DB13T 499-2004 商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程

12规范性引用文件 (不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版木。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适NY5035无公害食品肉鸡饲养兽药使用准则NY5036无公害食品肉鸡饲养兽医防疫准则NY/T5038无公害食品肉鸡饲养管理准则中华人民共和国动物防疫法(第八届全国人大常委会1997年7月3日颁布)中华人民共和国兽药典(2000版)3术语和定义商品肉鸡大肠杆菌病型，是日前危害商品肉鸡业的一种重要的细菌性疾病之一。4.1诊断原则4.2流行特点4.2.1发病日龄各年龄商品肉鸡均易感。20～45日龄的商品肉鸡发病流行最普遍。脐炎型发病较早，出生后即可能发生。其他病型4~10日龄即可能发生，通常30日龄前后的肉仔鸡发病较多。4.2.2发病率和病死率生条件、防治措施是否及时有效而差异较大。一般发病率为11%~69%,病死率3.8%~72.9%。4.2.3发病季节4.2.4.1消化道饲料及饮水被大肠杆菌污染，肉仔鸡采食或饮用后通过消化道而感染。24.2.4.2呼吸道4.3临床症状b)脐炎型：主要发生于孵化后期的胚胎及出壳后的雏鸡。病死率为3%~10%,有时高达40%。c)肠炎型：主要表现腹泻，类便呈黄绿色水样，消瘦，脱水，最后衰竭死亡。d)气囊炎型：多由败血型转变而米，发生气囊炎与肺炎，3周龄以上肉仔鸡多发。缩、凹陷，失明(多数为单侧失明)。g)脑炎型：发病鸡以嗜睡为主要特征。4.4.2脐炎型4.4.5关节炎型3病变关节(以跗关节多见)肿胀，滑液增多、混浊，关节囊内有干酪样物，有时出现关节粘连。4.5病原学诊断4.5.1病料的采集当鸡群发病后，最好将典型病例活体或整个4.5.2病原检验程序病原检验程序应按图1所示进行。待检病料待检病料增菌培养血清学试验鉴别培养图1大肠杆菌分离培养与鉴定程序框图4.5.3病原分离培养培养基上或增菌肉汤中，37℃培养24h。用抗菌药物治疗过的病鸡，在初步分离细菌时，应先进行增菌培养，然后进行鉴别培养。送检尸体剖开后应先进行接种培养，然后观察各内脏器官的病理变化。4.5.4病原体形态学观察4.5.4.1菌落特征大肠杆菌在营养琼脂平板培养基上形成的菌落边缘整齐、表面光滑、小、无色半透明、露珠样菌落；在麦康凯琼脂培养基上菌落呈粉红4.5.4.2细菌形态芽胞的短小杆菌，多单在或成双而不形成长链，多数有鞭毛，能运动。4.5.5生化试验鉴定4取分离物24h肉汤培养物腹腔接种18g~22g小鼠，每4.5.7血清学检测5防治5.1.1每批鸡出栏后应对鸡舍、用具进行典》的规定。清理完毕到下次进鸡前空舍至少2周。5.2饲养方式5.3饮水管理5.4喂料管理自由采食或定期饲喂。不应饲喂发霉变质的饲料。上市前7d,饲料中应不含任何药物或药物饲5.6药物防治5(规范性附录)A.1糖发酵试验A.1.1试验原理鉴别上具有一定的意义，是进行大肠杆菌鉴A.1.2培养基蛋白胨10g,牛肉浸膏3g,氯化钠5g,I.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1ml作指示剂，蒸馏水1000ml,调至pH7.4-7.6,分装于事先装有小倒管的小试管内，于121℃高压灭菌15min。供发酵试验常用的糖有葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露务种糖的加量一般为0.5%～1%,但以1%为好。除萄萄糖、甘露醇在培养基高压灭菌前加入外，乳糖、蔗糖和麦芽糖则需先配制成10%～20%水溶液，过滤除菌或115℃加热15min灭菌后，以无菌A.1.3试验方法以无菌操作，用接种环取少量供试大肠杆菌纯培养物接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养，每天观察并记录结果，根据需要可培养观察10d。A.1.4结果判定或产气。大多数菌株在24h内能分解乳糖、麦芽糖，半数菌株能发酵蔗糖。也可采用半固体琼脂培养基，即在上述培养基内按0.4%～0.6%加入琼脂，省去小倒管，做穿刺接种。若分解糖、醇类产酸产气，则培养基变为黄色且沿穿刺线或管壁及管底处有微小气泡形成。A.2甲基红(MR)试验A.2.1试验原理细菌在葡萄糖代谢中生成丙酮酸，丙酮酸再被分解生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，使pH降至4.5或更低，甲基红指示剂呈现红色。A.2.2培养基磷酸氢二钾(K₂HPO₄)5g,蛋白胨5g,葡萄糖5g,蒸馏水1000ml。各成分溶解后调至pH7.2,过滤，分装试管，121℃高压灭菌15min备用。A.2.3指示剂甲基红0.1g,95%酒精300ml,蒸馏水200mlA.2.4试验方法与结果判定在培养基中接种少量大肠杆菌培养物，于37℃培养2d~5d,然后于每5ml培养物中加入甲基红指示剂5滴～6滴，立即观察结果，呈鲜红色的判为阳性反应，弱阳性的为橘红色，阴性的为黄色。若48h培养物为阴性的(可取部分培养液试验),则应继续培养4d~5d重试。A.3维-培(V-P)二氏试验A.3.1试验原理6A.3.2培养基A.3.3试剂A.3.3.1奥梅拉(O-Meara)氏法试剂肌酸0.3g,氢氧化钾(KOH)40g,蒸馏水100m1。将KOII溶于蒸馏水中后加入肌酸。A.3.3.2贝克脱(Barrit)氏法试剂甲液为6%a-萘酚酒精溶液；乙液为40%KOH水溶液。A.3.4.1奥梅拉氏法取少量营养琼脂幼龄培养物接种，37℃培养48h,在每1ml培养物中加入相应试剂1ml,充分混匀后置于室温或37℃下4h观察结果，呈现红色者为阳性。A.3.4.2贝克脱氏法按A.3.4.1的方法接种并培养4d后，在每2.5ml培养物中加入相应试剂甲液0.6ml,再加乙液0.2ml,充分混匀，阳性反应即刻或在5min内呈现红色，若无红色出现，可静置于室温或37℃下2h内观察结果，仍不呈现红色者判为阴性。大肠杆菌的维-培(V-P)二氏试验阴性。A.4靛基质(吲哚，indole)试验A.4.1试验原理细菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成丙酮酸、淀基质(吲哚)、氨等，靛基质与试剂中的对二甲基A.4.2培养基蛋白胨(或胰蛋白陈)20g,氯化钠5g,蒸馏水1000ml。溶解后调至pll7.4,分装小试管，121A.4.3试剂对二甲氨基苯甲醛1g,95%洒精95ml,纯浓盐酸20ml。A.4.3.2柯凡克(Kovac)氏试剂对二甲氨基苯甲醛5g,纯戊醇75ml,纯浓盐酸25ml。A.4.4试验方法与结果判定取纯培养物少量接种后置于37℃培养24h~48h(必要时可培养4d~5d)后，每2ml培养物中加入上述试剂中的任何一种试剂2滴~3滴，轻摇试管，呈红色者为阳性。或先加少量已醚或二甲苯，A.5.1试验原理A.5.2培养基7氯化钠5g,硫酸镁(MgS0₄·7H₂O)0.2g,磷酸二氢铵1g,磷酸二氢钾1g,柠檬酸钠2g,琼脂15g,0.2%溴麝香草酚蓝40ml,蒸馏水1000ml。将各成分(指示剂除外)加热溶解后调至pH6.8,然后加入溴麝香草酚蓝指示剂，混匀后分装试管，121℃高压灭菌15min,制成斜面备用。A.5.3试验方法及结果判定8B.1纸片扩散法B.1.3菌液的准备18h,取出作为原菌液。再用普通肉汤培养基或1%无菌蛋白胨水把原菌液作1:1000倍稀释后备用。B.1.4操作步骤B.1.4.1涂菌B.1.4.2放置纸片B.1.5结果判定B.1.6注意事项B.2稀释法B.2.1药液的准备B.2.2培养基准备普通肉汤培养基，分装成13