黑芽苗菜叶绿素提取方法的比较研究

黑芽苗菜叶绿素提取方法的比较研究

黑豆，通常被称为豆苗。它口感细腻，营养丰富，钙、磷、铁、钾等矿物和多种维生素。此外，它具有很高的药用价值。它又冷又甜。具有活血化瘀、清热消肿、强肝明目的的功效。更为重要的是黑豆芽富含叶绿素。叶绿素分子结构与人体内的血液分子相似,非常易溶入红细胞中,能抑制细菌、排出毒素,有“绿色血液”之称。研究表明,豆芽中的叶绿素能分解人体内的亚硝酸胺,能够起到预防直肠癌等多种消化道恶性肿瘤的作用。因此,研究黑豆芽的叶绿素测定提取方法,对于提高其品质和黑豆芽叶绿素深度开发具有重要意义。关于叶绿素含量测定方法使用较多的是Arnon法,但是Arnon法需要把植物材料研磨和去残渣,提取时间长,工作量和操作误差大。20世纪80年代初张宪政1材料和方法1.1万分之一天麻仪器厂黑豆芽购于市场;722型分光光度计:上海光学仪器厂;万分之一天平:上海天平仪器厂;丙酮、乙醇:分析纯,按体积比配制浸提液:95%乙醇,丙酮∶乙醇=1∶1,80%丙酮分别用A、B、C表示。1.2研磨法和直接浸提法提取叶绿素预处理样品,取黑豆芽适量,用纱布或吸水纸吸干表面的水分,将子叶等剪成小于2mm碎条,混匀,分成2份。提取测量,一份在室温(25℃)下,立即用研磨法和直接浸提法(A、B、C3种提取液)提取叶绿素。其中浸提法,称取1g处理好的样品置于50mL容量瓶中加入相应提取液,定容,混匀,封口,置于黑暗条件下直接浸提。待组织完全变白,分别在波长663、645、470nm下测定吸光度值。另一份用天平精准称取(1g,9份),分别装袋,密封好,放到冰箱冷冻6h,取出以浸提法测定吸光度值。浸提法、研磨法、冷冻浸提法每个处理各重复3次。1.3处理数据叶绿素含量的计算:C2结果与分析2.1黑麦芽糖叶绿素含量各种方法提取结果见表1。由表1可见,黑豆芽(不包括胚轴和胚根)叶绿素含量为0.1677mg/g(鲜重),a/b为2.524。2.2研磨法和冷冻浸提法提取叶绿素研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种提取方法,对于叶绿素a、b提取结果表现一致,以冷冻浸提法提取效果最好,其次为研磨法,再次为浸提法(表2)。浸提法提取效果最差,一方面可能提取不完全,也可能在提取的过程中叶绿素有分解,相对冷冻浸提法,由于经过了冷冻过程破碎了细胞,提取完全而且提取过程快减少了叶绿素分解,效果最好。研磨法在研磨、过滤等操作的过程中有损失,而且提取时间过程长造成弱光下叶绿素的分解,效果不及冷冻浸提法。叶绿素含量提取效果的单变量方差分析,见表3。由表3单变量方差分析表明,叶绿素aSig.=0.749,P>0.05,叶绿素bSig.=0.145,P>0.05,即不同提取方法间差异不显著。2.3不同提取液提取效果不同提取液提取效果比较,见表4。由表4可见,不同提取液提取效果,对于叶绿素a、b提取结果表现一致,以95%乙醇提取效果最好,其次乙醇丙酮1∶1混合,再次为80%丙酮。由表2单变量方差分析表明,叶绿素aSig.=0.000,P<0.01,叶绿素bSig.=0.001,P<0.01,即不同提取液提取效果差异极显著。进一步进行不同提取液提取效果多重比较分析表明(表5)。由表5可知,除叶绿素b丙酮乙醇1∶1混合提取液和80%丙酮提取液间差异不显著,其余各处理间差异显著。单种提取液95%乙醇提取效果最好,与明华等对玉米叶叶绿素提取研究结论一致,但乙醇丙酮1∶1混合液的提取效果不及95%乙醇,又与明华、李得孝由表6对95%乙醇提取液的3种方法提取效果比较也可看出,提取黑豆芽叶绿素以95%乙醇为提取液,以冷冻浸提效果最好。3不同提取方法对黑芽叶绿素提取效果的影响1)研磨法、浸提法、冷冻浸提法3种方法提取黑豆芽叶绿素,对于叶绿素a、b提取结果表现一致,以冷冻浸提法提取效果最好,其次为研磨法,再次为浸提法,但不同提取方法间差异不显著。尽管3种方法提取效果差异不显著,但研磨法工作量大,提取时间长;浸提法提取值偏低;冷冻浸提法速度快且效果好,故在黑豆芽叶绿素提取中可采用冷冻浸提法。2)3种提取液提取黑豆芽叶绿素,叶绿素a、b提取结果表现一致,以95%乙醇提取效果最好,其次乙醇丙酮1∶1混合液,再次为80%丙酮,且3种提取液提取效果差异极显著。结合上文分析黑豆芽叶绿素以