生物医药mRNA工艺员考试试卷与答案

生物医药mRNA工艺员考试试卷与答案一、单项选择题（每题2分，共20分）1.mRNA合成中常用的酶是（）A.淀粉酶B.逆转录酶C.RNA聚合酶D.蛋白酶2.以下哪种核苷酸是mRNA的组成成分（）A.dATPB.UTPC.dGTPD.CTP3.mRNA纯化常用的方法是（）A.萃取法B.离子交换色谱C.沉淀法D.重结晶4.体外转录体系中不需要的成分是（）A.模板DNAB.引物C.NTPD.缓冲液5.mRNA稳定性与哪种结构有关（）A.5’帽结构B.内含子C.外显子D.终止密码子6.合成mRNA的原料是（）A.氨基酸B.核糖核苷酸C.脱氧核糖核苷酸D.脂肪酸7.以下能提高mRNA翻译效率的是（）A.增加3’polyA尾长度B.减少5’帽结构C.改变密码子偏好性D.增加内含子数量8.mRNA工艺中，防止核酸酶污染的关键是（）A.高温灭菌B.使用无核酸酶的试剂C.通风良好D.戴手套9.转录起始位点由（）决定A.启动子B.增强子C.终止子D.沉默子10.用于储存mRNA的最佳温度是（）A.4℃B.-20℃C.-80℃D.室温二、多项选择题（每题2分，共20分）1.mRNA工艺中可能用到的仪器有（）A.移液器B.离心机C.PCR仪D.色谱仪2.影响mRNA转录效率的因素有（）A.模板浓度B.酶活性C.反应温度D.缓冲液成分3.以下属于mRNA修饰的有（）A.5’加帽B.3’加尾C.甲基化D.磷酸化4.提高mRNA质量的措施包括（）A.优化转录条件B.严格纯化步骤C.防止核酸酶降解D.选用优质原料5.mRNA的应用领域有（）A.疫苗研发B.基因治疗C.药物筛选D.细胞重编程6.体外转录模板DNA的要求有（）A.纯度高B.完整性好C.无核酸酶污染D.特定的序列7.核酸酶污染可能来自（）A.实验人员B.实验器材C.试剂D.空气8.mRNA工艺中的质量控制指标包括（）A.浓度B.纯度C.完整性D.活性9.常用的mRNA纯化介质有（）A.硅胶柱B.离子交换树脂C.亲和介质D.凝胶过滤介质10.优化mRNA工艺的方法有（）A.实验设计B.参考文献C.经验积累D.设备更新三、判断题（每题2分，共20分）1.mRNA只有在细胞内才能合成。（）2.5’帽结构对mRNA稳定性没有影响。（）3.核酸酶只会降解DNA，不会影响mRNA。（）4.提高转录温度一定能提高mRNA产量。（）5.所有mRNA都需要进行3’加尾修饰。（）6.合成mRNA时，原料浓度越高越好。（）7.纯化后的mRNA可以长期在室温保存。（）8.不同的mRNA应用场景对其质量要求相同。（）9.实验中使用的耗材不需要进行核酸酶处理。（）10.优化mRNA工艺可以提高其表达效率。（）四、简答题（每题5分，共20分）1.简述mRNA体外转录的基本步骤。答：首先准备模板DNA，确保其纯度和完整性。将模板DNA与RNA聚合酶、NTP、缓冲液等混合于适宜的反应体系中，在合适温度（如37℃）下进行转录反应，合成mRNA链。反应结束后，可采用合适方法对合成的mRNA进行纯化，去除杂质。2.说明mRNA5’帽结构和3’polyA尾的作用。答：5’帽结构能保护mRNA免受核酸酶降解，提高mRNA稳定性，还能促进mRNA与核糖体结合，增强翻译起始效率。3’polyA尾也可增强mRNA稳定性，有助于mRNA从细胞核转运到细胞质，同时在翻译过程中也发挥积极作用，利于翻译的起始和进行。3.如何防止mRNA工艺中的核酸酶污染？答：实验人员操作前需用无核酸酶的试剂洗手，戴口罩和手套。实验器材要经过严格处理，如高温灭菌、用无核酸酶的试剂清洗。使用的试剂应确保无核酸酶污染，最好选用无核酸酶的专用产品。实验环境保持清洁，减少空气流动带来的污染。4.简述mRNA纯度检测的常用方法。答：常用紫外分光光度法，通过检测260nm和280nm波长处的吸光度，A260/A280比值在1.8-2.0左右表示纯度较好，还可检测A260/A230比值评估盐等小分子杂质污染情况。另外，也可用琼脂糖凝胶电泳，观察mRNA条带是否单一、有无拖尾等判断纯度。五、讨论题（每题5分，共20分）1.讨论mRNA工艺在疫苗研发中的优势与挑战。答：优势在于能快速响应疫情，可灵活设计序列针对不同病原体；安全性好，不整合入宿主基因组。挑战包括稳定性差，易被核酸酶降解；生产工艺复杂，纯化难度大；大规模生产的成本较高，质量控制标准严格，临床应用的长期安全性仍需深入研究。2.如何进一步优化mRNA工艺以提高其在基因治疗中的效果？答：从原料方面，选用高纯度、活性好的试剂。优化转录条件，精确调控温度、时间等参数提高产量和质量。改进纯化工艺，去除杂质和异构体。在修饰环节，合理选择修饰方式增强稳定性和表达效率。建立更严格质量控制体系，确保产品均一性和活性，满足基因治疗需求。3.谈谈mRNA工艺中质量控制的重要性及关键环节。答：质量控制很重要，关系到mRNA的活性、稳定性及安全性，影响其应用效果。关键环节包括原料质量把控，确保模板DNA、NTP等纯度和活性；转录过程严格监控温度、酶活性等参数；纯化环节保证去除杂质且不损失mRNA活性；成品检测，准确测定浓度、纯度、完整性和活性，只有各环节严格质量控制，才能得到优质产品。4.结合实际，讨论mRNA工艺员在工作中应具备的技能和素质。答：技能上要熟练掌握各种仪器操作，如移液器、离心机等使用。精通体外转录、纯化等实验流程。具备数据分析能力，处理实验结果。素质方面要有严谨的科学态度，严格遵守操作规程。有创新精神，不断优化工艺。有责任心，保证实验准确性和产品质量。具备团队协作能力，与不同部门人员有效沟通合作。答案一、单项选择题1.C2.B3.B4