药物分离试验

东营职业学院实训实习课程报告（学生用）课程名称药物分离技术二级学院生物与生态工程学班级生物班姓名李瞒丽学号201006080020

实训实习报告要求实训实习报告是实训实习工作的全面总结，是教师考核学生实训实习效果的一项重要依据，也是评定学生实训实习的重要依据。实训实习报告是学生总结实训实习内容，使实训实习获得的感性认识上升为理性认识的过程。实训实习报告要用规定的实训实习报告纸书写，要语言通顺、分析合理、认真总结。每门实训实习课程结束后，实训实习报告交实训实习指导教师，指导教师审核后交课程所开二级学院存档。实训实习报告包括如下内容：1.实训实习内容、实训实习场所、实训实习日期；2.实训实习目的和要求；3.实训实习仪器、设备与材料；4.实训实习的完成情况及效果；5.存在的问题及不足。实训实习报告2012年11月26日第15、16周实训实习内容药物分离技术实训实习场所生物化学实训室7实102成绩指导教师王玉刚实训实习报告实训实习内容、实训实习场所、实训实习日期实验一、大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定 用乙醚及酸溶液水浴加热提取蒽醌类化合物用pH梯度萃取法分离蒽醌类化合物实验二、汉防己生物碱的提取分离与鉴定2012年11月26号---2012年12月14号2.实训实习目的和要求 1、掌握羟基蒽醌类化合物的鉴定方法2、熟悉蒽醌类成分的提取分离方法。3、掌握pH梯度萃取法的原理和操作技术1、掌握一般叔胺生物总碱的提取和纯化方法。2．熟悉柱色谱法分离生物碱的操作技术。3．掌握生物碱的鉴定方法。实训实习仪器、设备与材料仪器：天平、烧杯、玻棒、分液漏斗、布氏漏斗、量筒、圆底烧瓶、圆形冷凝管、pH试纸回流装置、圆底烧瓶、分液漏斗、层析柱、漏斗、薄层板、乳钵、量筒、烧杯、试管等试剂：乙醚、20％硫酸、浓盐酸、碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠、石油醚、乙酸乙酯、甲酸汉防己、85%乙醇、1%盐酸、氯仿、氨水、1%氢氧化钠、无水硫酸钠、氧化铝、丙酮、环己烷、甲醇、改良碘化铋钾试剂、碘-碘化钾试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸试剂等4.实训实习的完成情况及效果；学习了羟基蒽醌类化合物的鉴定方法，掌握了蒽醌类成分的提取分离方法，掌握pH梯度萃取法的原理和操作技术，了解了大黄的药用价值，1、泻下作用，2、抗菌作用，3、降低血清尿素氢，改善肾功能，4、止血作用5、抗病毒、抗真菌等作用。

5.存在的问题及不足。

由于时间短，只能对这一种药物进行提取、分离、鉴定进行实习，而其他药物的提取需要更长的时间。实习存在间断的连续性。实训实习课程期末总结本次实习我学会了大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定，简单总结如下：一、操作要点1.提取、分离流程（如图）2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉100g，加20％硫酸溶液300ml润湿，再加氯仿500ml，回流提取2hr，稍冷后过滤，残渣弃去，氯仿提取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。3.蒽醌苷元的分离和精制（1）蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验为了验证分离所采用的萃取液是否合理，作如下缓冲纸色谱试验：取层析滤纸3cm×12cm，距下端2cm处划一起始线，向上每隔1.5cm划一平行线，在各条带上依pH由低至高顺次涂布实际所用的各缓冲液及碱液，涂布完后，将湿滤纸夹在两片干滤纸中吸至半干。取样品总蒽醌苷元氯仿提取液点在起始线上，用氯仿上行展开，将结果绘制在下面图中，并确定选择的萃取剂是否合理。（2）分离与精制a.大黄酸的分离和精制将含有总蒽醌的氯仿液450ml于1000ml分液漏斗中，加pH8缓冲液150ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250ml烧杯中，在搅拌下滴加20％盐酸至pH3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。b.大黄素的分离和精制pH8缓冲液萃取过的氯仿层，用pH9.9缓冲液300ml振摇萃取，静置至彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH3，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。c.芦荟大黄素的分离与精制pH9.9萃取过的氯仿层再加5％碳酸钠-5％氢氧化钠（9:1）碱水液540ml萃取，碱水层加盐酸酸化，析出的沉淀水洗，干燥，用10ml乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟大黄素。d.大黄酚和大黄素甲醚的分离萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用3％氢氧化钠溶液500m1分二次萃取，至碱水层无色为止，合并碱水层，加盐酸酸化至pH3，析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚混合物，留作柱色谱分离的样品。余下氯仿液水洗至中性，蒸馏回收氯仿。e.硅胶柱色谱法分离大黄酚、大黄素-6-甲醚装柱：用石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200～300目硅胶约20g，搅拌均匀，尽量赶出气泡。一次性倒入1.8cmX28cm的层析柱中，轻轻敲打使硅胶均匀下沉，至硅胶界面不再下降为止。上样：将离大黄酚和大黄素-6-甲醚的混合物用乙醇加热溶解，伴入少量硅胶，水浴60℃左右烘干，加到已装好的硅胶柱顶端，最后在样品带上盖上一层硅胶或棉花，以保护样品界面不受干扰。洗脱：先用100ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换用100ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。4.鉴定(1)蒽醌类成分化学鉴定a.碱液试验分别取各蒽醌结晶数毫克置于小试管中，加2％氢氧化钠溶液lml，观察颜色变化。凡有互成邻位或对位羟基的蒽醌呈蓝紫至蓝色，其它羟基蒽醌呈红色。b.醋酸镁试验分别取蒽醌结晶数毫克，置于小试管中，各加乙醇lml使溶解，滴加0.5％醋酸镁乙醇溶液，观察颜色变化。(2)色谱鉴识a.薄层板：硅胶G-CMC-Na板。b.点样：提取的大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的氯仿溶液及各对照品氯仿溶液。c.展开剂：石油醚－乙酸乙酯－甲酸（15:5:1）上层溶液。d.展开方式：上行展开。e.显色：在可见光下观察，记录黄色斑点出现的位置，然后用浓氨水熏或喷5%醋酸镁甲醇溶液，斑点显红色。f.观察记录：记录图谱并计算Rf值。 实验二：汉防己生物碱的提取分离与鉴定实验内容与方法：一、总生物碱的提取取汉防己粉末100g，置于500ml圆底烧瓶中，加85%乙醇300ml，水浴加热回流1小时，滤出乙醇提取液；药渣重新加入85%乙醇200ml同法提取1次，合并两次提取液，过滤，浓缩至无醇味，成糖浆状，得到总生物碱。二、精制将上述糖浆状提取液转入烧杯中，加1%盐酸调PH为2，边加边搅拌，静置，过滤，得澄明滤液。滤液加等体积氯仿，再加氨水调PH为10以上，于分液漏斗中振摇萃取，静置分层后放出氯仿层，碱液再用氯仿萃取两次，合并氯仿液。氯仿液置于分液漏斗中，先以1%氢氧化钠溶液洗2次，再用水洗2-3次后加入约5g无水硫酸钠脱水，放置过夜，过滤，回收氯仿至少量，得汉防己总碱。三、汉防己甲素和汉防己乙素的分离1．装柱取层析柱垂直固定在铁架台上，在管的下端垫入少量棉花，称取中性氧化铝100目20g，缓缓加入层析柱中，边加边轻轻振动色谱柱，使氧化铝在柱中填实均匀。2．上样取100mg汉防己总碱置于小蒸发皿中，用少量丙酮溶解，另加0.5g色谱用氧化铝（作吸附剂），搅拌均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。然后将含有样品的氧化铝装入色谱柱的上端，并盖一圆形滤纸。3．洗脱将色谱柱活塞打开，以正己烷-丙酮（4∶1）洗脱，流速控制在5ml/min，收集各流分（10ml～15ml/份）。4．检查将各流分回收溶剂，依次点于硅胶G-CMC-Na薄层板上，用氯仿—丙酮—甲醇（6∶1∶1）为展开剂，展开，喷以改良碘化铋钾试剂，比较各流分的Rf值，合并相同Rf值的流分。5．结晶将合并流分的溶液浓缩至适当体积，放置，析晶，滴加少量丙酮洗涤结晶，可得汉防己甲素、汉防己乙素结晶。四、检识1．化学检识取的氯仿液，用1%的盐酸萃取，得盐酸溶液10毫升，分为四个小试管储存，分别在四个小试管中加入改良碘化铋钾、碘-碘化钾、碘化汞钾、硅钨酸试剂，观察各试管中的变化，记录在如下表格中。改良碘化铋钾碘-碘化钾碘化汞钾硅钨酸汉防己生物碱空白2．色谱检识色谱材料：硅胶G-CMC-Na硬板点样：汉防己总碱