病原微生物核酸检测试题（附答案）

病原微生物核酸检测试题（附答案）一、单选题（每题2分，共60分）1.以下哪种方法不属于病原微生物核酸检测的常规方法？（）A.聚合酶链反应（PCR）B.酶联免疫吸附测定（ELISA）C.核酸杂交技术D.基因测序技术答案：B解析：ELISA是用于检测抗原或抗体的免疫学方法，并非核酸检测方法，而A、C、D选项均为常见的病原微生物核酸检测方法。2.进行PCR反应时，不需要的成分是（）A.模板DNAB.dNTPC.引物D.抗体答案：D解析：PCR反应需要模板DNA作为扩增的起始物质，dNTP是合成新DNA链的原料，引物用于引导DNA聚合酶结合到模板上开始扩增，而抗体与PCR反应无关。3.实时荧光定量PCR技术中，荧光信号产生的原理是（）A.荧光染料与双链DNA结合发出荧光B.荧光抗体与抗原结合发出荧光C.荧光素酶催化底物发光D.荧光标记的引物与模板结合发光答案：A解析：实时荧光定量PCR中常用的荧光染料（如SYBRGreen）能与双链DNA结合，结合后发出荧光，随着PCR扩增双链DNA增多，荧光信号增强。B选项是免疫学检测原理；C选项与实时荧光定量PCR原理不同；D选项荧光标记引物结合模板不是主要的荧光信号产生方式。4.核酸提取过程中，使用氯仿的主要作用是（）A.裂解细胞B.沉淀核酸C.去除蛋白质D.溶解核酸答案：C解析：氯仿能使蛋白质变性并将其从核酸溶液中分离出来，起到去除蛋白质的作用。裂解细胞一般用裂解液；沉淀核酸常用异丙醇或乙醇；核酸可溶解于适当的缓冲液中。5.以下哪种病毒的核酸类型为RNA？（）A.乙肝病毒B.疱疹病毒C.流感病毒D.人乳头瘤病毒（HPV）答案：C解析：流感病毒是RNA病毒，其遗传物质为RNA。乙肝病毒、疱疹病毒、HPV均为DNA病毒。6.在核酸检测中，内参基因的作用是（）A.增加检测的灵敏度B.监控核酸提取和扩增过程的有效性C.区分不同的病原微生物D.提高检测的特异性答案：B解析：内参基因是样本中恒定表达的基因，通过检测内参基因可以判断核酸提取是否成功以及扩增过程是否正常，从而监控整个检测流程的有效性。它并不能直接增加检测灵敏度、区分不同病原微生物或提高检测特异性。7.逆转录PCR（RT-PCR）主要用于检测（）A.DNA病毒B.RNA病毒C.细菌D.真菌答案：B解析：RT-PCR是先将RNA逆转录为cDNA，再进行PCR扩增，主要用于检测RNA病毒，因为RNA病毒的遗传物质是RNA。DNA病毒、细菌、真菌的检测一般可直接用普通PCR针对其DNA进行检测。8.以下关于核酸探针的描述，错误的是（）A.可以是DNA片段B.可以是RNA片段C.必须带有放射性标记D.能与互补核酸序列特异性结合答案：C解析：核酸探针可以是DNA片段或RNA片段，能与互补核酸序列特异性结合。探针的标记方式有多种，除了放射性标记外，还可以用荧光标记、酶标记等，并非必须带有放射性标记。9.基因测序技术中，桑格测序法的基本原理是（）A.基于DNA合成过程中加入双脱氧核苷酸终止链的延伸B.基于DNA分子在电场中的迁移速度不同C.基于DNA与蛋白质的相互作用D.基于核酸杂交技术答案：A解析：桑格测序法是在DNA合成过程中加入双脱氧核苷酸（ddNTP），当ddNTP掺入到正在合成的DNA链中时，由于其3'端没有羟基，不能继续进行链的延伸，从而终止DNA合成，通过电泳分析不同长度的DNA片段来确定碱基序列。B选项是电泳分离DNA的原理；C选项与桑格测序法原理无关；D选项核酸杂交技术与桑格测序法原理不同。10.进行核酸检测时，样本采集的部位对于检测结果至关重要。对于呼吸道病毒检测，常用的样本采集部位是（）A.血液B.粪便C.咽拭子或鼻拭子D.尿液答案：C解析：呼吸道病毒主要存在于呼吸道黏膜表面，咽拭子或鼻拭子可以采集到呼吸道的分泌物，是检测呼吸道病毒常用的样本采集部位。血液一般用于检测全身性感染或病毒血症时的病毒；粪便主要用于检测肠道病毒；尿液一般较少用于呼吸道病毒检测。11.在核酸扩增反应中，变性温度一般设置为（）A.50-60℃B.72℃C.94-98℃D.37℃答案：C解析：变性是指将双链DNA解链为单链的过程，需要较高的温度，一般在94-98℃，使氢键断裂。50-60℃一般是退火温度；72℃是延伸温度；37℃是很多生物反应的适宜温度，但不是核酸扩增变性的温度。12.核酸检测实验室的生物安全防护级别应根据（）来确定。A.检测人员的经验B.检测样本的数量C.检测的病原微生物的危害程度D.实验室的面积大小答案：C解析：生物安全防护级别是根据所检测的病原微生物的危害程度来确定的，危害程度越高，所需的生物安全防护级别也越高。检测人员经验、样本数量和实验室面积大小与生物安全防护级别确定无关。13.以下哪种物质可以抑制核酸酶的活性？（）A.乙二胺四乙酸（EDTA）B.氯化钠C.乙醇D.氢氧化钠答案：A解析：EDTA可以与金属离子结合，而核酸酶的活性需要金属离子参与，所以EDTA能抑制核酸酶的活性。氯化钠是常见的盐类，一般不用于抑制核酸酶；乙醇常用于沉淀核酸；氢氧化钠是强碱，主要用于调节pH或裂解细胞等，不能抑制核酸酶活性。14.多重PCR是指在一个反应体系中同时扩增（）A.多个不同的基因片段B.同一个基因的不同区域C.多个相同的基因片段D.基因的全长序列答案：A解析：多重PCR是在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增多个不同的基因片段，可用于同时检测多种病原微生物或一个病原微生物的多个基因。15.核酸检测结果的阳性判断值通常是根据（）来确定的。A.检测方法的灵敏度B.检测方法的特异性C.对照样本的检测结果D.临床症状答案：C解析：阳性判断值通常是根据对照样本（包括阳性对照和阴性对照）的检测结果来确定的，通过与对照样本的比较来判断检测样本是否为阳性。检测方法的灵敏度和特异性是衡量检测方法性能的指标；临床症状可辅助判断，但不是确定阳性判断值的依据。16.下列关于核酸保存的说法，正确的是（）A.核酸可以长期保存在常温下B.核酸保存时应避免反复冻融C.核酸保存液中不需要添加防腐剂D.核酸保存的温度越高越好答案：B解析：核酸在常温下不稳定，容易被核酸酶降解，应保存在低温环境。反复冻融会使核酸断裂，所以应避免反复冻融。核酸保存液中通常需要添加防腐剂来防止微生物污染；核酸保存温度一般较低，如-20℃或-80℃，而不是越高越好。17.在核酸杂交技术中，为了提高杂交的特异性，可采取的措施是（）A.提高杂交温度B.降低杂交温度C.增加探针浓度D.增加杂交时间答案：A解析：提高杂交温度可以使不完全互补的核酸链解链，只有完全互补的核酸链才能稳定杂交，从而提高杂交的特异性。降低杂交温度会使一些不完全互补的核酸链也能杂交，降低特异性；增加探针浓度和杂交时间主要影响杂交的效率，而不是特异性。18.以下哪种细菌检测通常不采用核酸检测方法？（）A.结核分枝杆菌B.淋病奈瑟菌C.金黄色葡萄球菌D.破伤风梭菌答案：D解析：结核分枝杆菌、淋病奈瑟菌、金黄色葡萄球菌的核酸检测在临床诊断中较为常用，可快速准确地检测病原菌。破伤风梭菌主要通过临床症状和厌氧培养等方法进行诊断，核酸检测不是其常规检测方法。19.实时荧光定量PCR中，Ct值与样本中核酸起始浓度的关系是（）A.Ct值越大，起始浓度越高B.Ct值越大，起始浓度越低C.Ct值与起始浓度无关D.起始浓度仅影响Ct值的稳定性答案：B解析：Ct值是指荧光信号达到设定阈值时所经历的循环数。样本中核酸起始浓度越高，在PCR扩增过程中达到阈值所需的循环数越少，即Ct值越小；反之，起始浓度越低，Ct值越大。20.核酸提取过程中，离心的目的不包括（）A.分离细胞碎片B.沉淀核酸C.去除杂质D.裂解细胞答案：D解析：离心可以通过不同物质的密度差异将细胞碎片、杂质等分离出来，也可使核酸沉淀下来。而裂解细胞一般是通过加入裂解液等化学方法，不是离心的目的。21.基因芯片技术检测病原微生物的原理是（）A.基于核酸杂交B.基于PCR扩增C.基于免疫反应D.基于蛋白质电泳答案：A解析：基因芯片技术是将大量的核酸探针固定在芯片上，与标记的样本核酸进行杂交，通过检测杂交信号来分析样本中核酸的种类和含量，其原理基于核酸杂交。22.以下哪种病毒检测时，可能需要先进行病毒的富集培养？（）A.甲型流感病毒B.乙肝病毒C.艾滋病病毒D.巨细胞病毒（CMV）答案：D解析：巨细胞病毒在体内的含量有时较低，直接检测可能灵敏度不够，可能需要先进行病毒的富集培养，增加病毒的数量后再进行检测。甲型流感病毒、乙肝病毒、艾滋病病毒一般可直接从样本中提取核酸进行检测。23.在核酸检测质量控制中，室内质控的主要目的是（）A.评估检测方法的准确性B.评估不同实验室之间的检测差异C.保证同一实验室检测结果的稳定性和可靠性D.确定检测的参考范围答案：C解析：室内质控是在同一实验室内部进行的质量控制，主要目的是保证同一实验室检测结果的稳定性和可靠性。评估检测方法的准确性可通过方法学验证等；评估不同实验室之间的检测差异是室间质评的目的；确定检测的参考范围需要大量的正常人群样本检测。24.核酸检测样本采集后，应尽快进行检测，如果不能及时检测，样本应（）保存。A.常温B.4℃C.-20℃D.根据样本类型和检测要求选择合适的温度答案：D解析：不同类型的样本和检测要求对保存温度有不同的要求，例如一些病毒样本可能需要-80℃保存，而一些细菌样本可能在4℃短期保存即可，所以应根据具体情况选择合适的温度。25.下列关于核酸电泳的说法，错误的是（）A.常用的电泳缓冲液是Tris-硼酸-乙二胺四乙酸（TBE）B.核酸在电场中向正极移动C.电泳时间越长，核酸条带越清晰D.可以通过电泳检测核酸的大小和纯度答案：C解析：常用的核酸电泳缓冲液有TBE等。核酸带负电荷，在电场中向正极移动。电泳时间过长可能会导致核酸条带扩散，反而使条带不清晰。通过电泳可以根据核酸条带的位置和亮度等检测核酸的大小和纯度。26.对于新开发的核酸检测方法，需要进行性能验证，不包括以下哪个方面？（）A.灵敏度B.特异性C.经济性D.重复性答案：C解析：新开发的核酸检测方法性能验证主要包括灵敏度、特异性、重复性等方面，以确保检测方法的准确性和可靠性。经济性虽然在实际应用中是需要考虑的因素，但不属于方法性能验证的范畴。27.核酸检测结果为阴性，但临床症状高度怀疑感染时，应（）A.直接排除感染B.更换检测方法或重新采样检测C.按照阴性结果进行治疗D.忽略临床症状答案：B解析：当核酸检测结果为阴性但临床症状高度怀疑感染时，可能是检测方法的局限性或采样不当等原因导致假阴性，应更换检测方法或重新采样检测，而不能直接排除感染、按照阴性结果治疗或忽略临床症状。28.在核酸检测中，假阳性结果可能是由于（）引起的。A.样本中核酸含量过低B.样本被污染C.检测方法灵敏度不够D.扩增循环数过少答案：B解析：样本被污染，如被其他病原微生物的核酸污染，可能会导致检测出现假阳性结果。样本中核酸含量过低、检测方法灵敏度不够、扩增循环数过少一般会导致假阴性结果。29.以下哪种酶在PCR反应中起关键作用？（）A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆转录酶答案：C解析：TaqDNA聚合酶是PCR反应中用于合成新DNA链的关键酶，它能在高温下保持活性，使PCR反应能够在高温变性、低温退火、中温延伸的循环中进行。限制性内切酶用于切割DNA；DNA连接酶用于连接DNA片段；逆转录酶用于将RNA逆转录为cDNA，在RT-PCR中起作用。30.核酸检测实验室应配备的生物安全设备不包括（）A.生物安全柜B.高压灭菌器C.离心机D.洗眼器答案：C解析：生物安全柜用于操作可能产生气溶胶的样本，防止操作人员接触病原微生物；高压灭菌器用于对实验废弃物和器材进行灭菌处理；洗眼器在操作人员眼睛接触到危险物质时可用于冲洗眼睛，这些都是生物安全设备。离心机主要用于分离物质，不属于生物安全防护设备。二、多选题（每题2分，共40分）1.常见的病原微生物核酸检测方法有（）A.PCRB.核酸杂交C.基因测序D.免疫荧光法答案：ABC解析：PCR、核酸杂交、基因测序均为常见的病原微生物核酸检测方法。免疫荧光法是基于抗原-抗体反应的免疫学检测方法，不属于核酸检测方法。2.核酸提取的步骤通常包括（）A.细胞裂解B.去除蛋白质C.核酸沉淀D.核酸洗涤和溶解答案：ABCD解析：核酸提取一般先进行细胞裂解使核酸释放出来，然后去除蛋白质等杂质，接着通过沉淀的方法将核酸从溶液中分离出来，最后对沉淀的核酸进行洗涤去除残留杂质并溶解于适当的缓冲液中。3.实时荧光定量PCR的优点有（）A.灵敏度高B.特异性强C.可定量检测D.无需电泳检测答案：ABCD解析：实时荧光定量PCR具有灵敏度高、特异性强的特点，能够通过Ct值等对样本中的核酸进行定量检测，且在扩增过程中实时监测荧光信号，无需电泳检测即可得出结果。4.以下哪些病毒的核酸类型为DNA？（）A.水痘-带状疱疹病毒B.脊髓灰质炎病毒C.单纯疱疹病毒D.巨细胞病毒答案：ACD解析：水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、巨细胞病毒均为DNA病毒，其遗传物质为DNA。脊髓灰质炎病毒是RNA病毒。5.在核酸检测中，引物设计的原则包括（）A.引物长度适宜B.避免引物自身形成二级结构C.引物的GC含量适当D.引物与模板的特异性结合答案：ABCD解析：引物长度一般在18-25bp较为适宜；引物自身不能形成二级结构，否则会影响引物与模板的结合；引物的GC含量一般在40%-60%较合适；引物要能与模板特异性结合，以保证扩增的准确性。6.核酸检测样本采集时，需要注意的事项有（）A.严格遵守无菌操作原则B.采集部位准确C.样本量足够D.及时送检答案：ABCD解析：样本采集时严格遵守无菌操作原则可防止样本被污染；采集部位准确才能采集到含有目标病原微生物的样本；样本量足够才能保证检测的准确性；及时送检可避免样本中核酸降解等影响检测结果。7.基因测序技术的应用包括（）A.病原微生物的鉴定B.基因突变检测C.疾病的诊断和预后评估D.药物研发答案：ABCD解析：基因测序可以确定病原微生物的基因序列，用于病原微生物的鉴定；能检测基因突变情况；在疾病的诊断和预后评估方面有重要作用，例如检测肿瘤相关基因的突变；也可用于药物研发，了解药物作用靶点等。8.多重PCR相对于普通PCR的优势有（）A.可同时检测多种病原微生物B.节省时间和成本C.提高检测的灵敏度D.减少样本用量答案：ABD解析：多重PCR可在一个反应体系中同时扩增多个基因片段，从而同时检测多种病原微生物，节省了时间和成本，也减少了样本用量。但多重PCR并不一定能提高检测的灵敏度，有时还可能因引物间的相互作用等影响灵敏度。9.核酸检测实验室的分区包括（）A.样本制备区B.核酸扩增区C.产物分析区D.试剂准备区答案：ABCD解析：核酸检测实验室一般分为试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区和产物分析区，不同区域有不同的功能和操作要求，以防止交叉污染。10.以下哪些因素可能影响核酸检测结果的准确性？（）A.样本采集方法不当B.核酸提取效率低C.扩增条件不合适D.检测仪器故障答案：ABCD解析：样本采集方法不当可能导致采集的样本中不含目标病原微生物或含量过低；核酸提取效率低会使最终用于检测的核酸量不足；扩增条件不合适会影响PCR等扩增反应的进行；检测仪器故障会导致检测结果不准确。11.核酸杂交技术可用于（）A.病原微生物的检测B.基因表达分析C.基因突变检测D.蛋白质定量分析答案：ABC解析：核酸杂交技术可以通过核酸探针与目标核酸的杂交来检测病原微生物、分析基因表达情况以及检测基因突变。蛋白质定量分析一般采用免疫学方法等，不是核酸杂交技术的应用。12.实时荧光定量PCR中常用的荧光标记方法有（）A.SYBRGreen荧光染料法B.TaqMan探针法C.分子信标法D.荧光抗体法答案：ABC解析：SYBRGreen荧光染料法、TaqMan探针法、分子信标法均是实时荧光定量PCR中常用的荧光标记方法。荧光抗体法是免疫学检测方法，用于检测抗原或抗体。13.核酸保存的条件包括（）A.低温B.避免光照C.添加防腐剂D.合适的pH值答案：ABCD解析：核酸保存一般需要低温环境，以抑制核酸酶的活性；避免光照，防止核酸被光解；添加防腐剂可防止微生物污染；合适的pH值能保持核酸的稳定性。14.对于核酸检测结果的解释，需要考虑的因素有（）A.检测方法的灵敏度和特异性B.临床症状C.样本采集的质量D.患者的病史答案：ABCD解析：检测方法的灵敏度和特异性会影响检测结果的准确性；临床症状可辅助判断检测结果的意义；样本采集质量不佳可能导致假阴性或假阳性结果；患者的病史也有助于对检测结果进行综合分析。15.以下哪些细菌可以采用核酸检测方法进行诊断？（）A.肺炎链球菌B.幽门螺杆菌C.大肠杆菌D.梅毒螺旋体答案：ABCD解析：肺炎链球菌、幽门螺杆菌、大肠杆菌、梅毒螺旋体均可采用核酸检测方法进行诊断，核酸检测可以快速准确地检测这些病原菌的存在。16.核酸电泳的用途包括（）A.检测核酸的大小B.检测核酸的纯度C.分离不同大小的核酸片段D.检测核酸的浓度答案：ABC解析：核酸电泳可以根据核酸在电场中的迁移情况检测核酸的大小，通过观察核酸条带的清晰度和有无杂质条带检测核酸的纯度，还能分离不同大小的核酸片段。但核酸电泳不能直接检测核酸的浓度，检测核酸浓度一般采用分光光度计等方法。17.核酸检测质量控制包括（）A.室内质控B.室间质评C.人员培训D.仪器校准答案：ABCD解析：室内质控用于保证同一实验室检测结果的稳定性和可靠性；室间质评用于评估不同实验室之间的检测差异；人员培训可提高检测人员的操作水平和质量意识；仪器校准能保证检测仪器的准确性，这些都是核酸检测质量控制的重要方面。18.新开发的核酸检测方法进行性能验证时，需要评估的指标有（）A.灵敏度B.特异性C.重复性D.线性范围答案：ABCD解析：新开发的核酸检测方法性能验证需要评估灵敏度、特异性、重复性等基本指标，线性范围也是重要的评估指标之一，它反映了检测方法在一定浓度范围内的准确性和可靠性。19.核酸检测中，防止交叉污染的措施有（）A.实验室分区操作B.使用一次性耗材C.严格遵守操作规程D.定期对实验室进行消毒答案：ABCD解析：实验室分区操作可避免不同操作区域之间的交叉污染；使用一次性耗材可防止样本之间的交叉污染；严格遵守操作规程能规范操作流程，减少污染的可能性；定期对实验室进行消毒可消除环境中的病原微生物，防止污染后续样本。20.以下关于逆转录PCR（RT-PCR）的描述，正确的有（）A.先将RNA逆转录为cDNAB.可用于检测RNA病毒C.需要逆转录酶D.不需要引物答案：ABC解析：RT-PCR首先需要将RNA逆转录为cDNA，这一过程需要逆转录酶的参与，可用于检测RNA病毒。在逆转录和后续的PCR扩增过程中都需要引物，引物用于引导逆转录和PCR反应的进行。三、简答题（每题10分，共30分）1.简述核酸提取的基本原理和主要步骤。答：核酸提取的基本原理是通过物理、化学或酶学的方法破坏细胞结构，使核酸从细胞中释放出来，然后去除蛋白质、多糖等杂质，最后将核酸从溶液中分离出来。主要步骤包括：（1）细胞裂解：使用裂解液（如含有去污剂、蛋白酶等成分）破坏细胞膜和核膜，使核酸释放到溶液中。（2）去除蛋白质：可采用酚-氯仿抽提、蛋白酶K消化等方法去除蛋白质，使核酸与蛋白质分离。（3）核酸沉淀：向含有核酸的溶液中加入适量的盐和有机溶剂（如异丙醇或乙醇），使核酸沉淀下来。（4）核酸洗涤：用70%乙醇等洗涤沉淀的核酸，去除残留的盐和杂质。（5）核酸溶解：将洗涤后的核酸沉淀溶解于适当的缓冲液中，以便后续的检测或分析。2.实时荧光定量PCR技术与普通PCR技术相比，有哪些优点？答：实时荧光定量PCR技术与普通PCR技术相比，具有以下优点：（1）灵敏度高：实时荧光定量PCR可以检测到极少量的核酸模板，能够检测到低拷贝数的目标核酸，