AbMole SMAD3 在前列腺癌中的作用研究新发现

AbMole|SMAD3在前列腺癌中的作用研究新发现前列腺癌作为男性中第二常见的癌症，一直以来都是医学研究的重点领域。近期，一篇发表在《NucleicAcidsResearch》的研究论文为我们深入理解前列腺癌的发病机制提供了新的视角。来自马里兰大学生物化学与分子生物学系的Hee-YoungJeon,MajidPornour,HyunjuRyu等多名研究人员发表了题为《SMAD3promotesexpressionandactivityoftheandrogenreceptorinprostatecancer》的研究成果。在该文章中，研究人员使用购自AbMole的IWP-L6（目录号M1839），该研究聚焦于SMAD3在前列腺癌中的作用，通过一系列严谨的实验揭示了其对雄激素受体（AR）表达和活性的重要影响。实验结果表明，SMAD3在前列腺癌中扮演着关键角色。首先，SMAD3促进PCa细胞中AR和AR靶基因的表达。通过敲低SMAD3，研究人员发现PCa细胞中AR和AR靶基因的mRNA水平显著减少，同时AR和AR-V7的蛋白水平也降低。而敲低SMAD4或SMAD2对AR信号几乎没有影响，这明确地指出SMAD3是PCa细胞中AR表达和活性的关键调节因子。图1.SMAD3促进AR和AR靶标的表达。进一步的研究发现，SMAD3调节AR表达不需要TGF-β信号。TGF-β处理对PCa细胞中AR和AR靶基因的表达没有影响。这意味着SMAD3对AR的调控作用独立于传统认知中的TGF-β信号通路，为前列腺癌的研究开辟了新的方向。图2.SMAD4或SMAD2对AR和AR靶标的表达影响很小或没有影响。RNA测序分析为SMAD3的作用提供了更全面的证据。对转导了sh-Control、sh-SMAD2、sh-SMAD3或sh-SMAD4慢病毒的Rv1细胞进行RNA测序分析显示，SMAD3敲低后，许多与AR信号相关的基因表达发生了变化。基因本体论（GO）分析进一步揭示了这些变化的生物学意义，表明SMAD3在调节前列腺癌细胞的生物学过程中起着重要作用。Cut&runChIP-sequencing分析则深入探究了SMAD3与染色质的相互作用。对转导了sh-Control或sh-SMAD3慢病毒的Rv1细胞进行ChIP-seq制备和分析发现，SMAD3与AR基因的特定区域结合，提示SMAD3可能直接调控AR的表达。在生物信息学分析方面，转录调节因子预测等方法也为SMAD3的作用提供了支持。通过这些分析，研究人员确定了SMAD3可能调控的基因网络，进一步阐明了SMAD3在前列腺癌中的作用机制。图3.AR的重新表达部分挽救了SMAD3-KDPCa细胞的AR靶表达和生长。此外，实验还通过质粒构建、慢病毒载体包装和转导等方法，深入研究了SMAD3与AR的关系。构建的多种质粒用于表达AR、SMAD3等蛋白，慢病毒载体则将特定的基因导入PCa细胞，为实验提供了有力的工具。免疫沉淀和westernblotting实验检测了蛋白质的表达和相互作用。结果证实了SMAD3与AR之间存在相互作用，进一步支持了SMAD3对AR表达和活性的调节作用。实时RT-PCR分析检测了细胞中AR、SMAD3等基因的mRNA水平，与其他实验结果相互印证，再次强调了SMAD3在前列腺癌细胞中对AR表达的重要性。ChIP-PCR检测了AR基因中不同区域的染色质结合情况，为SMAD3直接调控AR表达提供了更直接的证据。CRISPRi靶向SBE位点的实验则阻断了SMAD3与SBE的结合，进一步证实了SMAD3通过与特定位点结合来调节AR表达。2D菌落形成试验和软琼脂试验检测了PCa细胞的菌落形成能力。结果显示，SMAD3敲低后，PCa细胞的菌落形成能力减弱，表明SMAD3对前列腺癌细胞的生长和增殖具有重要影响。最后，异种移植模型的构建为研究结果提供了体内证据。裸鼠异种移植模型显示，SMAD3敲低的PCa细胞肿瘤形成能力降低，进一步证实了SMAD3在前列腺癌中的关键作用。综上所述，该研究通过多方面的实验结果，明确了SMAD3在前列腺癌中促