实验动物 小鼠细小病毒检验方法 编制说明

《实验动物小鼠细小病毒检测方法》编制说明（一）工作简况，包括任务来源、协作单位；1.任务来源：TC281（全国实验动物标准化技术委员会）归口，主管部门为科学技术部，20232755-T-306项目。2.牵头单位：中国实验动物学会3.协作单位：北京维通利华实验动物技术有限公司中国医学科学院医学实验动物研究所中国食品药品检定研究院广东省生物技术研究院（广东省实验动物监测中心）江西省职业病防治研究院（二）主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工作等；1.工作过程：1.12023年12月通过立项1.22024年1月17日，进行了全体会议，参加成员对包括小鼠细小病毒检测方法在内的14项国标修订提出意见并讨论。会后进行了任务分工。1.32024年1月-4月，通过查阅资料和前期实验结果，开始初步起草《实验动物小鼠细小病毒检测方法》修订标准。1.42024年5月13日，标准修订推进会，对国标修订中遇到的问题进一步提出意见并探讨。会后成立编制修订小组。1.52024年6月6日，MVM检测标准修订小组会，对《实验动物小鼠细小病毒检测方法》初步稿进行了意见讨论。1.62024年6月-8月，完成新增实时荧光PCR方法的实验室验证（见随附报告《小鼠细小1.72024年8月-9月，MVM检测标准修订小组进行了第二轮意见修改。1.82024年11月-12月，准备和发放新增荧光PCR方法第三方实验室验证用样品及试剂，委托中国食品药品检定研究院、中国医学科学院医学实验动物研究所、广东省生物技术研究院（广东省实验动物监测中心）三家第三方实验室进行了验证工作。1.92025年1月-2025年2月，进行了全体会议，再一次确定国标修订中的问题；完成《实验动物小鼠细小病毒检测方法》征求意见稿和修订说明并提交。2.主要起草人及工作申屠芬琴：标准起草、实施标准验证方案韩雪：标准修订小组成员，标准修订指导向志光：GB/T14926、GB/T18448修订任务主要负责人、标准修订指导熊莉娟、刘忠华：标准修订小组成员，标准修订指导王吉星：工作安排协调王雪妹、刘敏、周倩、连亚静：标准方法验证（三）标准编写背景；随着科学技术的发展和实验动物质量控制能力的提升，GB/T14926.28-2001《实验动物小鼠细小病毒检测方法》已不能满足实际检测需求。GB/T14926.28中涉及的检测方法为酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫酶试验（IEA）和免疫荧光试验（IFA）等血清学方法，未涉及分子生物技术的核酸检测方法，与国际水平脱节。本次国标修订，为对原有标准的更新，以增加标准的普适性。（四）标准编制原则；目前有1个强制性标准和1个推荐性技术方法标准，分别为：1个强制性标准GB14922《实验动物微生物、寄生虫学等级及监测》，修订于2022年，规定了小鼠细小病毒为实验小鼠的必须检测项目，但未涉及具体检测技术方法。1个推荐性技术方法标准GB/T14926.28《实验动物小鼠细小病毒检测方法》，更新于2001年，采用血清学方法，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫酶试验（IEA）和免疫荧光试验（IFA是传统的检测方法，停留于21世纪初技术水平。因此，需要建立和更新国内适用，与国际水平接轨的检测方法和标准。随着科技的发展，核酸检测技术已得到广泛应用，为了拓宽检测方法，增加标准的适用性，本标准新增实时荧光PCR检测方法，用以检测病毒核酸。本标准按照“科学性、规范性、可行性”的原则，依据中国国家标准《标准化工作导则—第1部分：标准的结构和编写》（GB/T1.1-2020）规则起草。本标准规定了实验动物小鼠细小病毒检测方法，包括标准的范围、规范性引用文件、原理、试剂及仪器、检测方法与结果判定等。（五）确定国家标准的主要内容（如技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则等）的论据（包括试验、统计数据修订标准时，应增列新旧标准水平的对比；与原标准相比，修订标准中因新增了实时荧光PCR方法，在范围、规范性引用文件、原理以及检测方法内容上均有增加。新增实时荧光PCR方法适用于免疫缺陷小鼠筛查、血清转化的早期检测、血清学阳性或疑似结果小鼠种群情况的确认、隔离检疫、设施环境监测、饲料垫料水监测、动物接种物（如肿瘤、细胞）及生物制品筛查等，样品类型可包括动物组织、粪便、环境拭子、饲料垫料水、动物接种物及生物制品等。新增方法参考了国内外文献，挑选了针对3个不同位点的3组引物探针进行了比较筛选，选择最佳引物探针组作为新增方法的引物探针。通过验证显示，本方法线性良好，R2为0.998，灵敏度可达1cps/μL，敏感性、特异性和重复性良好，方法可行。方案验证报告见附件《20232755-T-306实验动物小鼠细小病毒qPCR检测方法的验证》。（六）主要试验（或验证）的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果；至少三家第三方验证报告经济效益：在原有小鼠细小病毒检测方法的基础上，新增与国际接轨、国内适用的实时荧光PCR方法，更符合实验动物福利伦理要求，可减少实验动物活体使用数量，无需血清学方法中抗体转化等待时间，能够高效快速的对实验动物健康质量进行监测。对生物制品和饲料垫料中小鼠细小病毒的检测，更能提前控制MVM从这些途径感染实验动物的风险，降低生产繁育和科研损失。第三方实验室验证：委托了中国食品药品检定研究院、中国医学科学院医学实验动物研究所、广东省生物技术研究院（广东省实验动物监测中心）三家实验室对新增实时荧光PCR方法进行验证，验证样品为含有和不含灭活MVM病毒的粪便混悬液、环境拭子浸泡液和组织混悬液，检测结果均符合预期。三家验证报告见附件《20232755-T-306MVM验证报告-中检院》、《20232755-T-306MVM比对报告及原始记录-动研所》和《20232755-T-306MVM验证报告及原始记录-广东动监所》。（七）采用国际标准和国外先进标准的程度，以及与国际、国外同类标准水平的对比情况，或与测试的国外样品、样机的有关数据对比情况；（八）与有关的现行法律、法规和强制性标准的关系；GB14922-2022《实验动物微生物、寄生虫学等级及监测》规定了小鼠细小病毒为实验小鼠的必须检测项目，本标准可以作为GB14922-2022的配套技术标准。本标准与国内现行的法律、法规没有冲突，是对现有法律、法规的有益补充。（九）重大分歧意见的处理经过和依据；（十）标准作为强制性标准或推荐性标准的建议；本标准是GB/T14926.28-2001《实验动物小鼠细小病毒检测方法》的修订标准