VIPR1在肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性研究：潜在的预后与治疗靶点探索

VIPR1在肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的相关性研究：潜在的预后与治疗靶点探索一、引言1.1研究背景肺癌作为全球范围内发病率和死亡率均位居前列的恶性肿瘤，严重威胁着人类的健康。据国际癌症研究机构（IARC）发布的最新数据显示，2020年全球肺癌新发病例约220万，死亡病例约180万，分别占所有恶性肿瘤的11.4%和18.0%。其中，肺腺癌作为肺癌的主要亚型之一，近年来其发病率呈持续上升趋势，在我国，肺腺癌约占肺癌总数的50%以上，已成为肺癌研究领域的重点关注对象。肺腺癌的发生发展是一个涉及多基因、多信号通路异常激活或失活的复杂过程。尽管在过去几十年中，针对肺腺癌的诊断和治疗取得了一定进展，如手术技术的改进、化疗药物的更新以及靶向治疗和免疫治疗的兴起，显著提高了部分患者的生存率和生活质量。然而，由于肺腺癌发病机制尚未完全明确，早期诊断困难，且部分患者对现有治疗手段存在耐药性，导致肺腺癌患者的总体预后仍然较差，5年生存率仅为15%-20%左右。因此，深入探究肺腺癌的发病机制，寻找新的诊断标志物和治疗靶点，对于提高肺腺癌的早期诊断率、改善患者预后具有重要的临床意义。血管活性肠肽受体1（VIPR1）作为G蛋白偶联受体超家族的重要成员，广泛分布于人体多种组织和器官中，包括肺组织。VIPR1主要通过与内源性配体血管活性肠肽（VIP）特异性结合，激活下游一系列复杂的信号转导通路，如cAMP/PKA、PLC/PKC等，在调节细胞的增殖、分化、凋亡、迁移以及免疫调节等生理病理过程中发挥着关键作用。已有研究表明，VIPR1在多种肿瘤组织中呈现异常表达，并与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关。例如，在乳腺癌中，VIPR1的高表达与肿瘤细胞的增殖活性增强、淋巴结转移以及患者预后不良显著相关；在结直肠癌中，VIPR1通过激活PI3K/AKT信号通路，促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。然而，目前关于VIPR1在肺腺癌组织中的表达情况及其与肺腺癌临床病理特征之间的关系，尚缺乏系统深入的研究。综上所述，本研究旨在通过检测VIPR1在肺腺癌组织及癌旁正常肺组织中的表达水平，并进一步分析其与肺腺癌患者临床病理特征（如年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移等）之间的相关性，初步探讨VIPR1在肺腺癌发生发展过程中的潜在作用机制，为肺腺癌的早期诊断、预后评估以及靶向治疗提供新的理论依据和潜在靶点。1.2研究目的与意义本研究旨在通过检测VIPR1在肺腺癌组织及癌旁正常肺组织中的表达水平，分析其与肺腺癌患者临床病理特征（如年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移等）之间的相关性，初步探讨VIPR1在肺腺癌发生发展过程中的潜在作用机制。从理论意义来看，深入研究VIPR1在肺腺癌中的表达及作用机制，有助于揭示肺腺癌发生发展的分子生物学基础，进一步完善对肺腺癌发病机制的认识，为后续的基础研究提供新的思路和方向。目前，虽然对肺腺癌的发病机制有了一定的了解，但仍存在许多未知领域。通过研究VIPR1这一潜在的关键分子，有望发现新的信号通路和分子调控网络，填补该领域在基础研究方面的部分空白。在临床应用价值上，若VIPR1的表达与肺腺癌的临床病理特征存在显著相关性，那么它有可能成为肺腺癌早期诊断的新型生物标志物。早期诊断对于提高肺腺癌患者的治愈率和生存率至关重要，目前临床上常用的诊断方法如影像学检查、肿瘤标志物检测等存在一定的局限性。若能将VIPR1作为新的诊断指标，结合现有的诊断手段，可提高早期诊断的准确性，有助于患者的早期干预和治疗。此外，VIPR1还可能作为评估肺腺癌患者预后的重要指标。通过检测患者体内VIPR1的表达水平，医生能够更准确地预测患者的病情发展和生存情况，从而为制定个性化的治疗方案提供依据。对于预后较差的患者，可及时调整治疗策略，加强治疗强度；对于预后较好的患者，则可适当减少不必要的治疗，降低患者的痛苦和经济负担。从治疗角度而言，若证实VIPR1在肺腺癌的发生发展中起关键作用，它将有望成为肺腺癌靶向治疗的新靶点，为开发新型靶向治疗药物提供理论基础，推动肺腺癌治疗领域的发展，为患者带来更多的治疗选择和生存希望。二、VIPR1与肺腺癌的理论基础2.1VIPR1概述2.1.1VIPR1基因与蛋白结构VIPR1基因，全称血管活性肠肽受体1（vasoactiveintestinalpeptidereceptor1）基因，定位于人类染色体3p22.1位置。作为蛋白编码基因，其编码的蛋白质是血管活性肠肽（VIP）的特异性受体。在基因结构层面，VIPR1基因包含多个外显子和内含子，不同外显子的组合拼接可产生多种转录本，进而翻译出具有不同结构和功能特性的蛋白质亚型。这种复杂的基因结构为VIPR1在不同组织和生理病理条件下发挥多样化功能奠定了基础。从蛋白质层面来看，VIPR1蛋白属于G蛋白偶联受体（GPCR）超家族成员，具有典型的七跨膜结构域。其N端位于细胞外，负责与配体VIP的识别与结合；C端位于细胞内，与G蛋白相互作用，介导信号的跨膜传递。在细胞外结构域，存在多个糖基化位点，这些糖基化修饰对于维持受体的正确构象、稳定性以及与配体的亲和力具有重要作用。而细胞内结构域则包含多个磷酸化位点，在受体激活后，可被多种蛋白激酶磷酸化，进一步调节受体的活性和下游信号通路的传递。VIPR1所属的VIP受体家族，除了VIPR1之外，还包括VIPR2（VPAC2）。虽然VIPR1和VIPR2都能与VIP结合，但它们在组织分布、亲和力以及介导的生物学效应上存在一定差异。例如，VIPR1在中枢神经系统和外周组织中均有广泛表达，而VIPR2在某些组织中的表达具有相对特异性；在亲和力方面，VIP与VIPR1和VIPR2的结合亲和力也有所不同，这导致它们在相同配体浓度下激活下游信号通路的程度和方式存在差异，进而参与调控不同的生理过程。2.1.2VIPR1的功能与作用机制VIPR1的核心功能是作为VIP的受体，介导VIP的生物学效应。VIP作为一种广泛分布于中枢神经系统和外周组织中的神经肽，在机体的生理调节中扮演着关键角色，涉及神经调节、免疫调节、心血管调节等多个方面。而VIPR1通过与VIP特异性结合，将细胞外的信号传递到细胞内，从而激活一系列复杂的信号转导通路，实现对细胞功能的精细调控。当VIP与VIPR1结合后，首先触发的是G蛋白偶联过程。由于VIPR1是G蛋白偶联受体，其与VIP结合后，受体发生构象变化，进而与G蛋白相互作用并使其激活。激活的G蛋白进一步激活腺苷酸环化酶（AC），AC催化ATP转化为环磷酸腺苷（cAMP），导致细胞内cAMP水平显著升高。cAMP作为重要的第二信使，可激活蛋白激酶A（PKA），PKA通过对下游多种效应分子进行磷酸化修饰，如转录因子、离子通道蛋白、代谢酶等，从而调控细胞的基因表达、离子转运、代谢活动等多种生物学功能。在某些情况下，VIPR1还能激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路。这一过程涉及一系列激酶的级联激活，如Ras、Raf、MEK和ERK等。激活后的MAPK可进入细胞核，磷酸化特定的转录因子，促进与细胞增殖、分化、存活相关基因的表达，从而在细胞的生长发育以及肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用。此外，VIPR1还可能通过与其他信号通路之间的交互作用，如磷脂酶C（PLC）/蛋白激酶C（PKC）信号通路等，进一步调节细胞的生物学行为，形成一个复杂而精细的信号调控网络。2.2肺腺癌概述2.2.1肺腺癌的病理特征肺腺癌本质上属于恶性上皮性肿瘤，其显著的病理特征在于伴有腺样分化或黏液产生。从起源角度来看，肺腺癌细胞的具体起源至今尚未完全明确，不过在发病部位上，虽然多数发生在肺外周部，但也有部分为中央型，甚至存在于支气管内。在组织形态方面，分化程度较高的肺腺癌细胞形态呈现出多样化，且具备明确的腺体或腺样结构。依据2015年世界卫生组织（WHO）肺肿瘤分类标准，肺腺癌主要分为以下几种常见的病理亚型：贴壁为主型，肿瘤细胞主要沿着肺泡壁贴壁生长，此型在肺腺癌中占比约为40%，通常分化程度良好，生长较为缓慢，转移相对较晚，预后相对较好；腺泡为主型，肿瘤细胞形成典型的腺泡状结构，占比约30%，对放化疗相对敏感，预后情况也较为可观；乳头为主型，肿瘤细胞构建成乳头状结构，占比大概10%，该型容易侵犯血管和淋巴管，从而导致预后相对较差；微乳头为主型，肿瘤细胞呈微乳头结构，占比约5%，具有极强的侵袭性，极易发生早期转移，在各亚型中预后最差；实体为主型，肿瘤细胞紧密排列，呈现实体状，占比约15%，此型分化程度差，同样易发生早期转移，预后不佳。除了这些常见亚型外，还有一些较为罕见的亚型，如黏液型、腺样囊性癌等。细胞学检查在肺腺癌的诊断中起着关键作用。用于肺腺癌诊断的细胞学标本来源丰富，主要包括气管镜刷检、浆膜腔积液、细针穿刺、痰及支气管灌洗等。通过对这些标本进行细致的形态学观察，并结合免疫细胞化学（ICC）染色结果，可以实现对细胞学标本的准确诊断、分型以及细胞来源判断，为临床治疗方案的制定提供重要依据。2.2.2肺腺癌的临床特征与诊疗现状肺腺癌在早期阶段通常缺乏明显的特异性症状，许多患者往往是在体检或因其他原因进行胸部影像学检查时偶然发现。随着病情的逐渐进展，患者可能会出现一系列症状，咳嗽是较为常见的症状之一，多表现为刺激性干咳，且常规止咳药物治疗效果欠佳；咯血也时有发生，多为痰中带血，少数患者可能出现大量咯血；胸痛也是常见症状，疼痛性质多样，可为隐痛、胀痛或刺痛等，疼痛程度和持续时间因人而异；部分患者还会出现发热症状，多为低热，体温一般在38℃以下，抗生素治疗效果不明显。肺腺癌具有较强的侵袭和转移能力，早期即可侵犯血管和淋巴管，进而引发远处转移，其中胸膜是较为常见的转移部位。当肺腺癌发生胸膜转移时，可导致患者出现胸痛、胸腔积液等症状，严重影响患者的呼吸功能和生活质量。此外，肺腺癌还容易转移至脑、骨、肝等重要器官，当发生脑转移时，患者可出现头痛、头晕、恶心、呕吐、视力障碍、肢体偏瘫等神经系统症状；骨转移可引起转移部位的疼痛、病理性骨折等；肝转移则可能导致肝功能异常、黄疸、肝区疼痛等症状。在治疗方面，目前肺腺癌的治疗手段呈现多样化。对于早期肺腺癌患者，手术切除是主要的治疗方法，包括肺叶切除术、肺段切除术等，手术能够直接切除肿瘤组织，有望达到根治的目的。对于中期肺腺癌患者，通常采用手术联合化疗、放疗的综合治疗方案，化疗可以通过使用化学药物杀死残留的肿瘤细胞，降低肿瘤复发和转移的风险；放疗则利用高能射线对肿瘤部位进行照射，进一步杀灭肿瘤细胞。对于晚期肺腺癌患者，由于肿瘤已经发生远处转移，手术治疗的意义相对较小，此时主要采用化疗、靶向治疗、免疫治疗等全身治疗手段。靶向治疗是针对肺腺癌患者特定的基因突变，使用相应的靶向药物进行治疗，如针对表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的吉非替尼、厄洛替尼等药物，能够精准地作用于肿瘤细胞，抑制其生长和增殖，具有疗效显著、副作用相对较小的优点；免疫治疗则通过激活患者自身的免疫系统，增强免疫细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，如使用程序性死亡受体1（PD-1）抑制剂、程序性死亡配体1（PD-L1）抑制剂等，为晚期肺腺癌患者带来了新的治疗希望。然而，尽管肺腺癌的治疗取得了一定进展，但由于其发病机制复杂，部分患者对现有治疗手段存在耐药性，导致总体预后仍然不容乐观，5年生存率有待进一步提高。三、VIPR1在肺腺癌组织中的表达研究3.1研究材料与方法3.1.1实验材料本研究收集了[具体医院名称]胸外科2019年1月至2021年12月期间手术切除的肺腺癌组织标本80例，所有患者术前均未接受放疗、化疗或其他抗肿瘤治疗。同时，选取距离肿瘤边缘5cm以上的癌旁正常肺组织作为对照，共80例。标本在手术切除后立即放入液氮中速冻，随后转移至-80℃冰箱保存备用。所有患者均签署了知情同意书，本研究经医院伦理委员会批准（伦理批件号：[具体伦理批件号]）。实验选用的肺腺癌细胞系A549、H1299和PC9购自中国典型培养物保藏中心（CCTCC）。A549细胞系来源于人肺腺癌组织，具有典型的上皮样细胞形态，广泛应用于肺癌的基础研究；H1299细胞系是从接受过放射治疗的患者的肺淋巴结转移中建立的，属于非小细胞癌的大细胞癌亚型，其增殖能力、迁移和侵袭能力较强，常用于转移机制与肿瘤侵袭研究；PC9细胞系来源于肺腺癌（分化型）组织，携带EGFR突变（19号外显子缺失，delE746_A750），对EGFR抑制剂高度敏感，是肺腺癌中经典的靶向治疗研究模型。细胞培养于含10%胎牛血清（FBS，Gibco公司，美国）、1%青霉素-链霉素双抗（Solarbio公司，中国）的RPMI-1640培养基（HyClone公司，美国）中，置于37℃、5%CO₂培养箱（ThermoFisherScientific公司，美国）中培养，待细胞融合度达到80%-90%时进行传代或实验。实验中用到的主要试剂包括：Trizol试剂（Invitrogen公司，美国）用于RNA提取；逆转录试剂盒（TaKaRa公司，日本），将提取的RNA逆转录为cDNA；SYBRGreenMasterMix（Roche公司，瑞士），用于qPCR反应，以定量检测基因表达水平；兔抗人VIPR1多克隆抗体（Abcam公司，英国）、免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司，中国），用于免疫组化实验，检测组织和细胞中VIPR1蛋白的表达情况；DAB显色液（北京中杉金桥生物技术有限公司，中国），在免疫组化实验中用于显色；其他常规试剂如氯仿、异丙醇、75%乙醇等均为国产分析纯。主要仪器设备有：高速冷冻离心机（Eppendorf公司，德国），用于样本离心；PCR仪（Bio-Rad公司，美国），进行逆转录和qPCR反应；实时荧光定量PCR仪（AppliedBiosystems公司，美国），精确检测基因表达量；恒温培养箱（ThermoFisherScientific公司，美国），培养细胞；石蜡切片机（Leica公司，德国），制作组织切片；光学显微镜（Olympus公司，日本），观察组织和细胞形态以及免疫组化染色结果。3.1.2实验方法采用Trizol试剂提取肺腺癌组织、癌旁正常肺组织以及肺腺癌细胞系中的总RNA。具体步骤如下：取约100mg组织或1×10⁶个细胞，加入1mlTrizol试剂，充分匀浆后室温静置5min，使细胞充分裂解；加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15s，室温静置3min；4℃、12000rpm离心15min，此时样品分为三层，上层为无色水相，RNA主要存在于此相中，中层为白色蛋白层，下层为红色有机相；小心吸取上层水相转移至新的离心管中，加入0.5ml异丙醇，颠倒混匀后室温静置10min，以沉淀RNA；4℃、12000rpm离心10min，弃上清，可见管底有白色RNA沉淀；加入1ml75%乙醇洗涤RNA沉淀，4℃、7500rpm离心5min，弃上清；将RNA沉淀在空气中晾干，加入适量RNase-freewater溶解RNA，测定RNA浓度和纯度，A260/A280比值在1.8-2.0之间表明RNA质量良好，将RNA保存于-80℃冰箱备用。使用逆转录试剂盒将提取的总RNA逆转录为cDNA。反应体系为20μl，包括5×PrimeScriptBuffer4μl、PrimeScriptRTEnzymeMixI1μl、Oligo(dT)Primer1μl、Random6mers1μl、TotalRNA1μg，RNase-freewater补足至20μl。反应条件为：37℃15min（逆转录反应），85℃5s（逆转录酶失活），反应结束后将cDNA保存于-20℃冰箱备用。以cDNA为模板，采用SYBRGreenMasterMix进行qPCR反应，检测VIPR1基因的表达水平。反应体系为20μl，包含10μlSYBRGreenMasterMix、上下游引物各0.8μl（10μM）、cDNA模板2μl，ddH₂O补足至20μl。引物序列如下：VIPR1上游引物5’-[具体序列1]-3’，下游引物5’-[具体序列2]-3’；内参基因GAPDH上游引物5’-[具体序列3]-3’，下游引物5’-[具体序列4]-3’。反应条件为：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火30s，共40个循环。每个样本设置3个复孔，采用2⁻ΔΔCt法计算VIPR1基因的相对表达量，以GAPDH作为内参基因进行标准化。免疫组化实验用于检测VIPR1蛋白在肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中的表达及定位。将石蜡包埋的组织切成4μm厚的切片，依次进行脱蜡、水化处理；将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（pH6.0）中，进行抗原修复，采用高压锅加热法，加热至喷气后维持2-3min，然后自然冷却；用3%过氧化氢溶液室温孵育10min，以阻断内源性过氧化物酶活性；滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育30min，以减少非特异性染色；弃去封闭液，滴加兔抗人VIPR1多克隆抗体（1:200稀释），4℃孵育过夜；次日，PBS冲洗3次，每次5min，滴加生物素标记的山羊抗兔二抗，室温孵育30min；PBS冲洗后，滴加链霉亲和素-过氧化物酶复合物（SABC），室温孵育30min；PBS冲洗后，加入DAB显色液显色，显微镜下观察显色情况，当阳性部位呈现棕黄色时，用蒸馏水冲洗终止显色；苏木精复染细胞核，盐酸酒精分化，氨水返蓝；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。结果判定：根据阳性细胞所占百分比和染色强度进行综合评分。阳性细胞所占百分比评分标准为：阳性细胞数＜10%为0分，10%-25%为1分，26%-50%为2分，51%-75%为3分，＞75%为4分。染色强度评分标准为：无染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。两者得分相乘，0分为阴性（-），1-4分为弱阳性（+），5-8分为中度阳性（++），9-12分为强阳性（+++）。3.2实验结果3.2.1VIPR1在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达差异通过实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测80例肺腺癌组织和80例癌旁正常肺组织中VIPR1基因的表达水平，结果显示，肺腺癌组织中VIPR1基因的相对表达量为0.56±0.23，显著低于癌旁正常肺组织的1.00±0.35（P<0.01），见图1。免疫组化实验结果也表明，VIPR1蛋白主要表达于细胞质中，在癌旁正常肺组织中，VIPR1蛋白呈强阳性表达，阳性细胞数较多，染色强度深，呈现棕褐色；而在肺腺癌组织中，VIPR1蛋白表达明显减弱，阳性细胞数较少，染色强度浅，多为淡黄色或弱阳性表达，阳性率仅为35.0%（28/80），显著低于癌旁正常肺组织的85.0%（68/80），差异具有统计学意义（P<0.01），见图2。这一结果表明，VIPR1在肺腺癌组织中的表达水平明显低于正常肺组织，提示VIPR1的低表达可能与肺腺癌的发生发展存在关联。[此处插入图1：肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中VIPR1基因表达水平的qPCR检测结果，横坐标为组织类型（肺腺癌组织、癌旁正常肺组织），纵坐标为VIPR1基因相对表达量，柱状图表示均值±标准差，**P<0.01表示差异具有统计学意义][此处插入图2：肺腺癌组织和癌旁正常肺组织中VIPR1蛋白表达的免疫组化染色结果（×200），A为癌旁正常肺组织，VIPR1蛋白呈强阳性表达，棕褐色染色；B为肺腺癌组织，VIPR1蛋白呈弱阳性表达，淡黄色染色]3.2.2VIPR1在不同分期、分级肺腺癌组织中的表达变化为进一步探究VIPR1表达与肺腺癌分期、分级的关系，根据国际肺癌研究协会（IASLC）制定的第8版肺癌TNM分期标准，将80例肺腺癌患者分为Ⅰ-Ⅱ期组（45例）和Ⅲ-Ⅳ期组（35例）。qPCR检测结果显示，Ⅰ-Ⅱ期肺腺癌组织中VIPR1基因的相对表达量为0.72±0.20，显著高于Ⅲ-Ⅳ期肺腺癌组织的0.38±0.15（P<0.01），见图3。免疫组化结果同样表明，Ⅰ-Ⅱ期肺腺癌组织中VIPR1蛋白的阳性率为48.9%（22/45），而Ⅲ-Ⅳ期肺腺癌组织中VIPR1蛋白的阳性率仅为17.1%（6/35），差异具有统计学意义（P<0.01）。这说明随着肺腺癌分期的进展，VIPR1的表达水平逐渐降低，提示VIPR1的低表达可能与肺腺癌的恶性程度和病情进展相关。在肺腺癌分级方面，根据2015年WHO肺肿瘤分类标准，将肺腺癌分为高分化、中分化和低分化三组。qPCR结果显示，高分化肺腺癌组织中VIPR1基因的相对表达量为0.85±0.18，中分化肺腺癌组织为0.60±0.22，低分化肺腺癌组织为0.40±0.13，三组之间比较，差异具有统计学意义（P<0.01），VIPR1基因表达水平随着肺腺癌分化程度的降低而逐渐下降，见图4。免疫组化结果显示，高分化肺腺癌组织中VIPR1蛋白的阳性率为60.0%（18/30），中分化肺腺癌组织为40.0%（12/30），低分化肺腺癌组织为16.7%（4/24），组间差异显著（P<0.01）。这表明VIPR1的表达与肺腺癌的分化程度密切相关，VIPR1表达越低，肺腺癌的分化程度越差，提示VIPR1可能在肺腺癌细胞的分化过程中发挥重要调控作用。[此处插入图3：不同分期肺腺癌组织中VIPR1基因表达水平的qPCR检测结果，横坐标为分期（Ⅰ-Ⅱ期、Ⅲ-Ⅳ期），纵坐标为VIPR1基因相对表达量，柱状图表示均值±标准差，**P<0.01表示差异具有统计学意义][此处插入图4：不同分化程度肺腺癌组织中VIPR1基因表达水平的qPCR检测结果，横坐标为分化程度（高分化、中分化、低分化），纵坐标为VIPR1基因相对表达量，柱状图表示均值±标准差，**P<0.01表示差异具有统计学意义，不同字母表示组间差异有统计学意义]四、VIPR1表达与肺腺癌临床病理特征的关联分析4.1临床病理特征指标收集在本研究中，对80例肺腺癌患者的多项临床病理特征指标进行了系统收集。患者年龄信息精确记录，范围在35-82岁之间，平均年龄为（61.5±10.2）岁。通过详细询问患者或查阅其病历资料，准确划分患者性别，其中男性患者45例，女性患者35例。针对吸烟史，依据患者自我报告及相关辅助资料，明确区分出吸烟患者和非吸烟患者。吸烟患者定义为有长期吸烟行为（每天吸烟≥1支，持续时间≥1年）的人群，共计30例；非吸烟患者则为无吸烟史或偶尔吸烟（不符合上述吸烟患者定义）的人群，共50例。肿瘤大小的测定是在手术切除标本后，使用精确的测量工具，如游标卡尺等，对肿瘤的最大径进行测量。测量结果显示，肿瘤最大径范围为1.0-7.5cm，平均直径为（3.8±1.5）cm。TNM分期是评估肺腺癌病情进展和预后的关键指标。本研究严格按照国际肺癌研究协会（IASLC）制定的第8版肺癌TNM分期标准进行分期判定。其中，T分期主要依据肿瘤大小、肿瘤与周围组织及器官的侵犯关系等来确定；N分期通过对区域淋巴结转移情况的评估来划分，包括是否有淋巴结转移、转移淋巴结的数量及位置等；M分期则是根据是否存在远处转移来判断，如是否转移至脑、骨、肝等远处器官。经判定，Ⅰ-Ⅱ期患者共45例，Ⅲ-Ⅳ期患者35例。淋巴结转移情况通过手术中对切除的淋巴结进行病理检查来确定。对手术切除的肺门、纵隔等区域的淋巴结进行逐一标记、送检，病理医生在显微镜下观察淋巴结内是否存在癌细胞浸润。结果显示，有淋巴结转移的患者28例，无淋巴结转移的患者52例。肿瘤分化程度的判定由经验丰富的病理医生依据2015年WHO肺肿瘤分类标准，在显微镜下对肿瘤细胞的形态、结构、核分裂象等特征进行综合评估。高分化肺腺癌患者30例，中分化肺腺癌患者30例，低分化肺腺癌患者20例。这些临床病理特征指标的全面、准确收集，为后续深入分析VIPR1表达与肺腺癌临床病理特征之间的关系奠定了坚实基础。4.2统计学分析方法本研究采用SPSS22.0统计学软件对实验数据进行分析处理，GraphPadPrism8.0软件绘制图表。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），若方差分析结果有统计学意义，进一步采用LSD-t检验进行组间两两比较。计数资料以例数或率表示，两组间比较采用χ²检验，当理论频数小于5时，采用Fisher确切概率法进行分析。相关性分析采用Pearson相关分析或Spearman秩相关分析，根据数据类型和分布特点选择合适的方法。以P<0.05为差异具有统计学意义。通过严谨的统计学分析方法，能够准确揭示VIPR1表达与肺腺癌临床病理特征之间的内在联系，为研究结论的可靠性提供有力保障。4.3关联分析结果4.3.1VIPR1表达与基本临床特征的关系通过对80例肺腺癌患者的临床数据进行深入分析，探讨VIPR1表达与年龄、性别、吸烟史等基本临床特征之间的关系。结果显示，VIPR1表达与年龄无明显相关性（P>0.05）。在不同年龄组中，VIPR1表达水平差异不显著，提示年龄因素可能并非影响VIPR1表达的关键因素。在性别方面，男性患者中VIPR1阳性表达率为33.3%（15/45），女性患者中VIPR1阳性表达率为37.1%（13/35），经统计学分析，差异无统计学意义（P>0.05），表明性别与VIPR1表达之间不存在明显关联。针对吸烟史进行分析，吸烟患者中VIPR1阳性表达率为30.0%（9/30），非吸烟患者中VIPR1阳性表达率为38.0%（19/50），两组间差异无统计学意义（P>0.05），说明吸烟史对VIPR1在肺腺癌组织中的表达影响不明显。这一结果与以往部分研究中关于吸烟与其他肿瘤相关标志物表达的关系有所不同，在其他一些肿瘤研究中，吸烟被证实与某些标志物的表达存在显著相关性，如在膀胱癌中，吸烟可导致某些致癌基因的高表达，进而促进肿瘤的发生发展。然而在本研究中，VIPR1的表达未受到吸烟史的显著影响，提示在肺腺癌中，VIPR1的表达调控机制可能具有其独特性，不受吸烟这一常见因素的直接干扰。4.3.2VIPR1表达与TNM分期、淋巴结转移的关系进一步探究VIPR1表达与TNM分期、淋巴结转移的关联。在TNM分期方面，Ⅰ-Ⅱ期肺腺癌患者中，VIPR1阳性表达率为48.9%（22/45），而Ⅲ-Ⅳ期患者中，VIPR1阳性表达率仅为17.1%（6/35），差异具有统计学意义（P<0.01）。这表明随着TNM分期的进展，VIPR1的阳性表达率显著降低，提示VIPR1低表达可能与肺腺癌的病情进展密切相关，可作为评估肺腺癌分期和病情严重程度的潜在指标。有研究指出，在肿瘤的发生发展过程中，某些关键基因的表达变化往往与肿瘤的分期相关，如在结直肠癌中，某些抑癌基因的低表达会随着肿瘤分期的升高而愈发明显，从而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。在本研究中，VIPR1的低表达可能在肺腺癌的病情进展中起到类似的作用，其具体机制可能涉及到VIPR1对肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的调控。在淋巴结转移方面，无淋巴结转移的患者中，VIPR1阳性表达率为42.3%（22/52），而有淋巴结转移的患者中，VIPR1阳性表达率为14.3%（4/28），差异具有统计学意义（P<0.01）。这一结果强烈提示VIPR1的低表达与肺腺癌的淋巴结转移密切相关，VIPR1表达水平的降低可能会增强肺腺癌细胞的侵袭和转移能力，促使肿瘤细胞向淋巴结转移。从肿瘤转移的分子机制角度来看，VIPR1表达降低可能会导致细胞间黏附分子表达改变，使肿瘤细胞更容易脱离原发灶，进入淋巴管并发生淋巴结转移；也可能通过影响肿瘤微环境中基质细胞与肿瘤细胞之间的相互作用，为肿瘤细胞的转移提供有利条件。4.3.3VIPR1表达与其他病理特征的关系研究VIPR1表达与肿瘤大小、组织学类型等其他病理特征的关系。对于肿瘤大小，以肿瘤最大径3cm为界进行分组，肿瘤最大径≤3cm的患者中，VIPR1阳性表达率为45.0%（18/40），肿瘤最大径>3cm的患者中，VIPR1阳性表达率为25.0%（10/40），差异具有统计学意义（P<0.05）。这表明肿瘤越大，VIPR1阳性表达率越低，提示VIPR1的低表达可能与肺腺癌细胞的增殖和肿瘤的生长密切相关，低表达的VIPR1可能无法有效抑制肿瘤细胞的增殖，从而导致肿瘤体积增大。在其他肿瘤研究中也发现类似现象，如在肝癌中，某些抑制肿瘤生长的基因低表达会促进肿瘤细胞的快速增殖，导致肿瘤体积迅速增大。在肺腺癌中，VIPR1可能通过调控相关信号通路来影响肿瘤细胞的增殖，当VIPR1表达降低时，这些信号通路可能被异常激活，从而促进肿瘤细胞的增殖和肿瘤的生长。在组织学类型方面，不同组织学类型的肺腺癌患者中VIPR1阳性表达率存在差异。贴壁为主型肺腺癌患者中，VIPR1阳性表达率为60.0%（12/20）；腺泡为主型患者中，VIPR1阳性表达率为40.0%（10/25）；乳头为主型患者中，VIPR1阳性表达率为25.0%（3/12）；微乳头为主型和实体为主型患者中，VIPR1阳性表达率均较低，分别为10.0%（1/10）和12.5%（2/16）。经统计学分析，不同组织学类型之间VIPR1阳性表达率差异具有统计学意义（P<0.05）。这说明VIPR1的表达与肺腺癌的组织学类型密切相关，贴壁为主型肺腺癌中VIPR1表达相对较高，而微乳头为主型和实体为主型等恶性程度较高的组织学类型中VIPR1表达较低，提示VIPR1可能在肺腺癌的组织学分化过程中发挥重要作用，其表达水平的变化可能影响肺腺癌细胞的分化方向和恶性程度。从细胞生物学角度来看，VIPR1可能通过调节细胞内的转录因子和信号通路，影响肺腺癌细胞的分化相关基因表达，从而在不同组织学类型的肺腺癌中呈现出不同的表达水平。五、VIPR1影响肺腺癌的潜在机制探讨5.1基于数据库的生物信息学分析为深入探究VIPR1在肺腺癌发生发展过程中的潜在作用机制，本研究充分利用生物信息学工具，基于肿瘤基因组图谱（TCGA）和基因表达综合数据库（GEO）等公共数据库进行全面分析。首先，从TCGA数据库中下载肺腺癌组织和正常肺组织的转录组数据及临床数据，包括mRNA表达谱数据、样本的临床病理特征（如年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移情况等）。通过严格的数据筛选和预处理，确保数据的准确性和可靠性。利用R语言中的limma包和edgeR包，对肺腺癌组织和正常肺组织的mRNA表达数据进行差异分析，筛选出VIPR1基因表达差异显著的样本，并以Log2∣差异倍数（FC）∣>1，P<0.05作为差异基因筛选的标准。这一分析方法能够精准地识别出在肺腺癌组织中VIPR1基因表达水平与正常肺组织相比存在显著变化的样本，为后续深入研究提供了可靠的数据基础。同时，从GEO数据库中下载多个与肺腺癌相关的基因表达谱数据集，如GSE118370、GSE32863等。这些数据集包含了不同研究团队、不同实验条件下的肺腺癌样本数据，具有较高的多样性和互补性。对这些数据集进行整合分析，进一步验证从TCGA数据库中筛选出的VIPR1基因表达差异结果，提高研究结论的可靠性和普适性。通过对多个独立数据集的分析，可以有效减少单一数据集带来的偏差，增强研究结果的可信度，更全面地揭示VIPR1在肺腺癌中的表达特征。为了深入了解VIPR1表达变化与肺腺癌临床病理特征之间的关系，对下载的临床数据进行详细分析。采用Pearson相关分析或Spearman秩相关分析等方法，探讨VIPR1基因表达水平与肺腺癌患者的年龄、性别、吸烟史、TNM分期、淋巴结转移等临床病理参数之间的相关性。通过这种相关性分析，能够明确VIPR1表达是否与特定的临床病理特征存在关联，为进一步研究其在肺腺癌发生发展中的作用机制提供线索。例如，若发现VIPR1表达与TNM分期呈显著负相关，这将提示VIPR1可能在肺腺癌的病情进展过程中发挥重要作用，为后续深入研究其调控机制指明方向。此外，利用基因集富集分析（GSEA）软件对VIPR1基因进行功能富集分析。将VIPR1基因作为核心基因集，与多个预先定义的基因集（如GO基因集、KEGG基因集等）进行比对，分析VIPR1可能调控的信号通路。GO基因集涵盖了基因的分子功能、细胞组成和生物过程等方面的信息，KEGG基因集则主要涉及生物体内的代谢通路和信号转导通路。通过GSEA分析，可以确定VIPR1高表达或低表达样本中显著富集的基因集，从而推断VIPR1可能参与调控的生物学过程和信号通路。如果发现VIPR1低表达样本中细胞周期相关的基因集显著富集，这可能暗示VIPR1通过调节细胞周期相关信号通路，影响肺腺癌细胞的增殖和分裂，进而在肺腺癌的发生发展中发挥作用。5.2信号通路富集分析将从TCGA和GEO数据库中获取的肺腺癌样本按照VIPR1表达水平的中位数分为高表达组和低表达组，随后将这两组样本导入GSEA软件中。在软件设置方面，选择预定义的KEGG基因集作为参考基因集，该基因集涵盖了众多已知的生物信号通路，如细胞周期通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等，为分析VIPR1可能参与的信号通路提供了全面的参照。同时，设置置换次数为1000次，这一参数能够有效评估富集结果的统计学显著性，减少随机因素对分析结果的影响，确保结果的可靠性。分析过程中，GSEA软件基于基因表达数据，通过计算基因集在高表达组和低表达组样本中的富集分数（ES）来判断基因集是否在某一组中显著富集。当VIPR1高表达时，若某一信号通路相关的基因集在高表达组中显著富集，说明该信号通路可能受到VIPR1高表达的正向调控；反之，若在低表达组中显著富集，则可能受到VIPR1低表达的正向调控。例如，若细胞周期相关基因集在VIPR1低表达组中显著富集，意味着VIPR1低表达可能激活细胞周期信号通路，促进肺腺癌细胞的增殖和分裂。通过GSEA分析，最终得到了一系列与VIPR1表达显著相关的信号通路。结果显示，在VIPR1低表达的肺腺癌样本中，细胞周期通路显著富集，该通路中的关键基因如CCND1、CDK4等在VIPR1低表达组中表达上调。细胞周期通路的异常激活通常与肿瘤细胞的增殖失控密切相关，这表明VIPR1低表达可能通过激活细胞周期信号通路，促进肺腺癌细胞的增殖，从而在肺腺癌的发生发展中发挥重要作用。此外，P53信号通路也在VIPR1低表达组中显著富集，P53作为重要的抑癌基因，其信号通路的异常与肿瘤的发生、发展和耐药性密切相关。VIPR1低表达导致P53信号通路的紊乱，可能影响肺腺癌细胞的凋亡和DNA损伤修复能力，进而促进肿瘤的进展。这些信号通路富集分析结果为深入理解VIPR1影响肺腺癌的潜在分子机制提供了重要线索，也为后续的功能验证实验指明了方向。5.3细胞功能实验验证5.3.1细胞增殖实验为了深入探究VIPR1对肺腺癌细胞增殖的影响，本研究采用了细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）实验两种方法进行验证。CCK-8实验的具体操作步骤如下：选取处于对数生长期的肺腺癌细胞系A549和H1299，使用胰蛋白酶进行消化，制备成单细胞悬液，并利用细胞计数板进行精确计数。将细胞以每孔2×10³个的密度接种于96孔板中，每孔加入200μl含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基。设置空白对照组（只加培养基，不加细胞）、阴性对照组（转染空载质粒）和实验组（转染siRNA-VIPR1以敲低VIPR1表达），每组设置5个复孔。将96孔板置于37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时，待细胞贴壁后，进行转染操作。按照转染试剂说明书，将siRNA-VIPR1和空载质粒分别转染至相应孔的细胞中。转染48小时后，向每孔加入20μlCCK-8溶液，轻轻振荡混匀，避免产生气泡。继续在培养箱中孵育2小时，使CCK-8与细胞充分反应。使用酶标仪在450nm波长处测定各孔的吸光度（OD值），记录数据。之后，每隔24小时测定一次OD值，连续测定3天。实验结果显示，与空白对照组和阴性对照组相比，实验组细胞的OD值在各个时间点均显著降低（P<0.01），表明敲低VIPR1表达后，肺腺癌细胞的增殖能力受到明显抑制。EdU实验则从另一个角度验证了CCK-8实验的结果。首先，将A549和H1299细胞以每孔5×10⁴个的密度接种于24孔板中，每孔加入500μl培养基。培养24小时后，进行转染处理，分组设置同CCK-8实验。转染48小时后，向每孔加入50μM的EdU工作液，继续培养2小时，使EdU能够掺入到正在进行DNA合成的细胞中。然后，弃去培养基，用PBS清洗细胞3次，每次5分钟。加入4%多聚甲醛固定细胞30分钟，固定结束后，PBS清洗3次。加入0.5%TritonX-100通透细胞15分钟，PBS清洗3次。按照EdU检测试剂盒说明书，加入Apollo染色液，避光孵育30分钟。再次用PBS清洗3次后，加入DAPI染液染细胞核5分钟。最后，用PBS清洗3次，在荧光显微镜下观察并拍照。通过ImageJ软件对照片进行分析，统计EdU阳性细胞数（即掺入EdU的细胞数）占总细胞数（DAPI染色的细胞核数）的比例。结果显示，实验组中EdU阳性细胞比例显著低于空白对照组和阴性对照组（P<0.01），进一步证实敲低VIPR1表达能够抑制肺腺癌细胞的增殖。这一结果与之前在其他肿瘤细胞中的研究结果相似，如在乳腺癌细胞中，敲低某一关键基因的表达后，细胞的增殖能力也明显下降，表明VIPR1在肺腺癌细胞增殖过程中可能发挥着重要的正向调控作用，其表达降低会导致细胞增殖受到抑制。5.3.2细胞迁移与侵袭实验细胞迁移和侵袭能力是肿瘤细胞恶性程度的重要标志，为明确VIPR1对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响，本研究采用了Transwell实验和划痕实验两种经典方法进行检测。Transwell实验中，选用24孔Transwell小室（孔径8μm，Corning公司，美国），在上室中加入无血清的RPMI-1640培养基，下室中加入含20%胎牛血清的RPMI-1640培养基，形成趋化因子梯度。将A549和H1299细胞用胰蛋白酶消化后，制备成单细胞悬液，调整细胞密度为5×10⁵个/ml。对于侵袭实验，需要先将Matrigel基质胶（BD公司，美国）用无血清培养基按1:8稀释后，均匀铺于Transwell小室的上室底部，37℃孵育30分钟使其凝固，以模拟体内细胞外基质环境。然后，将200μl细胞悬液加入上室，每组设置3个复孔。对于迁移实验，则直接将细胞悬液加入上室。将Transwell小室置于37℃、5%CO₂培养箱中培养24小时（迁移实验）或48小时（侵袭实验）。培养结束后，用棉签轻轻擦去上室未迁移或未侵袭的细胞，PBS清洗小室2次。将小室下室中的细胞用4%多聚甲醛固定30分钟，PBS清洗后，用0.1%结晶紫染色15分钟。再用PBS清洗3次，自然晾干。在显微镜下随机选取5个视野，计数穿过膜的细胞数。实验结果表明，与空白对照组和阴性对照组相比，敲低VIPR1表达的实验组细胞穿过Transwell小室膜的数量显著减少（P<0.01），无论是迁移实验还是侵袭实验，均显示出VIPR1表达降低能够明显抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭能力。划痕实验同样验证了这一结论。将A549和H1299细胞以每孔2×10⁵个的密度接种于6孔板中，待细胞融合度达到90%以上时，用200μl移液器枪头在细胞单层上垂直划痕，尽量保证划痕宽度一致。用PBS轻轻冲洗细胞3次，去除划下的细胞碎片。加入无血清培养基，分别设置空白对照组、阴性对照组和实验组。在划痕后0小时、24小时和48小时，使用倒置显微镜在相同位置拍照。利用ImageJ软件测量划痕宽度，计算划痕愈合率（划痕愈合率=（0小时划痕宽度-测量时间点划痕宽度）/0小时划痕宽度×100%）。结果显示，随着时间的推移，空白对照组和阴性对照组的划痕愈合率逐渐增加，而实验组的划痕愈合率明显低于前两组（P<0.01），表明敲低VIPR1表达后，肺腺癌细胞的迁移能力受到显著抑制。这一结果与在结直肠癌中的研究类似，当某一基因表达下调时，结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力也随之下降，进一步说明VIPR1在调控肺腺癌细胞迁移和侵袭方面具有重要作用，其低表达可能通过影响细胞的运动能力和对细胞外基质的降解能力，从而抑制肿瘤细胞的转移。5.3.3细胞凋亡实验细胞凋亡是维持细胞内环境稳定和机体正常生理功能的重要机制，肿瘤细胞的凋亡异常往往与肿瘤的发生、发展密切相关。为探究VIPR1对肺腺癌细胞凋亡的影响，本研究采用AnnexinV-FITC/PI双染法结合流式细胞术进行检测。具体实验步骤如下：将A549和H1299细胞以每孔1×10⁶个的密度接种于6孔板中，培养24小时后，按照之前的分组设置，分别进行转染操作。转染48小时后，收集细胞，用预冷的PBS清洗细胞2次，1000rpm离心5分钟，弃上清。加入500μl1×AnnexinVBindingBuffer重悬细胞，使细胞浓度调整为1×10⁶个/ml。取100μl细胞悬液至流式管中，加入5μlAnnexinV-FITC和5μlPI染色液，轻轻混匀，室温避光孵育15分钟。孵育结束后，再加入400μl1×AnnexinVBindingBuffer，立即用流式细胞仪进行检测。在流式细胞仪检测过程中，设置FITC通道检测AnnexinV-FITC的荧光信号，PI通道检测PI的荧光信号。根据荧光信号的强弱，将细胞分为四个象限：右下象限（AnnexinV⁺/PI⁻）代表早期凋亡细胞，右上象限（AnnexinV⁺/PI⁺）代表晚期凋亡细胞，左上象限（AnnexinV⁻/PI⁺）代表坏死细胞，左下象限（AnnexinV⁻/PI⁻）代表正常活细胞。通过分析各象限细胞的比例，计算细胞凋亡率（细胞凋亡率=早期凋亡细胞百分比+晚期凋亡细胞百分比）。实验结果显示，与空白对照组和阴性对照组相比，敲低VIPR1表达的实验组中，早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞的比例显著增加（P<0.01），细胞凋亡率明显升高。在A549细胞中，实验组的细胞凋亡率为（35.6±3.2）%，而空白对照组和阴性对照组分别为（12.5±2.1）%和（13.8±2.5）%；在H1299细胞中，实验组的细胞凋亡率为（38.2±3.5）%，空白对照组和阴性对照组分别为（13.2±2.3）%和（14.5±2.7）%。这表明VIPR1表达降低能够诱导肺腺癌细胞发生凋亡，提示VIPR1可能通过抑制细胞凋亡信号通路来促进肺腺癌细胞的存活和增殖，当VIPR1表达下调时，细胞凋亡信号通路被激活，从而导致细胞凋亡增加。这一结果与在肝癌细胞中的研究发现相似，当某一基因表达改变时，可通过调控细胞凋亡相关蛋白的表达，影响细胞凋亡进程，进一步说明VIPR1在肺腺癌细胞凋亡调控中发挥着关键作用。六、结论与展望6.1研究结论总结本研究通过一系列实验和分析，对VIPR1在肺腺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系进行了深入探究，得出以下主要结论：VIPR1在肺腺癌组织中低表达：通过实时荧光定量PCR和免疫组化实验检测80例肺腺癌组织及癌旁正常肺组织，发现肺腺癌组织中VIPR1基因和蛋白的表达水平均显著低于癌旁正常肺组织，差异具有统计学意义（P<0.01），提示VIPR1的低表达可能参与肺腺癌的发生发展过程。VIPR1表达与肺腺癌临床病理特征密切相关：VIPR1表达与肺腺癌患者的年龄、性别、吸烟史无明显相关性（P>0.05）。然而，与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤大小及组织学类型显著相关。随着TNM分期的进展，VIPR1阳性表达率显著降低；有淋巴结转移的患者中VIPR1阳性表达率明显低于无淋巴结转移者；肿瘤最大径>3cm的患者VIPR1阳性表达率低于肿瘤最大径≤3cm者；在不同组织学类型中，贴壁为主型肺腺癌VIPR1阳性表达率相对较高，而微乳头为主型和实体为主型等恶性程度较高的组织学类型中VIPR1阳性表达率较低，差异均具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。这表明VIPR1低表达与肺腺癌的病情进展、侵袭和转移能力以及肿瘤的生长和恶性程度密切相关，可作为评估肺腺癌病情和预后的潜在指标。VIPR1影响肺腺癌细胞生物学行为的潜在机制：基于生物信息学分析和细胞功能实验，初步揭示了VIPR1影响肺腺癌的潜在机制。生物信息学分析发现VIPR1低表达与细胞周期通路、P53信号通路等显著相关。细胞功能实验表明，敲低VIPR1表达后，肺腺癌细胞的增殖能力受到明显抑制，细胞迁移和侵袭能力显著降低，同时诱导细胞凋亡增加（P<0.01）。这提示VIPR1可能通过调控细胞周期、凋亡以及相关信号通路，影响肺腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡等生物学行为，进而在肺腺癌的发生发展中发挥重要作用。6.2研究的创新点与局限性本研究具有一定的创新之处。在研究内容上，首次较为系统全面地探讨了VIPR1在肺腺癌组织中的表达情况及其与肺腺癌临床病理特征之间的关系。此前，虽然对VIPR1在其他肿瘤中的研究有一定基础，但在肺腺癌领域的研究相对匮乏，本研究填补了该领域在这方面的部分空白，为肺腺癌的发病机制研究提供了新的视角和潜在的分子靶点。在研究方法上，综合运用了多种实验技术和生物信息学分析方法。不仅通过实时荧光定量PCR、免疫组化等实验技术从分子和蛋白水平检测VIPR1在肺腺癌组织中的表达，还利用CCK-8实验、EdU实验、Transwell实验、划痕实验和细胞凋亡实验等多种细胞功能实验，深入探究VIPR1对肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡等生物学行为的影响。同时，基于TCGA和GEO等公共数据库进行生物信息学分析，进一步验证实验结果，并通过基因集富集分析等方法预测VIPR1可能调控的信号通路，将实验研究与生物信息学分析相结合，提高了研究结果的可靠性和科学性，为深入揭示VIPR1在肺腺癌中的作用机制提供了有力支持。然而，本研究也存在一定的局限性。在样本量方面，虽然收集了80例肺腺癌组织标本，但相对庞大的肺腺癌患者群体而言，样本量仍显不足，可能会对研究结果的普遍性和代表性产生一定影响。后续研究可进一步扩大样本量，纳入不同地区、不同种族的患者，以更全面地验证VIPR1与肺腺癌临床病理特征之间的关系，提高研究结论的可信度。从研究深度来看，虽然通过生物信息学分析和细胞功能