2025年艾梅乙技能操作考试试题及答案

2025年艾梅乙技能操作考试试题及答案试题一：酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HIV抗体操作操作要求：使用某品牌HIV-1/2抗体检测试剂盒（双抗原夹心法），对编号为20250601-05的5份血清样本进行检测，完成从样本处理到结果判读的全流程操作，需包含质量控制步骤。操作步骤及评分标准：1.实验前准备（10分）-检查实验室环境：温度22±2℃，湿度50±10%（2分）；确认生物安全柜已开启30分钟，紫外线消毒记录完整（2分）。-试剂与耗材检查：试剂盒在有效期内（2分），取出包被板、酶结合物、底物液、终止液等，平衡至室温（30分钟）（2分）；准备移液器（10μl、100μl、1ml）并校准（2分）。2.样本处理（15分）-样本编号核对：5份样本编号与申请单一致（2分）；观察样本无溶血、脂血、黄疸（2分）。-离心处理：样本以3000rpm离心10分钟（3分），取上清液（避免吸到沉淀）（2分）；转移至1.5ml离心管，标记清晰（2分）。-加样准备：用100μl移液器吸取样本，每孔加入100μl（3份样本各加2孔，设阴/阳性对照各2孔）（2分）。3.温育与洗板（20分）-温育：封板膜密封酶标板，37℃温育60±5分钟（5分）；记录温育起始时间（2分）。-洗板：弃去孔内液体，每孔加入300μl洗涤液（pH7.4PBS-Tween20，0.05%），浸泡30秒后甩干（3分）；重复洗板5次（最后一次拍干）（5分）；检查孔内无残留液体（2分）。4.加酶结合物与二次温育（15分）-酶结合物稀释：按说明书比例（1:1000）用稀释液配制（3分），漩涡振荡混匀（2分）。-加样：每孔加入100μl酶结合物（样本孔、阴/阳性对照孔）（5分），避免气泡（2分）。-二次温育：37℃温育30±5分钟（3分）。5.显色与终止（15分）-底物液配制：临用前按1:1混合A液（H₂O₂）与B液（TMB）（3分），避光保存（2分）。-加底物：每孔加入100μl，37℃避光显色15±2分钟（5分），观察阳性对照孔显色（2分）。-终止反应：每孔加入50μl2MH₂SO₄（终止液），加入顺序与底物一致（3分）。6.结果判读与记录（20分）-读数：酶标仪波长450nm（参考波长630nm）读取OD值（3分），记录阴/阳性对照OD值（2分）。-临界值（CO）计算：CO=阴性对照平均OD值×2.1（需满足阴性对照OD≤0.15，阳性对照OD≥1.0）（5分）。-结果判定：样本OD≥CO为阳性，<CO为阴性（5分）；若阴性对照失控（OD>0.15）或阳性对照失控（OD<1.0），需重新检测（3分）。-记录：填写检测原始记录表（样本编号、OD值、结果、操作人员、日期）（2分）。答案示例（以某实际操作为例）：-阴性对照平均OD=0.08，CO=0.08×2.1=0.168；-样本20250601OD=0.21（阳性），20250602OD=0.12（阴性），20250603OD=0.17（灰区，需复检）；-阳性对照OD=2.3（符合要求），阴性对照OD=0.07（符合要求）；-原始记录完整，无漏项。试题二：梅毒螺旋体快速检测（免疫层析法）操作操作要求：使用某品牌梅毒螺旋体抗体快速检测试剂（双抗原夹心法），对编号为20250606-10的5份血浆样本进行检测，需说明结果判读标准及阳性样本后续处理流程。操作步骤及评分标准：1.实验前准备（10分）-环境与试剂检查：室温18-25℃（2分），试剂在有效期内（2分），平衡至室温（15分钟）（2分）；准备一次性吸管、计时器、生物安全垃圾袋（2分）；样本已离心（3000rpm×10分钟）（2分）。2.加样操作（15分）-样本处理：用吸管吸取血浆，垂直滴加3滴（约100μl）于加样孔（5分），避免气泡或溢出（3分）。-加缓冲液：立即滴加2滴缓冲液（约80μl）（5分），记录时间（2分）。3.结果判读（25分）-判读时间：15-20分钟内完成（超时无效）（5分）；-结果判定标准：-阳性：检测线（T）和质控线（C）均显色（10分）；-阴性：仅质控线（C）显色（5分）；-无效：质控线（C）未显色（无论T线是否显色）（5分）。4.阳性样本处理（20分）-复检：用同一方法复检（5分），若仍阳性，换用不同原理试剂（如TPPA）确认（5分）；-初筛阳性需注明“待确认”（3分），确认阳性报告“梅毒螺旋体抗体阳性”（3分）；-登记：录入实验室信息系统（LIS），包括样本编号、检测时间、结果、操作人员（4分）。5.生物安全（20分）-废弃物处理：检测卡放入感染性废物袋（双层黄色垃圾袋）（5分），吸管、手套等按医疗废物处理（5分）；-台面消毒：用0.5%含氯消毒液擦拭（作用30分钟）（5分）；-个人防护：操作前后洗手（7步洗手法）（3分），脱手套后消毒（2分）。答案示例：-样本20250606：T线与C线均显色（阳性）；-样本20250607：仅C线显色（阴性）；-样本20250608：C线未显色（无效，需重测）；-阳性样本20250606复检仍阳性，换用TPPA检测，结果阳性，最终报告“梅毒螺旋体抗体阳性”。试题三：乙肝病毒血清学标志物定量检测（化学发光法）操作操作要求：使用全自动化学发光免疫分析仪（型号：CL-8000），检测编号为20250611-15的5份血清样本的乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）（俗称“乙肝两对半”），需包含定标、质控及异常结果处理。操作步骤及评分标准：1.仪器与试剂准备（15分）-开机预热：仪器开机后预热30分钟（2分），检查水位、清洗液、废液桶（2分）；-试剂装载：各项目试剂（HBsAg、HBsAb等）装入试剂仓，确认有效期（3分），条码扫描正确（2分）；-定标：使用厂家提供的校准品（2-5点）进行定标（3分），定标曲线R²≥0.99（2分），记录定标结果（1分）。2.样本处理与上样（15分）-样本核对：编号与申请单一致（2分），无溶血、脂血（2分）；-离心：3000rpm×10分钟（2分），取上清至专用样本杯（2分），加盖防蒸发（2分）；-上样：样本杯放入样本架，条码面朝向扫描区（3分），设置检测项目（2分）。3.室内质量控制（20分）-质控品选择：使用高、中、低浓度质控品（3个水平）（3分），与样本同时检测（2分）；-质控规则：采用1₃s（1个质控点超过±3s）、2₂s（2个连续质控点超过±2s）规则（5分）；-质控判断：若质控失控，立即查找原因（试剂失效、仪器故障、操作误差）（5分），纠正后重测（3分），记录失控处理过程（2分）。4.检测流程（20分）-加样：仪器自动吸取样本（50μl）、磁珠（包被抗体）、发光底物（吖啶酯标记抗体）（5分）；-温育：37℃孵育18分钟（2分），磁分离清洗3次（去除未结合物质）（3分）；-检测：光电倍增管读取发光强度（RLU）（5分），通过定标曲线转换为浓度（IU/mL或S/CO）（5分）。5.结果判读与报告（20分）-参考区间：HBsAg（<0.05IU/mL）、HBsAb（<10mIU/mL）、HBeAg（<0.1S/CO）、HBeAb（>1.0S/CO）、HBcAb（>1.0S/CO）（5分）；-异常结果处理：HBsAg≥0.05IU/mL（阳性）需复核（3分），HBeAg阳性提示病毒复制活跃（2分），HBsAb≥10mIU/mL提示保护性抗体（2分）；-报告审核：双人核对结果（样本编号、项目、数值、参考区间）（3分），电子报告发送至LIS，纸质报告存档（5分）。答案示例：-样本20250611：HBsAg0.8IU/mL（阳性），HBeAg2.5S/CO（阳性），HBcAb3.0S/CO（阳性）→“大三阳”（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）；-样本20250612：HBsAb50mIU/mL（阳性），其余阴性→“既往感染或接种疫苗后”；-质控结果：高值质控HBsAg5.2IU/mL（靶值5.0±0.5），在控；低值质控HBsAg0.03IU/mL（靶值0.02±0.01），在控。试题四：艾梅乙检测实验室生物安全操作操作要求：模拟处理检测过程中发生的意外事件（如样本管破裂、试剂溅入眼睛），说明应急处理流程及日常生物安全规范。操作步骤及评分标准：1.样本管破裂处理（25分）-立即停止操作（2分），戴手套、护目镜（2分）；-用吸水纸覆盖破裂处（2分），倾倒0.5%含氯消毒液（有效氯5000mg/L）（5分），作用30分钟（3分）；-用镊子夹取碎片放入锐器盒（5分），污染区域再次消毒（3分），记录事件及处理过程（3分）。2.试剂溅入眼睛处理（25分）-立即至洗眼器处，用大量清水冲洗15分钟（5分），翻开眼睑冲洗（5分）；-联系实验室主管（3分），前往医院眼科检查（3分）；-记录暴露时间、试剂名称、处理措施（5分），启动职业暴露登记（4分），必要时进行医学监测（5分）。3.日常生物安全规范（50分）-个人防护：操作时穿防护服、戴手套（乳胶或丁腈）、口罩（医用外科）、护目镜（2分）；离室前脱卸（内面朝内折叠）（2分），洗手（7步洗手法）（2分）；-样本管理：接收时核对数量、状态（2分），保存于2-8℃（HBV/HCV/HIV样本保存7天，梅毒样本保存14天）（3分），转移时使用防漏容器（2分）；-废弃物管理：感染性废物（样本管、检测卡）高压蒸汽灭菌（121℃×30分钟）后焚烧（5分）；化学废物（废洗液）分类收集，交有资质单位处理（5分）；-实验室消毒：每日工作结束后用0.5%含氯消毒液擦拭台面（3分），紫外线消毒生物安全柜30分钟（2分）；-培训与演练：每半年进行生物安全培训（2分），每年模拟2次意外事件演练（2分），记录培训与演练结果（2分）；-应急预案：制定《实验室生物安全事件处置预案》（2分），明确