物质,可用于农药、医药、化工等领域1材料和方法1.1材料表面1.1.1gractor乙醇胺,CAS号为141-43-5,购自GraciaChemicalTechnology公司,纯度99.5%,批号:201206169。本品外观为无色透明液体。1.1.2动物中心iiic屏障系统饲养SPF级昆明种小鼠50只,雌雄各半,体重为25~30g,由四川省医学科学院实验动物研究所提供,合格证号:SCXK(川)2008-28。四川大学华西公共卫生学院实验动物中心IVC屏障系统饲养,动物房使用合格证:SCYK(川)2011-011。实验前检疫3d。整个实验过程中,动物自由摄食和饮水,室温20~23℃,相对湿度60%~65%。1.1.3对于细胞菌和育种条件小鼠淋巴瘤细胞L5178Ytk1.1.5聚合物ct、甲磺酸甲酯mms、丙酮酸钠、丙酮酸钠、丙酮酸钠、丝裂霉素b、c、n-二羟基次黄嘌呤、甘氨酸、甲氨蝶呤、胸腺嘧啶核苷、三氟胸苷(TFT)、甲磺酸甲酯(MMS)、丙酮酸钠、2,4,7-三硝基-9-芴酮、叠氮钠、丝裂霉素C、2-氨基芴和1,8-二羟基蒽醌,均购自美国Sigma公司。1.2方法1.2.1沙门氏菌回归试验方法和结果判定参考GBZ/T240.8-20111.2.2大鼠骨髓热爱多感染红细胞微测试方法和结果判定参考GBZ/T240.36-20111.2.3平均每孔接种细胞数方法和结果判定参考GBZ/T240.10-2011式中:n———平均每孔接种细胞数:在计算PE时n=1.6,计算MF时n=2000;EW———无集落生长的孔数;TW———为总孔数。1.3统计方法采用SPSS17.0和PEMS3.0《中国医学百科全书·医学统计学》统计软件包(第三版)软件进行统计学分析。2结果2.1乙醇胺回复突变试验由表1可知,各菌株不同阳性对照回复突变菌落数均远超自发突变菌落数,试验体系可靠。在剂量>50.0μl/皿时,由于乙醇胺的碱性过强,未有菌落产生。在10.0μl/皿时,加或不加S9的情况下,乙醇胺诱发TA97、TA100菌株的回复突变菌落数均超过自发突变的两倍以上,且随着剂量增加呈现剂量-反应关系,表明乙醇胺对TA97和TA100菌株具有诱变作用。重复试验结果相同。2.2小鼠的微核试验结果结果提示受试物在小鼠骨髓细胞微核试验中为阳性结果(表2)。因最高剂量组,即1375.0mg/kg组小鼠在两次给药之后,死亡率高达70%,故不再对其微核结果进行分析。阳性对照组的微核率显著高于阴性对照组(P<0.01),各组PCE/NCE比值均在正常范围内且差异无统计学意义,表明试验体系可靠。乙醇胺雄鼠低、中两组以及雌鼠中剂量组的微核率与阴性对照组比较均显著性升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.3体外染色试验随着浓度增加,各剂量组的相对存活率(RS)、相对悬浮生长(RSG)、相对总生长(RTG)逐渐下降,呈现良好的剂量-反应关系,表明受试物在较高剂量下可抑制L5178Y细胞的生长。但由于乙醇胺水溶液具有强碱性,染毒完成时细胞死亡比例过大,最高染毒剂量10mmol/L乙醇胺的RSG和RS难以达到要求的20%以内。阳性对照组MF显著高于阴性对照组(P<0.05),表明试验系统可靠。MF有随剂量增加而增加的趋势,但各剂量组MF与阴性对照比较,差异均无统计学意义(P>0.05),表明在受试物在本实验条件下,在检测剂量范围内无明显诱导L5178Y细胞TK基因杂合性丢失的作用(表3)。3致死剂、减化剂和其他非整倍体诱变剂的致突变性研究Ames试验、微核试验和TK基因突变试验是美国环境保护署(EPA)和经济合作与发展组织(OECD)所推荐的遗传毒性检测试验组合,能够较为全面和准确地筛查诱变物。乙醇胺是一种有着较长工业产龄的有机化合物,常用于生产表面活性剂、除草剂、木材防腐剂、气体净化剂、金属加工液和水泥磨料等工业领域。20世纪时乙醇胺的毒理学资料便在国外得到了一个较为完整的归纳Ames试验中TA97和TA98菌株主要可检出移码突变,TA100和TA102菌株主要可检出碱基置换和移码突变;微核试验可检测断裂剂和部分非整倍体诱变剂2011年,我国乙醇胺年产量已接近15万吨,但仍无法满足其日益增长的需求,乙醇胺的产量将快速增长,生产规模也将继续扩大。由于生产工艺不同和生产使用需求量大,为保证乙醇胺生产使用过程中的安全性,应针对乙醇胺国内产品进行系统的毒理学评价,本次实验对完善乙醇胺的遗传毒性资料有重要意义。后续的研究还需要结合其他遗传毒性检测系统