2026年三维设计一轮高中总复习生物教师用-第54讲　微生物的培养技术及应用

第54讲微生物的培养技术及应用课程标准1.阐明在发酵工程中防止杂菌污染是获得纯净的微生物培养物的前提。2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。5.概述稀释涂布平板法和显微镜直接计数法是测定微生物数量的常用方法。考点一微生物的基本培养技术1.培养基的配制（1）培养基的概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。（2）种类及用途（3）营养组成①一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。②需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。微生物对培养基的需求乳酸菌添加维生素霉菌将培养基调至酸性细菌将培养基调至中性或弱碱性厌氧微生物提供无氧的条件提醒①牛肉膏、蛋白胨提供的主要营养物质有氮源、碳源、维生素等，牛肉膏还可以提供磷酸盐。②可通过培养基中碳源、氮源类型判断培养对象类型。如培养基中无有机碳源，则培养物为自养生物；若培养基中无有机氮源，则培养物一般为固氮微生物。2.无菌技术（1）目的：获得纯净的微生物培养物。（2）关键：防止杂菌污染。（3）常用方法【教材拾遗】（选择性必修3P10相关信息）生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中部分微生物的方法。3.微生物的纯培养（1）概念辨析（2）酵母菌的纯培养操作步骤提醒①平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。②倒平板整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。（3）平板划线法操作步骤提醒培养基中微生物数量过多或成片可能的原因①菌液浓度过高。②培养过程中被杂菌污染。③利用接种环划线时，每次划线前未灼烧接种环灭菌。1.（选择性必修3P9正文）微生物在琼脂固体培养基表面或内部生长，可以形成肉眼可见的菌落。（√）2.（选择性必修3P10正文）在培养霉菌时，一般需要将培养基调至中性或弱碱性。（×）3.（选择性必修3P10正文）为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。（×）提示：接种环灼烧灭菌后，应冷却后再挑取菌落，以免高温杀死菌种。4.（选择性必修3P10正文）对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和灭菌。（×）提示：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。5.（选择性必修3P12～13探究·实践）倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。（×）提示：倒平板时，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将锥形瓶中的培养基（10～20mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖，不能完全打开皿盖。6.（选择性必修3P12～13探究·实践）培养酵母菌时，可将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入适宜温度的恒温培养箱中培养24～48h。（√）1.（2025·河北高三联考）下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是（）成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4含量10g10g2g成分伊红亚甲基蓝蒸馏水含量0.4g0.065g1000mLA.从物理性质看该培养基属于固体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C.该培养基缺少提供无机盐的物质D.该培养基调节合适的pH后就可以接种使用解析：B该培养基成分中不含琼脂，不是固体培养基，A错误；培养基成分中的K2HPO4为其提供无机盐，C错误；培养基调节合适的pH后需要灭菌后才能接种使用，D错误。2.（2025·辽宁沈阳高三期末）在做微生物实验时，为了防止杂菌污染，需要做好消毒和灭菌工作。下表中有关消毒和灭菌方法的使用，错误的是（）选项材料或器具方法A水源氯气消毒B培养皿干热灭菌C牛奶高压蒸汽灭菌D涂布器灼烧灭菌解析：C可用氯气对水源进行消毒，A正确；培养皿可在干热灭菌箱中160～170℃灭菌1～2h，B正确；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，牛奶一般用巴氏消毒法进行消毒，C错误；涂布器需采用灼烧灭菌的方法，冷却后才能进行涂布操作，D正确。3.（2025·河北邢台高三月考）如图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述错误的是（）A.对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒处理B.步骤①倒平板操作过程中，用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，防止周围环境中杂菌的污染C.步骤③应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落D.步骤③划线结束后在培养皿皿盖上做好标注，培养皿需要倒置培养解析：D步骤①倒平板操作过程中，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止周围环境中杂菌的污染，B正确；步骤③应多个方向划线，划三至五条平行线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；步骤③划线结束后应在皿底上做好标注，D错误。题后归纳平板划线操作的注意事项（1）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。（2）第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。（3）划线时最后一次划线不要与第一次划线相连。（4）划线时力度大小要适当，避免用力过大将培养基划破。（5）操作第一步即取菌种之前以及每次划线之前都需要将接种环进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的不同：4.（2025·安徽安庆高三联考）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。下列相关叙述，错误的是（）A.玻璃和金属材质等实验器具可放入干热灭菌箱中干热灭菌B.接种环在接种前后，均需在酒精灯的火焰上进行灼烧消毒C.没有将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽将影响培养基的灭菌效果D.适量喷洒苯酚同时配合紫外线照射可提高对接种室的消毒效果解析：B在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌，一些金属材质的实验器具也可以灼烧灭菌，A正确；为了防止杂菌污染和感染操作者，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌（不是消毒），B错误；若未将高压蒸汽灭菌锅内的冷空气排尽，会因达不到规定温度而影响灭菌的效果，C正确；紫外线能破坏DNA结构，密闭空间常采用紫外线照射消毒，适量喷洒苯酚同时配合紫外线照射可提高对接种室的消毒效果，D正确。考点二微生物的选择培养和计数1.微生物的选择培养（1）选择培养基（2）稀释涂布平板法（3）培养观察待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。2.微生物的数量测定提醒①每隔一定的时间（如24h）统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目。②当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。稀释涂布平板法统计的菌落数目比活菌实际数目少。3.活动：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）实验原理（2）操作步骤（3）实验结果分析与评价1.（选择性必修3P16正文）选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。（×）2.（选择性必修3P18正文）菌液的稀释度足够高时，培养基表面会获得单菌落。（√）3.（选择性必修3P20概念检测2）稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌。（×）4.（选择性必修3P18正文）利用稀释涂布平板法统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数。（×）提示：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落，故稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。5.（选择性必修3P18相关信息）利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量。（×）提示：显微镜直接计数法不能区分细菌的死活，因此统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。6.（选择性必修3P20拓展应用2）纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈越大，说明该类纤维素分解菌分解纤维素的能力越强。（√）1.（2023·广东高考10题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（）A.a点时取样、尿素氮源培养基B.b点时取样、角蛋白氮源培养基C.b点时取样、蛋白胨氮源培养基D.c点时取样、角蛋白氮源培养基解析：D由图可知，随着堆肥时间的延长，堆肥温度先升高后保持稳定，a点时堆肥温度最低，c点时堆肥温度最高。该实验的目的是筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，应该用以角蛋白为唯一氮源的培养基进行筛选培养，且应该在高温条件下取样，即c点时取样，D符合题意。2.（2025·福建福州高三质检）某研究小组用马铃薯琼脂培养基对新酿米酒中的酵母菌进行初步分离，结果如图所示，下列叙述正确的是（）A.图a中下一次划线总是从上一次划线的首端开始B.配制马铃薯琼脂培养基时，其pH需要调节到中性C.浸泡在酒精中消毒的涂布器使用前需要在火焰上灼烧D.图a、图b的方法都可以实现对酵母菌的分离和计数解析：C图a的接种方法为平板划线法，下一次划线总是从上一次划线的末端开始，起到逐级稀释菌种的目的，A错误；配制马铃薯琼脂培养基用于培养酵母菌时，其pH需要调节到酸性，B错误；涂布器需要酒精浸泡再放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，以防止杂菌污染，C正确；图a（平板划线法）、图b（稀释涂布平板法）的方法都可以实现对酵母菌的分离，但图a平板划线法不能用于计数，D错误。题后归纳两种纯化方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法分离结果关键操作接种环在固体培养基表面连续划线①一系列的梯度稀释；②涂布平板操作接种用具接种环涂布器优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数操作复杂，需要涂布多个平板共同点都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征3.（2025·河北唐山高三一模）为了从土壤中筛选对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，研究人员利用土壤浸出液进行了如图所示操作。下列说法错误的是（）A.用稀释涂布平板法或平板划线法将土壤浸出液接种在X培养基上B.菌落①可能是硝化细菌，因不能产生淀粉酶所以无透明圈C.X培养基是含有淀粉和抗生素的固体培养基，Y培养基是不含琼脂的液体培养基D.图中降解淀粉最高效的是菌落⑤，可根据菌落特征初步判断微生物类型解析：A根据X培养基上形成的菌落分布特征可知，将含目的菌的土壤浸出液接种在X培养基上采用的是稀释涂布平板法，A错误；菌落①周围无透明圈，说明其不能降解淀粉，可能是硝化细菌，因不能产生淀粉酶所以无透明圈，B正确；实验目的是筛选对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，可知X培养基上含有淀粉和抗生素，Y培养基用于将筛选到的目的菌扩大培养，为不含琼脂的液体培养基，C正确；碘液遇淀粉会变蓝，淀粉被分解，形成透明圈，题图中菌落⑤的透明圈最大，说明菌落⑤降解淀粉的能力最强，不同菌落的特征不同，因此可根据菌落特征初步判断微生物类型，D正确。1.（2024·海南高考12题）某小组为检测1株粗糙脉孢霉突变株的氨基酸缺陷类型，在相同培养温度和时间的条件下进行实验，结果见表。下列有关叙述错误的是（）组别培养条件实验结果①基础培养基无法生长②基础培养基＋甲、乙、丙3种氨基酸正常生长③基础培养基＋甲、乙2种氨基酸无法生长④基础培养基＋甲、丙2种氨基酸正常生长⑤基础培养基＋乙、丙2种氨基酸正常生长A.组别①是②③④⑤的对照组B.培养温度和时间属于无关变量C.①②结果表明，甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸D.①～⑤结果表明，该突变株为氨基酸甲缺陷型解析：D由表可知，除了组别①之外，其他组别的基础培养基中都添加了氨基酸，因此组别①是②③④⑤的对照组，A正确；由题意表中信息可知，实验的自变量为培养条件，各组别的培养温度和时间均相同，说明培养温度和时间均属于无关变量，B正确；由①②结果可知：粗糙脉孢霉突变株在基础培养基中无法生长，但在添加了甲、乙、丙3种氨基酸的基础培养基中能正常生长，这表明甲、乙、丙3种氨基酸中有该突变株正常生长所必需的氨基酸，C正确；与组别①相比，在基础培养基中，若添加的氨基酸中含有丙种氨基酸，则粗糙脉孢霉突变株都能正常生长，但在只添加甲、乙2种氨基酸的基础培养基中无法生长，说明该突变株为氨基酸丙缺陷型，D错误。2.（2024·黑吉辽高考19题改编）某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病，其筛选流程及抗性检测如图。下列操作错误的是（）A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉种植园内，从未感染植株上采集样品B.将采集的样品充分消毒后，用蒸馏水冲洗，收集冲洗液进行无菌检测C.将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离得到内生菌的单菌落D.判断内生菌的抗性效果需比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小解析：B根据题干信息“某些香蕉植株组织中存在的内生菌可防治香蕉枯萎病”可知，若要筛选出该内生菌，应该从未感染香蕉枯萎病的植株上采样，A正确。要筛选内生菌，同时防止样品表面杂菌对实验结果的影响，需要对样品进行消毒，用无菌水冲洗样品表面，收集冲洗液，对冲洗液进行无菌检测，B错误。稀释涂布平板法可用于分离微生物，将无菌检测合格的样品研磨，经稀释涂布平板法分离能获得内生菌的单菌落，C正确。要想判断内生菌对病原菌的抗性效果，需要比较有无接种内生菌的平板上的病原菌菌斑大小，D正确。3.（2024·湖南高考6题）微生物平板划线和培养的具体操作如图所示，下列操作正确的是（）A.①②⑤⑥ B.③④⑥⑦C.①②⑦⑧ D.①③④⑤解析：D由图可知，②中拔出棉塞后应握住棉塞上部；⑥中划线时不能将培养皿的皿盖完全拿开，应只打开一条缝隙；⑦中划线时第5次的划线不能与第1次的划线相连；⑧中平板应倒置培养。①③④⑤正确，故选D。4.（2023·山东高考15题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（）A.不含氮源的平板不能用于微生物培养B.平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒C.接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃D.利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物解析：D不含氮源的平板可用于固氮菌的培养，A错误；平板涂布时涂布器使用前必须浸在酒精中，然后在火焰上灼烧灭菌，这种操作属于灭菌，不属于消毒，B错误；使用后的培养基即使未长出菌落也要在丢弃前进行灭菌处理，不能直接丢弃，以免污染环境，C错误；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素为唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素获得氮源而进行生长繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而无法生长，因此以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物，D正确。溯源教材（1）培养基的配方不同，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。（见选择性必修3P10正文）（2）将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。（见选择性必修3P17图1－7）（3）使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。（见选择性必修3P13正文）（4）只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。（见选择性必修3P18探究·实践）5.（2023·辽宁高考9题）细菌气溶胶是由悬浮于大气或附着于颗粒物表面的细菌形成的。利用空气微生物采样器对某市人员密集型公共场所采样并检测细菌气溶胶的浓度（菌落数/m3）。下列叙述错误的是（）A.采样前需对空气微生物采样器进行无菌处理B.细菌气溶胶样品恒温培养时需将平板倒置C.同一稀释度下至少对3个平板计数并取平均值D.稀释涂布平板法检测的细菌气溶胶浓度比实际值高解析：D为防止杂菌感染，接种前需要对培养基、培养皿、微生物采样器进行灭菌处理，对实验操作者的双手进行消毒处理，A正确；纯化培养时，为防止污染培养基和水分蒸发，培养皿应倒置放在恒温培养箱内培养，B正确；微生物计数时在同一稀释度下，应至少需要对3个菌落数目在30～300的平板进行计数，以确保实验的准确性，C正确；使用稀释涂布平板法对微生物计数，数值往往偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，在平板上只能观察到一个菌落，D错误。6.（2024·全国甲卷37题，节选）合理使用消毒液有助于减少传染病的传播。某同学比较了3款消毒液A、B、C杀灭细菌的效果，结果如图所示。回答下列问题。（1）该同学采用显微镜直接计数法和菌落计数法分别测定同一样品的细菌数量，发现测得的细菌数量前者大于后者，其原因是用菌落计数法计数时，只有活菌被统计，且两个或多个细胞可能连在一起形成一个菌落；用显微镜直接计数法计数时，不能区分死菌和活菌，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和。（2）该同学从100mL细菌原液中取1mL加入无菌水中得到10mL稀释菌液，再从稀释菌液中取200μL涂布平板，菌落计数的结果为100，据此推算细菌原液中细菌浓度为5×103个/mL。（3）菌落计数过程中，涂布器应先在酒精灯上灼烧，冷却后再涂布。灼烧的目的是灭菌，以防止杂菌污染，冷却的目的是避免杀死菌种。（4）据图可知杀菌效果最好的消毒液是A，判断依据是活细菌减少量最大且减少得最快（答出2点即可）。解析：（1）用菌落计数法计数时，当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故活菌统计值比实际值小；用显微镜直接计数法计数时，不能区分死菌和活菌，故测定的细菌数量往往大于实际的活菌数，因此使用显微镜直接计数法计数的结果比菌落计数法计数的结果大。（2）100个菌落代表100个活菌，其来自200μL（0.2mL）稀释液，推出1mL稀释液中大约有500个活菌，稀释液由细菌原液稀释10倍获得，进而推出细菌原液中细菌浓度为5×103个/mL。（3）将涂布器放在火焰上灼烧的目的是灭菌，以防止杂菌污染；涂布器冷却后再进行涂布的目的是避免高温杀死菌种。（4）由曲线图可以直接看出，用消毒液A处理后活细菌减少量最大且活细菌减少得最快，说明消毒液A杀菌效果最好。（1）从试管取菌种前，先在火焰旁拔棉塞，再将试管口迅速通过火焰以灭菌。（2024·江苏高考）（√）（2）血细胞计数板既可用于酵母菌的数量测定，也可用于细菌的数量测定。（2023·江苏高考）（×）提示：血细胞计数板不适用于微小的细菌计数。（3）某同学欲分离产脲酶菌，可在选择培养基中添加尿素作为唯一氮源。（2022·江苏高考）（√）（4）为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。（2022·湖北高考）（×）提示：高温变性的蛋白质仍可作为微生物的氮源，可以用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌。（5）稀释涂布平板法既可分离菌株，又可用于计数。（2024·贵州高考）（√）一、选择题1.（2025·重庆联考）防止杂菌污染，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。下列叙述错误的是（）A.实验室里可用紫外线或化学药物对物体表面或空气进行消毒B.实验室里不可吃东西，离开时一定要洗手以防被微生物感染C.接种环、接种针等用具应在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌D.使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境解析：C接种环、接种针等用具应在酒精灯火焰的外焰部位灼烧灭菌，C错误。2.（2025·福建南平高三联考）下列关于微生物纯培养的叙述，错误的是（）A.倒平板操作应等培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近进行B.微生物的纯培养包括配制培养基、灭菌、接种、分离和培养等步骤C.用平板划线法和稀释涂布平板法都能在固体培养基上得到单菌落D.涂布平板时应先将培养皿盖置于实验操作台上解析：D平板划线法通过连续划线操作可得到单菌落，稀释涂布平板法在稀释倍数足够高的情况下，可通过将稀释液涂布在培养基上获得单菌落，即平板划线法和稀释涂布平板法都能在固体培养基上得到单菌落，C正确；涂布平板时不能完全打开培养皿，将皿盖置于实验操作台上，应在火焰附近将培养皿打开一条缝隙，D错误。3.（2025·福建宁德五校联合检测）为加速我国北方冬春季秸秆原位还田的腐化过程，研究人员以冻牛粪为材料筛选出耐低温（10℃）的纤维素降解菌。下列相关叙述正确的是（）A.选用冻牛粪为材料与其富含纤维素及含耐低温微生物有关B.初筛菌种前，要利用固体培养基在37℃条件下扩大培养目标菌种C.用于筛选的培养基是加入刚果红染料的牛肉膏蛋白胨培养基D.应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化解析：A冻牛粪中富含纤维素，有很多微生物，冻牛粪因温度低，其内的微生物是耐低温微生物，故选用冻牛粪为材料筛选耐低温的纤维素降解菌，A正确；初筛菌种前，要利用液体培养基在37℃条件下扩大培养目标菌种，B错误；用于筛选的培养基是以纤维素为唯一碳源的固体培养基，加入的刚果红染料起鉴别作用，C错误；由于刚果红染料与纤维素形成红色复合物，因此会出现以纤维素降解菌为中心的透明圈，菌落直径与周围透明圈直径比值越小，菌株分解纤维素的能力越强，故应选择菌落直径与周围透明圈直径比值小的菌落进行纯化，D错误。4.（2025·山东淄博模拟）从土壤中分离某种微生物的培养基配方如图，该培养基中，果胶被刚果红染成红色。将土壤稀释液接种在该培养基上，培养一段时间后，平板上出现多个周围有透明圈的菌落。下列分析错误的是（）A.该培养基可用于分离产果胶酶的微生物B.培养基配方中的X应为琼脂C.KH2PO4和Na2HPO4能维持培养基的pHD.周围出现透明圈的菌落全部为同一种微生物的克隆解析：D该培养基的唯一碳源为果胶，能够生长的细菌是能分解果胶的细菌，因此该培养基可用于分离产果胶酶的微生物，A正确；该平板培养基为固体培养基，琼脂为凝固剂，因此培养基配方中的X应为琼脂，B正确；KH2PO4、Na2HPO4在提供无机盐的同时还能维持培养基pH稳定，C正确；能产生果胶酶的微生物不止一种，通常情况下，用此培养基筛选出来的微生物种类不一定相同，D错误。5.（2025·山东济宁模拟）耐高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。嗜热菌可以在高温环境中生存，其产生的淀粉酶最适温度较高。筛选能产生耐高温淀粉酶的嗜热菌过程如图1所示，其中Ⅰ号培养基用碘液处理的结果如图2所示。下列叙述正确的是（）A.图2中周围不显蓝色的菌落含有所需菌种B.倒平板后对培养皿进行高压蒸汽灭菌C.淀粉是图2所示固体培养基的唯一碳源D.甲、乙试管中均为选择培养基解析：A淀粉与碘液反应呈现蓝色，能分解淀粉的嗜热菌在培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，故周围不显蓝色的菌落含有所需菌种，A正确；倒平板时培养皿和培养基都已灭菌处理，因此倒平板后不需要对培养皿再进行高压蒸汽灭菌，B错误；据题图2可知，培养基上出现周围显蓝色的菌落和周围不显蓝色的菌落，因此淀粉可能不是题图2所示固体培养基的唯一碳源，C错误；题图1中①过程是梯度稀释，②过程是接种，因此甲、乙试管主要是对嗜热菌样品进行稀释，不具备选择作用，不属于选择培养基，D错误。6.（2025·广东湛江模拟）自生固氮菌是土壤中能独立进行固氮的细菌。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图所示。已知步骤④获得的3个平板的菌落数分别为90、95、100，对照组平板为0。下列相关叙述正确的是（）A.步骤②振荡20min的目的是扩大菌种数量，属于选择培养B.步骤④使用接种环划线接种，使用前需要灼烧灭菌C.1g土壤中平均自生固氮菌数约为9.5×106个D.所用培养基应加入碳源、氮源、无机盐、水和琼脂解析：C步骤②需充分振荡的主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，A错误；由题图观察可知，步骤④平板中的菌落分布均匀，故步骤④所用的接种工具是涂布器，接种方法是稀释涂布平板法，B错误；1g土壤中平均自生固氮菌数约为（90＋95＋100）/3÷0.1×104＝9.5×106（个），C正确；本实验需要分离的自生固氮菌可以利用空气中的氮气作为氮源，故所用培养基中不能加入氮源，D错误。7.（2025·江苏南京、盐城模拟）为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度，某研究小组进行了相关药敏实验，图1为部分实验器材。将含有相同浓度的抗生素Ⅰ～Ⅳ四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的平板上，实验结果如图2。下列相关叙述正确的是（）A.为获得长满测试菌的平板，需要使用图1中器材①②③B.图2中Ⅱ形成的抑菌圈较小，可能是病原微生物对药物较敏感C.图2抑菌圈中的菌落可能是在抗生素Ⅳ作用下产生了突变株D.不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果解析：D为获得长满测试菌的琼脂平板，需要采用稀释涂布平板法，该方法需要使用图1中①酒精灯（操作需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯对涂布器进行灼烧灭菌）、③培养基和④涂布器，②为接种环（接种工具），是平板划线法接种时需要使用的接种工具，用平板划线法不能获得长满测试菌的平板，A错误；图2中Ⅱ处透明圈最小，说明此处微生物对该药物敏感度最低，B错误；突变株的出现不是在抗生素的作用下产生的，抗生素只能起选择作用，C错误。8.（2025·山东日照模拟）三糖铁培养基（TSI）含有牛肉膏、蛋白胨、糖类（乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10∶10∶1）、酚红（在酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色）等成分。TSI琼脂试验法通过观察肠杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸（少量的酸能被空气缓慢氧化）量的多少来鉴别其种类。操作过程是：用接种针挑取待测菌落后，刺入斜面TSI内，后缓慢抽出接种针，在斜面上进行“之”字划线。下列分析错误的是（）A.牛肉膏可为细菌提供氮源和维生素等B.穿刺和划线的过程需严格控制杂菌污染C.若培养基中底层与斜面均呈黄色，推测细菌只能分解乳糖D.若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖解析：C牛肉膏可为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素等，A正确；本实验通过TSI琼脂试验法，观察肠杆菌科细菌对三种糖的分解产生酸（少量的酸能被空气缓慢氧化）量的多少来鉴别其种类，故穿刺和划线的过程需严格控制杂菌污染，B正确；由于酚红在酸性条件下呈黄色、碱性条件下呈红色，若培养基的中底层与斜面均呈黄色，说明细菌产酸的量多，推测细菌也可能分解乳糖、蔗糖和葡萄糖，或分解含量较多的乳糖和蔗糖（或其中之一），C错误；若细菌只分解葡萄糖而不分解乳糖和蔗糖，因培养基中葡萄糖的含量较少，其产酸的量也较少，斜面上所生成的少量酸被空气缓慢氧化，使斜面由黄色变成红色；底层由于处于缺氧状态，细菌分解葡萄糖所产生的酸一时不能被空气氧化而仍保持黄色。故若底层呈黄色、斜面先呈黄色后变红，推测细菌可能只分解葡萄糖，D正确。二、非选择题9.（2025·江苏镇江联考）我国卫生部门规定饮用水标准是1mL自来水中细菌总数不超过100个（37