TFJHX 0006-2023 杏鲍菇液体菌种生产技术规范

ICS65.020CCSB05团 体 标 准T/FJHX0006—2023杏鲍菇液体菌种生产技术规范Technicalstandardforliquidspawnproductionof2023-12-29发布 2024-02-01实施福建省食用菌行业协会 发布T/FJHX0006—2023T/FJHX0006—2023前 言本文件按照GB/T《标准化工作导则 第1部分标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由福建省食用菌行业协会提出并归口。本文件起草单位：福建省食用菌技术推广总站、福建嘉田农业开发有限公司、漳州市经济作物站、漳州高新区经济发展服务中心。I杏鲍菇液体菌种生产技术规范范围本文件规定了杏鲍菇液体菌种的生产条件、生产工艺与生产档案。本文件适用于杏鲍菇液体菌种生产。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB50073洁净厂房设计规范NY862杏鲍菇和白灵菇菌种NY/T528-2010食用菌菌种生产技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。液体菌种liquidspawn利用专用设备以液体培养基培养的菌种。注：分为摇瓶菌种和发酵罐菌种。发酵罐fermenter食用菌液体菌种生产的专用设备。注：分为固定式发酵罐和移动式发酵罐两种类型。罐压jarpressure液体菌种培养过程中发酵罐内保持的空气压力。生产条件场地场地宜选择水源充足、排水通畅、通风良好的场所，环境卫生应符合NY/T528-2010要求。生产设施1GB50073生产车间地面应耐磨、防水、防腐蚀、防滑、易清洗，墙角为圆角，墙壁和天花板应防潮、防霉、防水、易清洗。发酵罐菌种车间应具备不间断电源及蒸汽，配备水和通气处理系统。设备用具主要设备包括发酵罐、恒温摇床、磁力搅拌器、空气压缩机、空气过滤器、冷干机、干燥吸附主要用具包括玻璃三角瓶、抽滤瓶、试管、克氏瓶、培养皿、量杯、玻璃漏斗、接种工具等。培养基质应符合NY/T528-2010中4.7.2要求，豆粕粉粗细度过160目筛为宜。生产工艺工艺流程杏鲍菇液体菌种生产工艺流程见图1。图1 工艺流程母种选用优质、高产、抗逆性强、商品性好的优良品种。NY/T528-2010要求，培养温度23℃～25℃。NY8623～51～24℃～6℃条件下至少贮存到该批次出菇结束。摇瓶菌种培养基配制AA.1L600灭菌20.11Mpa～0.13Mpa、温度121℃～124℃，灭菌时间20min～30min。冷却灭菌后玻璃三角瓶或抽滤瓶培养基应冷却至26℃以下。接种.3m～.5m2DA母种块68培养接种后玻璃三角瓶或抽滤瓶菌种宜静置24h后移至恒温摇床上进行避光培养，振荡频率140r/min～160r/min21℃～236d～7d。24h450r/min，21℃～23℃，时间6d～7d。留样备查每瓶摇瓶菌种宜留样30mL～40mL，4℃条件下贮存至发酵罐菌种培养结束。若发酵罐菌种出现杂菌污染，参见附录B中B.1的杂菌检测方法进行排查。发酵罐菌种发酵罐检查1空罐灭菌发酵罐初次及空置后使用、出现污染、更换品种时，按设备厂家提供的使用说明进行灭菌。投料与定容参见附录A中A.2配方称取适量物料转入物料桶，加水搅拌溶解，待物料溶解均匀后装入发酵罐内，加水搅拌均匀并定容，液体培养基投料量为罐体总容量的60%～70%，然后拧紧上料口盖。实罐灭菌投料后的固定式发酵罐按设备厂家提供的使用说明进行灭菌，温度121℃～124℃，灭菌时间45min～70min。投料后的移动式发酵罐应移至全自动智能灭菌锅内进行灭菌，锅内压力0.11Mpa～0.13Mpa，121℃～124℃，灭菌时间60min。冷却26℃以下。26℃以下停止淋水。3接种玻璃三角瓶菌种0.01Mpa；用75%酒精对玻璃三角瓶菌种的瓶口进行消毒，并用火焰灼烧瓶口3s～5s。打开发酵罐的接种口盖，将玻璃三角瓶菌种迅速倒入发酵罐，接种量为1：800～1：1000。0.04Mpa，移动式发酵罐的进0.05Mpa。抽滤瓶菌种将火焰圈套在发酵罐的接种口上点燃约2min；一人扶好抽滤瓶，一人在火焰上方拆除抽滤1：800～1：1000。0.04Mpa，移动式发酵罐的进气压力调节0.05Mpa。培养固定式发酵罐接种后罐内通气量料液体积/空气体积0.04Mpa22℃～24℃，培养6d～7d。移动式发酵罐接种后发酵罐的进气压力从0.05Mpa逐渐提高至0.15Mpa，进气温度20℃～21℃，培养室温度21℃～23℃，培养6d～7d。发酵罐清洁发酵罐放罐接种结束后，应及时通入水冲洗罐体内、外和全部阀门，确保无死角、内壁无培养料残余。检测摇瓶菌种培养期间应定期检查菌种萌发情况。接种后第4d抽样检测，检测项目、指标和方法参见附录B中B.1，发现菌丝生长异常及杂菌污染，应及时处理。发酵罐菌种培养期间应定期检查菌液色泽和形态情况。接种后第4d的发酵罐菌液取样30mL～40mL进行检测，检测项目、指标和方法参见附录B中B.2，发现问题应及时处理。质量要求4摇瓶菌种培养结束，静置3min～5min后观察，菌种质量参见附录C中C.1要求。发酵罐菌种培养结束，观察培养状况，菌种质量参见附录C中C.2要求。生产档案母种、摇瓶菌种、发酵罐菌种生产应建立生产档案，记录内容参见附录D，档案保存至少2年。5附 录 A（资料性摇瓶菌种培养基推荐配方1.1g.07gKHO4.67gMSO4.67，水1。发酵罐菌种培养基推荐配方1.1g.07gKHO4.67gMSO4.67g.1L1L。LB牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂20g，水1L。6附 录 B（资料性）液体菌种检测指标摇瓶菌种检测指标B.1。表B.1 摇瓶菌种检测指标项目指标方法菌丝形态培养初期，可明显见到粗壮菌丝体；培养后期，菌丝变细并且均匀。肉眼观察显微观察菌丝粗壮、丰满、均匀，有锁状联合。接种后第4d随机抽取1瓶同批次的摇瓶菌种，按照无菌操作进行镜检。放大倍数不低于10×40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每个检样应不低于50个视野。杂菌检测培养皿无细菌、酵母菌等菌落。接种后第4d1LB（A.3）的培养皿，分别于28℃和37℃培养48h，每隔12h观察一次。7发酵罐菌种检测指标B.2。表B.2 发酵罐菌种检测指标项目指标方法菌液色泽菌液澄清透明，球状菌丝体呈白色。肉眼观察菌液形态菌液不粘稠，菌丝球沉于液体培养基底部，菌丝球边缘清晰透明。菌液气味鼻嗅显微观察菌丝粗壮、丰满、均匀，有锁状联合，无杂菌。放大倍数不低于10×40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每个检样应不低于50个视野。杂菌检测培养皿无细菌、酵母菌等菌落。接种后第4d菌液，按照无菌操作，将样液接于LB培养基（附录A.3）的培养皿，于37℃培养48h，每隔12h观察一次。8附 录 C（资料性）液体菌种质量要求摇瓶菌种质量要求C.1。表C.1 摇瓶菌种质量要求项目指标方法菌液色泽菌液澄清透明，无浑浊。肉眼观察菌丝形态菌丝球大小均匀，悬浮于液体培养基、分布均匀、无分层，无杂菌污染。9发酵罐菌种质量要求C.2。表C.2 发酵罐菌种质量要求项目指标方法菌液色泽菌液澄清透明，球状菌丝体呈白色。肉眼观察菌液形态无分层，菌球边缘清晰透明。菌液气味杏鲍菇液体培养基特有的香气较浓，无酸、臭等异味。鼻嗅pH值5.5～6.2酸度计显微观察菌丝粗壮、丰满、均匀，有锁状联合，无杂菌。放大倍数不低于10×40的光学显微镜对培养物的水封片进行观察，每个检样应不低于50个视野。10附 录 D（资料性）生产档案母种生产档案母种生产档案见D.1。表D.1 母种生产档案编号：品种名称来源培养基配制日期灭菌压力温度时间接种时间扩繁数量接种人培养温度萌发时间长满时间菌丝体特征菌落边缘菌丝体分泌物背面外观杂菌、虫（螨）记录人备注11摇瓶菌种生产档案摇瓶菌种生产档案见D.2。表D.2 摇瓶菌种生产档案编号：培养基配制日期装料量配方灭菌压力温度时间记录人接种日期品种名称记录人培养日